力达霉素诱导人胃癌BGC823细胞凋亡和抑制裸鼠移植瘤生长

观察力达霉素(LDM)对人胃癌BGC823细胞的诱导凋亡作用及体内抗肿瘤活性。采用MTT法观察LDM对人胃癌BGC823细胞增殖的抑制作用。利用Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测细胞凋亡的改变。采用Western blotting法检测细胞中VEGF蛋白的表达情况。建立裸鼠胃癌皮下移植瘤模型,观察LDM的体内抗肿瘤活性。LDM能够明显抑制BGC823细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞VEGF蛋白的表达,抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长。LDM剂量0.02和0.04 mg.kg-1的抑瘤率分别为57%和72%(P<0.01)。LDM可诱导胃癌细胞凋亡并抑制裸鼠移植肿瘤的生长。

白屈菜红碱对人胃癌BGC823细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的观察白屈菜红碱(che lerythrine)对人胃癌BGC 823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法通过M TT实验检测白屈菜红碱对细胞生长的抑制率,AO/EB的荧光核染色观察细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果M TT实验显示白屈菜红碱抑制BGC 823细胞的生长呈时间、浓度依赖的方式,显微镜下观察到AO/EB的荧光核染后凋亡的细胞,琼脂糖凝胶电泳出现DNA的片段化,在白屈菜红碱质量浓度为1.5、2.0、2.5μg/mL且培养24 h时,流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在S和G2/M期。结论白屈菜红碱能有效地诱导BGC 823细胞凋亡,而且其诱导的凋亡具有周期依赖性。

香菇多糖联合多西他赛对胃癌BGC823细胞增殖的影响

目的:观察香菇多糖单药及联合多西他赛抑制胃癌细胞BGC823增殖的作用。方法:分别用不同浓度的香菇多糖、多西他赛和香菇多糖联合多西他赛处理胃癌细胞BGC823。香菇多糖终浓度分别为1.560μg/ml,3.125μg/ml,6.250μg/ml,12.500μg/ml。多西他赛终浓度分别为0.625μg/ml,1.250μg/ml,2.500μg/ml,5.000μg/ml。MTT法检测各组细胞增殖情况;同时用Annexin V/PI法检测各组细胞的凋亡。结果:单药香菇多糖能抑制BCG823细胞的增殖,不同浓度(由高到低)对BGC823细胞的增殖抑制率分别为67.7%,56.0%、42.1%和23.2%,与阴性对照组比较有统计学意义(P<0.05)。不同浓度香菇多糖联合多西他赛能增强多西他赛对BGC823细胞增殖的抑制作用。单药香菇多糖能增加BGC823细胞的细胞凋亡率,与多西他赛联用使细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:香菇多糖能抑制胃癌BGC823细胞的增殖,并能显著增强多西他赛抑制胃癌细胞BGC823的增殖作用。

Chk1和Chk2高表达人胃癌BGC823细胞的建立与鉴定

细胞周期检测点Chkl和Chk2在参与G2/M期起着重要作用,本研究构建Chk1/2的真核表达载体和建立高表达Chk1/2基因人胃癌BGC823细胞,进一步证明Chk1/2高表达对BGC823细胞G2/M期的影响。根据NCBI Gen Bank Chk1/2基因全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点。从人胃癌细胞中提取mRNA作为模板合成Chk1/2 cDNA第一链,并扩增目的基因全表达序列片断,双酶切后定向克隆至pcDNA3.1真核表达载体,经氨苄青霉素筛选阳性重组质粒,菌液PCR及测序对重组质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染BGC823细胞,经G418筛选后,RT-PCR及Western blot检测表达产物。结果显示,菌落特异性PCR表明克隆的基因片断分别为1.4 kb和1.6 kb,经测序与NCBIBLAST分析证实为Chk1和Chk2基因。稳定转染空载体pcDNA3.1的细胞克隆株和稳定转染重组质粒的BGC823细胞,经RT-PCR及Western blot鉴定,Chk1/2在BGC823细胞中的表达较对照组与空载体组明显增加(P<0.05)。流式细胞术检测显示,Chk1转染组G2/M细胞较对照组与空载体组明显增加(P<0.05),而Chk2转染组G2/M细胞无明显差异(P>0.05)。上述结果表明,成功构建pcDNA3.1/Chk1与pcDNA3.1/Chk2真核表达载体和Chk1与Chk2高表达的BGC823细胞,Chk1高表达可阻滞BGC823细胞于G2/M。

