ATP结合盒转运子A1与胆固醇外流

高密度脂蛋白 (HDL)及其载脂蛋白具有抗动脉粥样硬化作用 ;这种血管保护作用主要是通过胆固醇逆转运来实现的。胆固醇外流是胆固醇逆转运的第一步 ,目前已明确ATP结合盒转运子A1 (ABCA1 )在胆固醇外流方面起关键作用。有关ABCA1的作用机制、表达调控和相互作用等方面的研究 ,近年来取得了很大的进展。对ABCA1的深入研究有利于进一步阐明脂质代谢过程 。

ABCG1介导的胆固醇外流在SLE患者中的作用及机制研究

目的探讨ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)介导的胆固醇外流在系统性红斑狼疮(SLE)患者中的变化及临床意义。方法选取2017年1月至2021年10月在青岛市市立医院(下称该院)就诊的SLE患者73例作为SLE组,其中合并心血管并发症患者40例,未合并心血管并发症患者33例,另选取同期在该院进行健康体检的52例体检健康者作为健康对照组,通过构建ABCG1高表达质粒载体转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1),荧光标记法检测SLE组和健康对照组胆固醇外流情况,计算胆固醇流出率,统计学分析ABCG1介导胆固醇外流的变化。结果与CHO-K1细胞相比较,在ABCG1表达水平上调的CHO-K1细胞中,健康对照组、SLE组未合并心血管并发症及合并心血管并发症的胆固醇外流率均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);在CHO-K1细胞中,与健康对照组相比较,SLE组胆固醇外流率明显增高,差异有统计学意义(P<0.001),与未合并心血管并发症的SLE组相比较,SLE合并心血管并发症组胆固醇外流率明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);在ABCG1高表达的CHO-K1细胞中,与健康对照组相比较,SLE组胆固醇外流率明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),与未合并心血管并发症的SLE组相比较,SLE合并心血管并发症组胆固醇外流率明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ABCG1介导的胆固醇外流途径在SLE患者及合并心血管并发症的SLE患者中均发生明显变化,可能与SLE患者中心血管疾病高发具有一定的关系。

银杏内酯B对胆固醇和载脂蛋白E4损伤海马神经元胆固醇代谢的影响

目的探讨银杏内酯B对高胆固醇和载脂蛋白E4(ApoE4)损伤海马神经元胆固醇代谢的影响。方法应用40μg/ml胆固醇和30μg/mlApoE4联合处理海马神经元,模拟高胆固醇细胞损伤模型。银杏内酯B对此模型进行干预后,经实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)的方法分别测定低密度脂蛋白受体蛋白(LRP)1mRNA、三磷酸腺苷结合盒转子A(ABCA)mRNA和内质网乙酰胆固醇酰基转移酶(ACAT)mRNA的表达,采用蛋白印迹法分别检测LRP1、ABCA1和ACAT1蛋白的表达。结果模型组上调LRP1mRNA表达,对ABCA1和ACAT1mRNA的表达有上调趋势,但是与对照组相比无显著差异。银杏内酯B可以有效上调ACAT1mRNA的表达,与模型组相比差异显著。上述因子蛋白的表达与mRNA表达趋势相一致,而且模型组与各组相比均有显著差异。结论胆固醇和ApoE4联合作用影响神经元胆固醇的摄入、细胞内胆固醇转化和胆固醇的排出。银杏内酯B对高胆固醇环境下神经元胆固醇代谢有一定的调节作用。

