新型TopoⅠ抑制剂CPUY013对胃腺癌细胞BGC823的体内外作用

探讨CPUY013在体内外对人胃腺癌BGC823细胞的抗肿瘤活性及其机制。采用MTT法、克隆原形成法检测CPUY013对BGC823细胞增殖的抑制作用;体外实验以pBR322DNA为底物,依据质粒的松弛和超螺旋形式在琼脂糖电泳上泳动度对药物抑制解旋的作用进行定性分析。用AO/EB荧光染色技术、DNA凝胶电泳及JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞凋亡。口服给药CPUY013后观察其对裸鼠移植瘤的生长抑制作用;用流式细胞术观察CPUY013对BGC823细胞周期的影响;采用Western blotting分别检测CPUY013处理后的BGC823细胞中TopoⅠ及凋亡相关蛋白表达的改变。结果表明,CPUY013呈明显的剂量依赖性抑制BGC823细胞的增殖。随着剂量的增加,CPUY013对TopoI松弛活性的抑制趋势增强。100μmol·L-1CPUY013和拓扑替康(TPT)对TopoⅠ松弛活性的抑制呈现相似的变化趋势。CPUY013可使大部分BGC823细胞阻滞在S期,并诱导细胞凋亡;出现DNA片段化,亚G1峰显著增加,线粒体膜电位降低,荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等。同时,CPUY013能明显抑制BGC823裸鼠移植瘤的生长,150mg·kg-1剂量组的瘤重抑制率为62.1%。CPUY013使BGC823细胞内TopoI和bcl-2蛋白表达均有所下调,p53和bax蛋白表达有明显上调趋势,bcl-2/bax比值明显降低,caspase-3蛋白表达增高。新型TopoⅠ抑制剂CPUY013在体内明显抑制移植瘤的生长,体外可诱导细胞凋亡从而抑制BGC823细胞增殖,其机制可能与抑制TopoI,从而下调bcl-2,上调bax和p53蛋白的表达有关。

大蒜素对人胃癌细胞BGC823 cyclin D1和p27^(Kip1)表达的影响

背景与目的:在研究大蒜素抑制人胃癌细胞BGC823恶性增殖,将其阻滞于G1期并诱导BGC823细胞凋亡的分子机制及其靶基因过程中,我们发现cyclinD1和p27Kip1蛋白在G1期阻滞中起重要作用。本实验从mRNA和蛋白水平探讨大蒜素对人胃癌细胞BGC823cyclinD1和p27Kip1表达水平的影响。方法:用25μg/ml大蒜素处理BGC823细胞,并分别提取对照组和大蒜素处理组的总RNA和总蛋白,然后采用RT-PCR和Westernblot法检测大蒜素处理前后cyclinD1和p27Kip1mRNA和蛋白的变化。结果:经25μg/ml大蒜素处理BGC823细胞24h,cyclinD1蛋白表达下调,p27Kip1蛋白表达上调,处理48h上述变化更明显。而mRNA水平未见明显改变。结论:大蒜素可影响cyclinD1和p27Kip1蛋白的表达,而不影响mRNA的转录。

人胃腺癌BGC823细胞Midkine高表达前后基因表达谱芯片分析

目的:用基因芯片技术分析、筛选Midkine高表达前后胃腺癌相关基因谱的差异表达。方法:建立Midkine高表达BGC823胃腺癌细胞系,提取细胞总RNA,逆转录Cy3、Cy5标记cDNA探针,应用晶芯表达谱芯片,分析差异表达的基因。结果:发现Midkine高表达前后BGC823胃腺癌细胞有显著性表达差异的基因共有550个,其中上调基因407个,下调基因143个。对550条差异表达基因进行初步功能分类分析,结果表明这些基因与Midkine促进胃腺癌发病机制存在相关性。结论:Midkine高表达前后BGC823胃腺癌细胞部分功能基因存在显著的表达差异,多数差异表达的基因参与细胞黏附、细胞骨架形成、细胞周期以及细胞代谢等过程。

穿心莲内酯体外对人胃腺癌BGC823细胞增殖凋亡的影响

目的探讨穿心莲内酯（andrographolide，AD）对人胃癌细胞株BGC-823细胞增殖、细胞周期以及细胞凋亡的影响。方法分别采用MTT法、流式细胞术和流式细胞仪AnnexinV／PI双染色法检测AD对BGC-823细胞体外增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响：应用光镜和透射电镜观察不同浓度的AD作用后BGC．823细胞形态学改变。结果各浓度组AD均对人低分化胃癌细胞株BGC-823的增殖有抑制作用。并具有时间和浓度依赖关系（均P〈0．05）。浓度7．5μg／ml以下的AD抑制效果较弱，而15．0-60．0μg／ml抑制效果显著提高（P〈0．05），60．0μg／ml以上抑制率增高不显著（P〉0．05）。24、48和72h的IC50分别为（35．3±4．3）、（25．5±3．5）和（18．2±2．7）μg／ml。BGC-823细胞经AD作用后，G0／G1期细胞的比例增加，S期和G2/M期细胞的比例下降，细胞被阻滞在G0／G1期，呈浓度依赖关系。AD浓度为7．5、10．0和15．0μg／ml组作用24h后，早期凋亡率分别为（19．3±4．7）％、（29．4±4．1）％和（52．7±6．7）％，晚期凋亡率为（10．8±1．8）％、（10．9±4．7）％和（14．7±4．8）％，均显著高于阴性对照组的早期凋亡率[（3．4±1．0）％]和晚期凋亡率[（4．1±0．7）％]，差异有统计学意义（均P〈0．05），并呈浓度依赖关系。结论AD能抑制BGC-823细胞增殖、阻滞其细胞周期在G0／G1期和诱导其细胞凋亡．是潜在的胃癌抗肿瘤中药制剂成分。