沉默Chk1基因对DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期的影响

目的:探讨沉默Chk1基因在二烯丙基二硫(DADS)诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞中的作用。方法:采用RNAi技术沉默BGC823细胞Chk1基因,q-PCR与Western blot检测Chk1 mRNA与蛋白表达。流式细胞术检测DADS作用与Chk1基因沉默BGC823细胞周期分布情况。Western blot检测Cdc25C与cyclin B1表达。结果:流式细胞术显示,15 mg·L-1DADS作用BGC823细胞12、24、36、48 h后,G2/M期细胞呈时间依赖性增加(P<0.05)。Chk1沉默BGC823细胞Chk1 mRNA与蛋白表达下调(P<0.05)。沉默Chk1后,G2/M期细胞较对照组降低(P<0.05)。DADS处理后,对照组G2/M细胞高于Chk1沉默组(P<0.05)。Chk1基因沉默后Cdc25C和Cyclin B1表达较对照组增加(P<0.05)。DADS处理对照组后,Cdc25 C和Cyclin B1表达较未处理组降低(P<0.05)。DADS处理Chk1沉默组Cdc25 C和Cyclin B1表达较Chk1沉默下调(P<0.05)。结论:Chk1沉默可通过促进Cdc25C和Cyclin B1表达减弱DADS阻滞G2/M的作用,DADS阻滞G2/M的检查点是Chk1。

DADS通过Rac1/LIMK1/cofilin1通路增强沉默LIMK1抑制人胃癌BGC823细胞迁移侵袭

探讨二烯丙基二硫(DADS)通过Rac1/LIMK1/cofilin1通路对沉默LIMK1抑制BGC823细胞迁移侵袭的影响。划痕实验和侵袭实验观察迁移和侵袭能力;RT-PCR、Western blot、免疫组化检测LIMK1、Rac1、Rock1、Pak1与Cofilin1和p-Cofilin1表达。结果显示,DADS处理沉默组疤痕距离较对照组和沉默组增加(P<0.05)。DADS处理沉默组穿膜细胞低于对照组、空载体组与沉默组(P<0.05)。沉默组LIMK1表达低于对照组和空载体组,DADS后,各处理组低于处理前各组(P<0.05)。并且,沉默组、对照组和空载体组的Rac1、Rock1、Pak1与p-cofilin1表达下调(P<0.05)。表明DADS可增强沉默LIMK1抑制BGC823细胞迁移侵袭,机制可能与阻断Rac1/LIMK1/cofilin1通路有关。

Chk1与Chk2高表达对DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期的影响

目的:在建立Chk1/2基因高表达人胃癌BGC823细胞的基础上,探讨Chk1/2基因在二烯丙基二硫(DADS)诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞中的作用。方法:采用流式细胞术检测DADS作用于Chk1/2高表达BGC823细胞周期分布情况。Western blot检测Chk1、p-Chk1、Chk2、p-Chk2、Cdc25C与Cyclin B1表达变化。结果:流式细胞术显示,Chk1高表达组G2/M期细胞较对照组与空载体组增加(P<0.05)。而15 mg·L^(-1) DADS处理后,各组G2/M期细胞较处理前增加,Chk1高表达组较空载体组差异有统计学意义(P<0.05)。Chk2高表达组G2/M期细胞较对照组与空载体组差异无统计学意义(P>0.05)。而DADS处理Chk2高表达组后,G2/M期细胞较对照组与空载体组差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot显示,Chk1/2蛋白及p-Chk2表达水平不受DADS的影响,但p-Chk1呈时间依赖性上调(P<0.05)。DADS处理Chk1高表达BGC823细胞12、24、36、48 h后,Cdc25C磷酸酶与Cyclin B1表达较对照组呈时间依赖性下降(P<0.05)。结论:DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期与激活Chk1/Cdc25C/Cyclin B1通路有关。Chk1高表达可增强DADS阻滞G2/M期细胞的作用,而Chk2高表达对DADS无影响。