microRNA在非渗出性年龄相关性黄斑变性氧化应激和脂质代谢中的作用

年龄相关性黄斑变性(ARMD)是一种与氧化应激相关的神经退行性疾病,其特征是光感受器和视网膜色素上皮(RPE)细胞的进行性死亡,是导致65岁以上人群不可逆中心视力丧失最常见的原因之一。microRNA(miRNA)是一类调节性短链非编码RNA,能够结合并抑制同一生物途径中的多个基因,这种独特的性质使其成为用于探索非渗出性ARMD发病机制、诊断和治疗的理想靶点。既往研究发现非渗出性ARMD的发病机制涉及年龄、遗传、环境、氧化应激、脂质代谢、自噬和免疫等多方面,但其发病机制尚未完全阐明。miRNA作为非渗出性ARMD的生物标志物在氧化应激和脂质代谢中发挥重要作用,本文总结了多种miRNA通过靶向Nrf2、HIF-1α抑制缺氧相关的血管生成信号影响氧化应激;miRNA通过调节脂蛋白的摄取、RPE和巨噬细胞中ABCA1的表达影响脂质代谢,加深了对miRNA在非渗出性ARMD氧化应激、脂质代谢方面的认识,为完善非渗出性ARMD发病机制和进一步预防提供了帮助。

microRNA与胆固醇代谢

microRNA(miRNA)是一种长度约为22个核苷酸的非编码小分子RNA。microRNA通过与靶mRNA的3′端非编码区的种子序列互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行调控,microRNA参与生物体内许多复杂的生理过程,如细胞分化、凋亡、个体发育等,并与人类多种疾病如病毒感染、糖尿病、心血管疾病和癌症等密切相关。随着越来越多的microRNA被发现,其在生物体物质代谢方面的调节作用也逐渐被认识。文章将介绍近年来关于microRNA的研究进展及其在胆固醇代谢中的作用及应用前景。

人胆固醇酯水解酶对泡沫细胞的影响及相关机制的研究

目的探讨人胆固醇酯水解酶（hCEH）表达对泡沫细胞的影响及相关机制。方法利用含hCEH的慢病毒转染RAW264．7小鼠单核巨噬细胞，转染成功后巨噬细胞泡沫化。油红O染色和高效液相色谱分析hCEH对细胞内脂滴堆积情况及游离胆固醇含量变化的影响；Western blot检测ATP结合盒转运蛋白A1（ABCA1）、ATP结合盒转运蛋白G1（ABCG1）的表达情况。结果转染72h后，荧光细胞数量最多，接近50％，hCEH在细胞内大量表达；随着时间的延长，油红O染色阳性细胞数逐渐减少，细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量逐渐下降；Western blot显示在0～8h，ABCA1和ABCG1表达逐渐增加，8h达高峰，以后逐渐减少。结论hCEH表达可以促进巨噬细胞表面ABCA1、ABCG1的表达，并且ABCA1、ABCG1之间存在一定的协同性，从而有效增加了游离胆固醇外流、减少胆固醇酯在细胞内聚积，抑制泡沫细胞形成。

miR-146a-5p对炎症反应因子及脂代谢因子的调节作用

目的检测microRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对牙龈卟啉单胞菌(P.g)脂多糖(LPS)刺激的HepG2细胞炎症反应因子白细胞介素受体相关激酶(IRAK)-1、胆固醇代谢相关因子ATP结合盒转运蛋白(ABC)G1蛋白表达的影响。方法以HepG2细胞为体外细胞模型,应用体外细胞培养技术、转染技术和Western印迹,分别以P.gLPS刺激、miR-146a-5p-mimics转染为干预手段,从蛋白水平检测P.gLPS刺激组、miR-146a-5p转染组、miR-146a-5p转染+P.gLPS刺激组、阴性对照组4组HepG2细胞因子IRAK-1、ABCG1蛋白水平的表达变化。结果P.gLPS刺激组IRAK-1蛋白水平显著高于阴性对照组(P<0.05);P.gLPS刺激组ABCG1蛋白水平显著高于阴性对照组(P<0.05);miR-146a-5p转染组IRAK-1蛋白水平显著低于阴性对照组(P<0.05);miR-146a-5p转染组ABCG1蛋白水平与阴性对照组无显著差异(P>0.05);miR-146a-5p转染+P.gLPS刺激组IRAK-1蛋白水平显著低于P.gLPS刺激组(P<0.01);miR-146a-5p转染+P.gLPS刺激组ABCG1蛋白水平显著低于P.g LPS刺激组(P<0.01)。结论P.gLPS刺激能够显著升高HepG2细胞IRAK-1、ABCG1蛋白水平;miR-146a-5p能够显著下调HepG2细胞IRAK-1蛋白水平;miR-146a-5p拮抗了P.g LPS刺激的HepG2细胞IRAK-1蛋白、ABCG1蛋白的上调。

