胃肠道平滑肌细胞作为eNOS基因转移靶细胞的研究

目的:构建内皮型一氧化氮合酶(eNOS)腺病毒表达载体,介导eNOS在胃肠道平滑肌细胞中稳定表达并评价表达产物eNOS的酶学活性.方法:构建牛eNOS的重组腺病毒表达载体Ad-eNOS,感染体外培养的猫下段食管及胃底部平滑肌细胞,采用Western blot、RT-PCR技术检测eNOS在平滑肌细胞中的表达,测定基因转移后NOS活性以及一氧化氮(NO)产量,并研究不同施加因素对NOS活性及NO合成的影响.结果:Ad-eNOS可高效感染体外培养的胃肠平滑肌细胞(MOI=50,感染效率=74%),Western blot、RT-PCR结果证实eNOS在平滑肌细胞中高效表达.Ad-eNOS感染细胞后基础NOS活性比感染前显著增高(93±13 vs 47±13 nkat/L,P＜0.05),培养液中累积的NO增加了3倍(45±13 vs16±7μmol/L,P＜0.05).分别加入L-精氨酸(10-4mol/L)、钙离子(10-4 mol/L)、EGTA(钙离子螯合剂,10-4 mol/L)及L-NAME(NOS抑制剂,10-3mol/L)后,NOS活性分别为94±8,173±25,29±6,58±11 nka/L,NO含量分别为48±14,106±18,6±2,17±11 μmol/L.结论:构建的重组腺病毒Ad-eNOS能够高效介导eNOS基因在消化道平滑肌细胞中表达,表达产物eNOS活性受钙离子浓度调节,其作用底物L-精氨酸并不是NO合成的限速步骤.

胃肠道平滑肌细胞培养及鉴定

胃肠道平滑肌原代细胞培养基本保留了体内生长特性,作为一种体外研究模型,在生理学、病理学、胃肠动力学和药物代谢动力学等较多研究领域显示出细胞株所不具备的优越性。本文就胃肠道平滑肌原代细胞的分离、培养、纯化和鉴定方法方面进行了综述,为研究消化系统疾病培养胃肠道平滑肌细胞方法的选择提供参考。

舒胃汤对功能性消化不良大鼠胃肠动力及ENS-ICC-SMC网络超微结构的影响

目的:观察舒胃汤对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)肝郁脾虚型大鼠胃肠动力及胃肠道神经-Cajal间质细胞-平滑肌(ENS-ICC-SMC)网络超微结构的影响,探讨舒胃汤治疗FD的机制。方法:将72只大鼠随机分为正常组、模型组、舒胃汤低剂量组(舒低组)、舒胃汤中剂量组(舒中组)和舒胃汤高剂量组(舒高组),莫沙比利组(西药组),每组12只。舒低、中、高分别给予舒胃汤7.67,15.34,30.68 g·kg-1,莫沙必利组予莫沙必利1.37 mg·kg-1。采用复合病因造模(慢性束缚应激+过度疲劳+饮食失节),造成FD肝郁脾虚证大鼠模型。造模后第3天各组给予相应药液,对照组和模型组每日予以蒸馏水(10 m L·kg-1),均为每日1次,持续14 d。检测大鼠胃内残留率,小肠推进率,电镜下观察大鼠胃窦部和十二指肠组织ENS-ICC-SMC网络超微结构。结果:与对照组比较,模型组胃排空延迟,胃内残留率升高,小肠推进率下降(P<0.05)。与模型组比较,舒高组、舒中组、莫沙必利组胃内残留率明显降低,小肠推进率明显升高(P<0.01)。与模型组比较,舒高组、舒中组、莫沙必利组ICC细胞形态改善,ICC周围神经末梢较丰富,ICC相互之间及ICC与平滑肌细胞之间联系紧密。结论:舒胃汤能够改善ENS-ICC-SMC网络超微结构之间的相互联系,改善胃肠动力,从而有效治疗FD。