沉默Chk2基因对DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期的影响

细胞周期检测点激酶1/2(Chk1/2)在参与G2/M期起着重要作用,本研究探讨沉默Chk2基因对二烯丙基二硫(DADS)诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞的影响。采用RNAi技术沉默BGC823细胞Chk2基因,q-PCR与Western blot检测Chk2 mRNA与蛋白表达。流式细胞术检测DADS与Chk2沉默BGC823细胞周期分布情况。Western blot检测Cdc25C与cyclin B1表达。流式细胞术显示,DADS作用BGC823细胞后,G2/M期细胞呈时间依赖性增加(P<0.05)。Chk2沉默BGC823细胞Chk2 mRNA与蛋白表达下调(P<0.05)。Chk2沉默组G2/M期细胞较对照组差异无显著性(P>0.05)。DADS处理Chk2沉默组与对照组后,两者G2/M期细胞差异无显著性(P>0.05),而较未处理前有明显差异(P<0.05)。Chk2沉默后,CDC25C和Cyclin B1表达较对照组无明显差异(P>0.05)。但是,DADS处理对照组与Chk2沉默组后,CDC25C和Cyclin B1表达较处理前明显降低(P<0.05)。表明Chk2沉默对DADS阻滞BGC823细胞G2/M作用没有影响,DADS阻滞G2/M的检查点可能不是Chk2。

大蒜素对胃癌BGC823细胞株PPARγ基因的影响

目的观察大蒜素对胃癌BGC823细胞生长以及对PPARγmRNA表达的影响,探讨大蒜素抑制BGC823细胞增殖的可能作用机制。方法不同浓度的大蒜素处理胃癌BGC823细胞,MTT法观察细胞增殖抑制作用;RT-PCR法检测胃癌BGC823细胞中PPARγmRNA表达的变化。结果大蒜素抑制BGC823细胞增殖,呈浓度和时间依赖性;大蒜素作用72h后明显抑制胃癌BGC823细胞PPARγmRNA表达,呈浓度依赖性。结论大蒜素可能通过下调PPARγmRNA表达抑制胃癌BGC823细胞增殖,发挥抗肿瘤作用。

查尔酮对人胃癌BGC823细胞生物学行为影响的初步研究

目的:研究查尔酮对人胃癌BGC823细胞生长抑制、细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡的作用,为寻找预防肿瘤药物提供一定的线索。方法:细胞生长抑制采用MTT比色法检测,细胞周期阻滞用流式细胞仪检测,细胞凋亡用流式细胞仪及琼脂糖凝胶电泳检测。结果:浓度为6.25、12.5、25和50μmol／L的查尔酮呈剂量依赖性抑制BGC823细胞增殖。查尔酮诱导细胞凋亡率是对照的2.71、2.79、4.74倍。琼脂糖凝胶电泳可观测到12.5／μmol／L、25μmol／L有DNA"梯子"现象。结论:查尔酮可以抑制BGC823细胞生长,并呈剂量-反应关系。查尔酮有将BGC823细胞增殖周期阻滞在G0/G1期趋势,查尔酮可以抑制肿瘤细胞的生长和增殖。

佛波酯不同浓度和不同时间对人胃癌BGC823细胞的MMP-9表达

目的观察佛波酯（12-myristate13-acetate，PMA）不同浓度和不同时间对人体胃癌BGC823细胞MMP-9表达的影响，探讨PMA能诱导MMP-9表达增加的最佳浓度和诱导时间。方法采用mRNA（RealTimeRT-PCR）蛋白（West-blot）明胶酶活性分析（Zymography）观察不同浓度的PMA作用于人胃癌BGC823细胞不同时间后的MMP-9表达。结果PMA浓度1．5mg／L、3．0mg／L、6．Omg／L、12．Omg／L、24．Omg／L24h时对人胃癌BGC823细胞作用后MMP-9表达率分别为（19．1±1．27）％、（25．3±5．7）％、（52．6±4．8）％、（67．94-3．6）％、（91．34-2．3）％；48h时分另0为（21．14-1．9）％、（29．2±3．6）％、（56．6±4．3）％、（76．1±5．1）％、（93．34-2．9）％；72h时分另l为（23．44-3．7）％、（37．84-4．2）％、（60．3±14．5）％、（83．6±18．1）％、（95．64-1．3）％。结论PMA对MMP-9表达的影响浓度剂量和时间依赖性，最佳浓度24．0mg／L，最佳时间24h。

沉默LIMK1抑制人胃癌BGC823细胞迁移与侵袭

目的:探讨沉默LIMK1对人胃癌BGC823细胞迁移与侵袭的影响。方法:RNA干扰技术沉默人胃癌BGC823细胞LIMK1基因,RT-PCR和Western blot检测干扰效率;MTT、细胞划痕和侵袭实验分别检测沉默LIMK1对人胃癌BGC823细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。结果:成功构建沉默LIMK1基因稳定人胃癌BGC823细胞。MTT显示,LIMK1沉默组在24、48、72与96 h较对照组与空载体组的抑制率分别为1.67%、1.45%、0.25%与2.2%和1.60%、1.29%、0.25%与2.2%(P<0.05)。划痕实验显示,12 h和24 h后,沉默组疤痕距离分别为(0.66±0.03)cm与(0.30±0.09)cm,较对照组(0.35±0.03)cm与(0.10±0.03)cm呈时间依赖性降低(P<0.05)。沉默组穿膜细胞数(35±2.86)个,少于对照组(66±3.56)个及空载体组(65±4.35)个(P<0.05)。结论:沉默LIMK1可抑制人胃癌BGC823细胞增殖、迁移与侵袭。