Kruppel样因子6基因对巨噬细胞中胆固醇蓄积的影响

背景:研究表明,Kruppel样因子6与巨噬细胞极化密切相关。但是,关于Kruppel样因子6在巨噬泡沫细胞形成中的作用尚不清楚。目的:观察Kruppel样因子6过表达对氧化低密度脂蛋白刺激下的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)胆固醇蓄积及对ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响。方法:取Raw264.7巨噬细胞株分别转染慢病毒空载体和重组载体p CDH-KLF6,作为对照组和Kruppel样因子6组,另取稳定感染慢病毒空载体的Raw264.7巨噬细胞株和稳定感染重组载体p CDH-KLF6的Raw264.7巨噬细胞株均加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白共孵育48 h后,得到氧化低密度脂蛋白组和Kruppel样因子6+氧化低密度脂蛋白组。结果与结论:与对照组相比,氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平显著增加(P<0.05)。与氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞相比,Kruppel样因子6+氧化低密度脂蛋白组细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平明显下降,胆固醇酯/总胆固醇明显降低(P<0.05)。而未加入氧化低密度脂蛋白处理的2组细胞内脂质表达水平少,且对照组与Kruppel样因子6组相比,细胞内脂质表达水平差异无显著性意义。提示Kruppel样因子6可能通过促进ATP结合盒转运蛋白A1的表达,抑制氧化低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积。

龙胆泻肝汤对胆囊胆固醇结石小鼠胆固醇代谢的影响

目的:通过小鼠胆固醇代谢中密切相关基因尼曼-匹克C1样蛋白(NPC1L1)、腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ABC)G5、ABCG8的表达变化,探讨龙胆泻肝汤对胆囊胆固醇结石(CS)小鼠胆固醇代谢的影响。方法:将32只雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组12只,造模组20只,采用胆固醇致石饲料诱导法塑造CS小鼠模型,8周后,两组各随机取4只小鼠取材查看胆囊结石情况。造模成功后,造模组随机分为模型组(8只)和龙胆泻肝汤组(8只),龙胆泻肝汤组予龙胆泻肝汤13.8g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,空白组和模型组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃,干预4周。HE染色观察各组小鼠肝脏与小肠的组织形态;ELISA检测血清胆固醇(TC)与甘油三酯(TG)、胆汁TC与胆汁酸(TBA)含量;q-PCR及Western Blot分别检测小鼠肝脏和小肠组织中NPC1L1、ABCG5/ABCG8 mRNA与蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠血清TC、TG和胆汁TC、TBA均显著升高(P<0.01,P<0.05);模型组小肠NPC1L1mRNA与蛋白表达显著上调(P<0.01),ABCG5/G8mRNA与蛋白表达显著下调(P<0.01);肝组织中NPC1L1mRNA与蛋白表达均显著下调(P<0.01),而ABCG5/G8mRNA与蛋白表达均显著上调(P<0.01)。与模型组比较,龙胆泻肝汤组小鼠肝和小肠组织病理形态均明显改善;龙胆泻肝汤组血清中TC、TG和胆汁中TC、TBA显著降低(P<0.01,P<0.05);龙胆泻肝汤组小肠NPC1L1mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.01,P<0.05),小肠ABCG5/G8mRNA和蛋白表达均显著上调(P<0.01,P<0.05);肝NPC1L1 mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.01),肝ABCG5/G8mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论:龙胆泻肝汤能够改善CS模型小鼠胆固醇代谢异常,肠、肝组织NPC1L1、ABCG5/G8表达异常引起胆固醇过饱和可能是CS湿热蕴结的分子生物学基础之一。

三磷酸腺苷结合盒转运体A1与A7在胆固醇逆转运中的作用

三磷酸腺苷(ATP)结合盒转运体A1(ABCA1)是ATP结合盒转运体家族中和ATP结合盒转运体A7(ABCA7)最高同源性蛋白之一,分别通过影响胆固醇和磷脂的流出参与胆固醇逆转运。肝孤儿受体和视黄酸X受体是ABCA1的主要转录调控因子,而ABCA7受到固醇调节元件结合蛋白系统和固醇的调节,并参与吞噬作用。ABCA1和ABCA7在细胞脂质内稳态的调节中起到重要作用。