阻抑素基因在诱导胃癌BGC823细胞凋亡过程中的作用研究

目的:研究阻抑素(prohibitin,PHB)基因在诱导胃癌BGC823细胞凋亡过程中的作用。方法:使用RNA干扰技术和基因转染技术,分别获得PHB基因低表达和高表达的胃癌BGC823细胞。然后采用MTT法和FCM法分别检测PHB基因低表达和高表达的胃癌细胞的增殖率、细胞周期和凋亡情况,Western印迹法检测Bax、Bcl-2和细胞质内细胞色素c的表达水平,并且检测caspase-3和caspase-9的激活情况。结果:PHB基因转染胃癌BGC823细胞后,细胞生长速度减缓,G1期细胞所占比例明显下降,G2期细胞比例略有上升,S期细胞比例和细胞凋亡率明显上升,Bax表达上调,Bcl-2表达下调,细胞质内细胞色素c水平显著上升,caspase-3和caspase-9的激活程度增加。PHB基因特异性RNA干扰胃癌细胞BGC823后,细胞生长加速,G1期和G2期细胞所占比例变化不大,S期细胞比例略有上升,细胞凋亡率小幅下降,Bax表达下调,Bcl-2表达上调,caspase-3和caspase-9的激活程度减弱。结论:PHB是抑制胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡的重要因子之一,推测该作用可能是通过线粒体途径实现的。

小半夏加茯苓醇提物对HepG2、BGC823线粒体凋亡途径的影响

目的探讨小半夏加茯苓醇提物对人肝癌细胞HepG2和人胃腺癌细胞BGC823增殖抑制作用及线粒体凋亡途径的影响。方法运用CCK-8法检测HepG2、BGC823的增殖抑制情况,计算生长抑制率及半数抑制浓度;运用流式细胞术和实时荧光定量PCR检测HepG2、BGC823的线粒体跨膜电位和bax、cjun基因的表达情况。结果小半夏加茯苓醇提物对HepG2、BGC823均有显著的抑制作用(P<0.01),其半数抑制浓度分别为(781.50±13.00)μg/mL和(560.05±10.06)μg/mL;与空白对照组比,试验组HepG2的荧光强度升高(P<0.05),试验组BGC823的荧光强度显著升高(P<0.01);HepG2、BGC823试验组的bax、cjun基因的相对表达量与空白对照组比较,均显著升高(P<0.01)。结论小半夏加茯苓醇提物诱导HepG2、BGC823凋亡的机制可能与激活线粒体途径有关。

冬凌草甲素注射液对人胃腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的观察冬凌草甲素注射液对BGC823人胃腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用，并探讨其作用机制。方法建立裸鼠BGC823人胃腺癌移植瘤模型，并随机分为空白对照组、低剂量组和高剂量组，分别通过尾静脉注射生理盐水、冬凌草甲素注射液37．5mg·ks^-1·d^-1和冬凌草甲素注射液75nag·ks^-1·d^-1。10d后，剥出瘤块称移植瘤重量，光镜及电镜下观察移植瘤组织形态学及瘤细胞的超微结构变化，免疫组化SABC法检测移植瘤bcl-2、Bax、Fas和FasL蛋白的表达差异。结果冬凌草甲素注射液可抑制裸鼠BGC823人胃腺癌移植瘤的生长，低剂量组与高剂量组的抑瘤率分别为48．5％和70．7％。病理形态学显示，冬凌草甲素注射液作用后移植瘤出现细胞凋亡及组织坏死。免疫组化检测显示，冬凌草甲素注射液作用后瘤组织中bcl-2蛋白表达减少，Bax、Fas和FasL蛋白表达增加。结论冬凌草甲素注射液可显著抑制BGC823人胃腺癌裸鼠移植瘤的生长，其作用机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。

细胞毒性T淋巴细胞和细胞因子诱导杀伤细胞在荷人胃癌裸鼠体内的迁徙与分布

为了研究细胞毒性T淋巴细胞（cTL）和细胞因子诱导杀伤（CIK）细胞在荷人胃癌裸鼠体内的迁徙与分布特点，南开大学医学院普通外科武增瀛等采用皮下注射人低分化胃腺癌细胞株BGC-823的方法建立荷人胃癌裸鼠模型。将荷瘤裸鼠分为2组，每组9只，