蒲公英对胃癌BGC823细胞迁移、侵袭作用的影响

目的研究蒲公英对胃癌BGC823细胞迁移、侵袭作用的影响及其机制。方法不同浓度蒲公英处理细胞后,用MTS、Transwell小室、荧光实时定量PCR等方法分别检测胃癌BGC823细胞的增值、迁移、侵袭作用以及基质金属蛋白酶2(MMP2)基因的表达。结果 2.5 mg/ml蒲公英组抑瘤率为11.27%;对照组迁移细胞数为362个,2.5 mg/ml蒲公英组迁移细胞数为234个(P<0.05);对照组侵袭细胞数为266个,2.5 mg/ml蒲公英组侵袭细胞数为183个(P<0.05);荧光实时定量PCR结果显示,2.5 mg/ml蒲公英组胃癌BGC823细胞MMP2基因表达下调。结论蒲公英可抑制胃癌BGC823细胞生长,使胃癌BGC823细胞的迁移、侵袭作用减弱,其机制可能是蒲公英引起MMP2基因表达下降所致。

斑蝥酸钠诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的实验研究

目的观察斑蝥酸钠体外对人胃癌BGC823细胞凋亡的影响。方法应用MTT法及流式细胞仪检测、分析斑蝥酸钠对人胃癌BGC823细胞的生长和凋亡的影响。结果不同剂量斑蝥酸钠作用24 h均可使人胃癌BGC823细胞生长明显抑制(P<0.01),并出现典型的凋亡峰,细胞增殖阻滞于G1期。结论斑蝥酸钠对人胃癌BGC823细胞生长有抑制作用,可诱导胃癌细胞凋亡。

431对人胃癌BGC823细胞的生长抑制作用及机制研究

431是喹唑啉衍生物，前期研究表明，其对多种肿瘤细胞株均有较好的生长抑制作用，但机制不明。为了探寻其抗肿瘤作用机制，我们应用MTT法检测了431对不同组织来源肿瘤细胞的生长抑制作用，并确定了对其最为敏感的人胃癌BGC823细胞为研究对象，拟对其抗肿瘤作用机制进行深入探讨。首先，我们以细胞周期为切入点，

干扰LASP1基因表达对胃癌细胞BGC823增殖、迁移及侵袭能力的影响

背景与目的:LASP1是一种新的肌动蛋白结合蛋白,参与细胞骨架的重组调控及细胞迁移,在多种恶性肿瘤中高表达,并与肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关。但目前LASP1在胃癌发生、发展中的作用少见报道。该研究旨在探讨LASP1在胃癌增殖和侵袭中的作用及分子机制。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测LASP1在不同胃癌细胞系中的表达,应用RNA干扰技术抑制BGC823细胞中LASP1的表达,采用RTFQ-PCR和Western blot检测转染后LASP1的表达,应用体外增殖、迁移和侵袭实验检测转染后细胞的增殖、迁移和侵袭能力,通过F-actin聚合实验检测细胞的F-actin的聚合能力,采用Western blot检测转染前后BGC823细胞中Akt的磷酸化情况。结果:LASP1在胃癌BGC823细胞中高表达。RNA干扰技术沉默LASP1基因后,干扰组与对照组相比,LASP1的m RNA和蛋白表达水平均明显下降。细胞增殖实验显示,干扰组细胞的增殖率低于对照组(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验发现,与对照组相比,干扰组细胞的迁移和侵袭能力均明显降低(P<0.05);在干扰组细胞内的F-actin聚合量比对照组减少(P<0.05);在干扰组细胞内Akt磷酸化受到抑制。结论:LASP1的表达降低可以抑制胃癌BGC823细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,LASP1通过调节F-actin的聚合和Akt磷酸化从而影响胃癌细胞的侵袭、转移。

