三叶因子-2过表达对胃癌细胞株AGS增殖的影响

目的探讨三叶因子-2(trefoil factor family 2,TFF2)瞬时过表达对胃癌细胞增殖的影响及其机制。方法以真核表达质粒pcDNA3.1-Tff2转染AGS细胞,通过Western blot检测TFF2蛋白的表达,采用CCK-8检测细胞增殖能力的变化,Annexin V/PI法检测其凋亡。结果 pcDNA3.1-Tff2转染AGS细胞后TFF2蛋白表达水平较pc DNA3.1空质粒对照组升高5倍以上,pc DNA3.1-Tff2转染组AGS细胞增殖受到明显抑制,CCK-8实验96 hOD_(490nm)吸光度值较pc DNA3.1空质粒组显著下降(0.296 vs 2.108,P<0.01),凋亡率显著升高[(15.1%±1.21%)vs(5.49%±0.32%),P<0.01]。结论 TFF2在胃癌细胞中过表达可抑制其增殖并促进其凋亡,补充外源性TFF2可能成为一种有效抑制胃癌进展的治疗途径。

Neuropilin-1的干扰RNA对胃癌细胞株AGS生物学行为的影响

目的:探讨神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP-1)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人胃腺癌细胞株AGS某些生物学行为的影响。方法:通过脂质体lip-2000分别将NRP-1特异性siRNA、control siRNA转染入人胃腺癌AGS细胞株作为转染组、无意义序列组,加入PBS的细胞作为空白对照组,采用MTT法检测三组细胞24h、48h、72h的增殖情况;Transwell小室侵袭和迁徙实验检测细胞的迁徙和侵袭能力。结果:转染后,转染组细胞的增殖能力在24h、48h和72h与对照组相比,均显著下降(P=0.00)。小室迁徙及侵袭实验表明:与对照组相比,转染组的胃癌AGS细胞迁徙能力显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。转染组的胃癌AGS细胞侵袭能力显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:Neuropilin-1的siRNA能够明显影响人胃癌细胞株AGS的某些生物学行为。

miRNA-24通过靶向CARMA3基因调控胃癌AGS细胞的增殖和凋亡

目的:探讨miRNA-24对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的作用机制。方法:实时定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测不同胃癌细胞株(AGS、MKN74、HGC27)和胃黏膜上皮GES-1细胞中miRNA-24的表达水平。建立miRNA-24过表达的AGS细胞株,采用CCK-8法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,Western blotting检测细胞周期和凋亡相关cyclin D1、CDK2、Bcl-2、p-IκB-α/IκB-α和p-Rb/Rb蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因分析法预测和验证miRNA-24可能的靶基因。结果:3株胃癌细胞中miRNA-24的表达均低于GES-1 cell。转染miRNA-24 mimic(miR-24组)48 h后AGS细胞增殖活力显著低于miR-NC组[(119.62±12.63)%vs(147.79±11.89)%,P<0.05],并出现周期阻滞,且早期和晚期细胞凋亡率明显较miR-NC组上升[早期凋亡率:(11.32±2.27)%vs(0.57±0.08)%;晚期凋亡率:(15.56±2.27)%vs(0.85±0.16)%,均P<0.05]。转染miRNA-24 mimic后,细胞中cyclin D1、CDK2、Bcl-2及p-Rb的蛋白表达水平均较miR-NC组显著降低,p-IκB-α蛋白的表达水平较miR-NC组显著上升。共转染miRNA-24 mimic和miRNA-24可能作用靶点CARMA3基因过表达质粒的miR-24+pc DNA-CARMA3组AGS细胞CARMA3蛋白表达较miR-24组明显增加(1.74±0.09 vs 1.03±0.06,P<0.05)。miR-24+pc DNA3-CARMA3组AGS细胞48 h增殖活力较miR-24组显著升高[(137.85±15.34)%vs(102.31±11.23)%,P<0.05];而miR-24+pc DNA3-CARMA3组AGS细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均较miR-24组显著降低[早期凋亡率:(4.24±0.56)%vs(11.32±2.27)%,P<0.05;晚期凋亡率:(6.38±0.63)%vs(15.56±2.27)%,P<0.05]。CARMA3过表达可部分逆转miRNA-24对胃癌AGS细胞增殖及凋亡的作用。结论:miRNA-24可通过靶向CARMA3基因抑制胃癌细胞的增殖、促进其凋亡。

阿霉素和长春新碱对pRb-胃癌细胞株的影响

目的:探索一种对Rb基因表达异常之胃癌细胞的化疗方案。方法:用Rb鄄CMV质粒转染Rb表达阴性的胃癌AGS细胞株,然后将25ng/ml阿霉素和100ng/ml长春新碱序贯加入两组细胞,应用MTT、流式细胞技术来测定转染前后此细胞株对序贯用药后的活性及细胞周期变化。结果:预先作用的阿霉素使Rb阳性胃癌AGS细胞阻滞于细胞周期的G1/S期,而不影响Rb阴性胃癌AGS细胞增殖。阿霉素和长春新碱序贯用药对Rb阴性胃癌AGS细胞有显著细胞毒性作用,而对Rb阳性胃癌AGS细胞的毒性作用轻微。结论:由于绝大多数正常组织的Rb是正常表达,而在胃癌中表达大多是阴性,故此联合用药有望用于Rb表达阴性胃癌的治疗。