云芝胞内胃蛋白酶抑制剂超声提取工艺研究

目的:采用超声波法提取云芝胞内胃蛋白酶抑制剂。方法:以单位体积破碎清液对胃蛋白酶的抑制单位为响应值,对超声波破细胞的影响条件如超声时间、超声功率、处理量、超声温度等进行研究。结果:云芝胞内胃蛋白酶抑制剂提取的最佳超声波破碎条件为:超声时间10min、超声功率300W、处理量40mL、超声温度20℃。结论:超声波法结合反复冻融可有效提取云芝胞内胃蛋白酶抑制剂。

一种云芝发酵所产胃蛋白酶抑制剂的纯化及部分性质研究

云芝发酵液经超声波细胞破碎,离心和大孔树脂脱色得上清液。上清液再经DEAE-52、Mono Q离子交换层析和UltroGel ACA-54凝胶过滤分离得到一种胃蛋白酶抑制剂。它的成分是蛋白质,经UltroGel ACA-54凝胶过滤和SDS-PAGE鉴定为单亚基,相对分子量为22.31 kDa。该抑制剂热稳定性良好,对胃酶有很强的抑制作用,半抑制浓度IC50值为29.26μg/mL,抑制类型属于非竞争和反竞争混合型抑制模式,其Ki值为0.996μmol/L。

云芝发酵产胃蛋白酶抑制剂的反应机理探讨

目的:对一种从云芝发酵液中提取得到的胃蛋白酶抑制剂的动力学性质和反应机理进行研究。方法:采用Lineweaver-Bunk双倒数法和UltroGelACA-54凝胶过滤法。结果:实验证明抑制剂为胞内产物,其成分是蛋白质,分子量为23 100Da,Ki值为0.996μmol/L。结论:抑制剂对胃酶的抑制类型属于非竞争和反竞争混合型抑制模式,它与胃酶结合作用的方式可能是在酶的活性基团形成氢键并封锁酶与底物的结合部位。

马铃薯胃蛋白酶抑制剂的纯化、特性及抑制机理探讨

从马铃薯中纯化一种胃蛋白酶抑制剂并对其特性及抑制机理进行探讨。利用醇沉、超滤、DEAE-52和Mono Q离子交换层析法从马铃薯中纯化得到一种主要成分是蛋白质的单亚基胃蛋白酶抑制剂(PPI),相对分子质量为16 100。该抑制剂热稳定性良好,对胃蛋白酶有很强的抑制作用,半抑制浓度IC50值为26.67μg/mL,抑制类型属于非竞争和竞争混合型抑制模式。据圆二色光谱(CD)研究胃蛋白酶抑制剂与胃蛋白酶作用前后的构象变化推测抑制剂以类似线形分子的形式覆盖到靶酶活性中心附近的区域上,从而阻止酶的活性中心与底物接触。

3种蛋白酶抑制剂对鹿茸促细胞增殖活性的保护作用

目的:确定对鹿茸样品活性有保护作用的蛋白酶抑制剂种类及作用浓度。方法:选择金属蛋白酶抑制剂EDTA-2Na、胰蛋白酶抑制剂(Approtinin)和胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin),以MTT法检测其对NRK-49F细胞增殖活性和对鹿茸促细胞增殖活性的影响以及对鹿茸样品33℃放置不同时间的保护作用。用Bradford法测鹿茸样品蛋白含量并调整到作用浓度400μg/mL。结果:当EDTA-2Na、Approtinin和Pepstatin浓度分别小于200、50、400μg/mL时对细胞增殖活性没有影响。EDTA-2Na浓度为6.25和12.5μg/mL时对鹿茸促增殖活性有加强作用,但对于鹿茸样品高温下放置没有明显的保护作用。12.5μg/mL的Approtinin对鹿茸促增殖活性有促进作用,并且对鹿茸样品高温放置有明显的保护作用,6.25μg/mL时效果最佳(P<0.05)。12.5μg/mL的Pepstatin表现出对鹿茸促增殖活性的加强作用,并表现出对鹿茸样品高温放置的保护作用,但数据无统计学差异。结论:3种蛋白酶抑制剂中胰蛋白酶抑制剂对鹿茸促细胞增殖活性有较好的保护作用。

Levels of matrix metalloproteinase-1 and tissue inhibitors of metalloproteinase-1 in gastric cancer

AIM:To evaluate the levels of preoperative serum matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1) in gastric cancer.METHODS:One hundred gastric cancer patients who underwent gastrectomy were enrolled in this study.The serum concentrations of MMP-1 and TIMP-1 in these patients and in fifty healthy controls were determined using an enzyme-linked immunosorbent assay.RESULTS:Higher serum MMP-1 and TIMP-1 levels were observed in patients than in controls (P < 0.001).Serum MMP-1 and TIMP-1 levels were positively associated with morphological appearance,tumor size,depth of wall invasion,lymph node metastasis,liver metastasis,perineural invasion,and pathological stage.They were not significantly associated with age,gender,tumor location,or histological type.CONCLUSION:Increased MMP-1 and TIMP-1 were associated with gastric cancer.Although these markers are not good markers for diagnosis,these markers show in advanced gastric cancer.