亚硒酸钠抑制人胃癌BGC823细胞的作用及其机制探讨

目的观察亚硒酸钠对体外培养的人胃癌BGC823细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法用不同浓度(0、4.0、8.0、10.0μmol/L)的亚硒酸钠处理BGC823细胞24h后,采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT法)检测亚硒酸钠对细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪PI染色检测细胞周期,AnnexinV/PI双染法定量检测BGC823细胞凋亡率,FAS蛋白染色流式细胞仪定量检测各实验组细胞间FAS蛋白表达,荧光显微镜观察DAPI染色细胞形态。结果亚硒酸钠可明显抑制BGC823胃癌细胞的增殖,呈剂量依赖性;亚硒酸钠可阻滞细胞于S期和增加BGC823胃癌细胞凋亡率并随剂量增大作用增强;DAPI染色观察到亚硒酸钠给药组出现细胞核浓缩、边缘化以及凋亡小体等细胞凋亡的形态特征;亚硒酸钠可呈剂量依赖地增强FAS蛋白表达。结论亚硒酸钠可显著抑制人BGC823胃癌细胞的增殖,使细胞阻滞于S期,并可诱导细胞凋亡,其机制可能与上调FAS蛋白有关。

蜂毒素对人胃癌BGC_(823)细胞生长抑制作用的实验研究

目的研究蜂毒素对人胃癌BGC823细胞株生长的影响。方法应用MTT法观察不同终质量浓度蜂毒素对人胃癌BGC823细胞株体外增殖的影响。结果不同剂量蜂毒素作用24、48、72h均可使人胃癌BGC823细胞株生长出现抑制,且抑制作用与给药质量浓度成正比。结论蜂毒素对人胃癌BGC823细胞的生长具有抑制作用。

调控胃癌BGC823细胞PTEN和Livin基因表达的生物学效应

目的 观察在体外培养胃癌BGC823细胞中增加FTEN基因表达,同时沉默Livin基因表达,对胃癌细胞增殖、细胞凋亡以及侵袭转移能力的影响.方法 将已构建的表达FTEN基因的真核表达载体pCL-neo-PTEN、沉默Livin基因的siRNA载体pRNAT-U6.1-Livin、既表达PTEN又沉默Livin重组载体pCL-neo-PTEN-siLivin脂质体包裹后分别转染入胃癌BGC823细胞.逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测PTEN和Livin mRNA和蛋白表达;测定细胞生长曲线和Caspase-3、9活性;检测细胞凋亡和体外侵袭能力.结果 转染pCL-neo-PTEN-siLivin的胃癌BGC823细胞PTENmRNA（0.897±0.112）和蛋白都呈高表达,Livin mRNA（0. 071±0.009）和蛋白都呈表达沉默.调控组细胞增殖速度减缓、穿透Matrigel的细胞数下降（23.1±3.5）;凋亡率（16.72±1.84）、Caspase-3、9活性增加（1.88±0.21、1.07±0.18）,与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;对BGC823细胞增殖和转移的抑制效果均优于单独增加PTEN基因表达和单独沉默Livin基因表达的效果.结论 同时增加PTEN基因表达和沉默Livin基因表达可有效抑制胃癌BGC823细胞的生长和转移.

顺铂与三甲氧基二苯乙烯对胃癌BGC823细胞作用的研究

目的:研究三甲氧基二苯乙烯与顺铂对人胃癌BGC823细胞的抑制作用。方法:设空白对照组、顺铂治疗组、三甲氧基二苯乙烯治疗组、顺铂及三甲氧基二苯乙烯联合治疗组。用MTT法测定顺铂和三甲氧基二苯乙烯对细胞的抑制作用;用电镜、流式细胞仪观察其细胞变化。结果:顺铂与三甲氧基二苯乙烯合用,细胞存活率较单用时明显降低。顺铂100μg/L细胞存活率为(67.23±8.91)%,三甲氧基二苯乙烯100μg/L细胞存活率为(51.42±9.56)%;细胞存活率在合并用药时细胞存活率明显下降,顺铂10μg/L和三甲氧基二苯乙烯10μg/L的细胞存活率为(43.62±8.34)%,浓度150μg/L时细胞存活率最低为(17.33±7.93)%。联合用药后,顺铂使用量的IC50是(110.0±9.8)μg/L,三甲氧基二苯乙烯使用量的IC50是(18.0±10.0)μg/L,增效倍数分别为2.51、4.03合并指数CI50是0.58,CI50<0.95。细胞生长多停滞在S期(58.0±4.0)%。结论:顺铂对胃癌BGC823细胞有抑制作用,少量的顺铂与三甲氧基二苯乙烯合用后可达到大剂量顺铂单药化疗的效果,产生了协同作用。