17β-雌二醇通过SOCS3抑制泡沫细胞形成的机制初探

目的明确雌激素是否能够调节动脉粥样硬化斑块泡沫细胞中的胆固醇流出。方法在体研究通过对5周龄载脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)-/-小鼠进行双侧卵巢切除术(OVX,n=16)或假卵巢切除术(Sham组,n=8),将卵巢切除的小鼠分为2组:OVX+E2组(n=8)小鼠皮下注射溶于丙酮的17-β雌二醇(E2)5μg/d,OVX组(n=8)注射丙酮作为对照。观察2组动脉粥样硬化斑块形成、脂质沉积和胆固醇流出情况的差别;体外研究通过干预RAW264.7细胞,观察其胆固醇流出的水平。结果与OVX组相比,Sham组和OVX+E2组血清总胆固醇和甘油三酯水平均下降,差异有统计学意义(P<0.01~0.05)。与OVX组相比,Sham组和OVX+E2组斑块面积分别减少22.03%和21.84%,脂质沉积分别下降20.57%和30.36%(P均<0.01)。E2增加了斑块中ABCA1和SOCS3的表达。在细胞RAW264.7中,E2能够逆转janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)ABCA1表达的抑制,但这种逆转作用在SOCS3受抑制的细胞中未发现。SOCS3过表达能够通过抑制JAK2/STAT3的磷酸化提高ABCA1的表达。结论E2能够上调巨噬细胞ABCA1的表达,并可通过上调SOCS3进而调控胆固醇流出。

oxLDL对U937细胞SR-AⅠ及ABCA1 mRNA表达的影响

目的以人单核细胞株U937为研究对象,观察在氧化修饰低密度脂蛋白(oxLDL)刺激下U937细胞清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)和ATP结合盒转运体A1(ABCA1)mRNA的表达情况。方法以不同质量浓度的oxLDL(0、25、50、75、100、125 mg/L)与U937细胞共同培养48 h,然后进行油红O染色以了解其胞内脂质含量,同时用实时荧光定量PCR方法检测其ABCA1和SR-AⅠmRNA的表达量。结果单核细胞ABCA1和SR-AⅠmRNA在无oxLDL干预下其表达最低;oxLDL可诱导ABCA1和SR-AⅠmRNA的表达,与无oxLDL干预组比较差异有统计学意义(P均<0.01);ABCA1 mRNA在50 mg/L oxLDL干预下表达最强,其后随着oxLDL培养浓度的增加其表达反而下降;SR-AⅠmRNA表达为逐渐增高,50 mg/L oxLDL干预时表达最强。结论 U937细胞随着oxLDL干预浓度的提高其ABCAl mRNA和SR-AⅠmRNA表达呈先增高后降低的趋势,在50 mg/L oxLDL时表达最高;二者在泡沫细胞形成过程中起着非常重要的作用。

老年退行性主动脉瓣中巨噬细胞标志分子CD68与ACAT1、ABCA1、促炎因子表达的相关性

目的:研究胆固醇相关因子脂酰辅酶A:胆固醇酯酰转移酶1(ACAT1)、ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、MCP1、IL-10在老年退行性主动脉瓣疾病(DAVD)中的表达。方法:收集因退行性主动脉瓣狭窄而行手术切除的严重钙化主动脉瓣标本80例,经HE和免疫组织化学染色,观察退行性主动脉瓣组织学改变和ACAT1、ABCA1表达特点,RT-PCR检测组织中胆固醇相关基因CD68、ACAT1、ABCA1和炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、MCP1、IL-10基因的表达,单元线性回归分析巨噬细胞标志分子CD68与ACAT1、ABCA1和TNF-α、IL-1β、MCP1、IL-10表达的相关性。结果:与正常主动脉瓣比较,DAVD增厚,结节性钙化灶存在,增生纤维组织排列紊乱使瓣膜失去原有结构,钙化周围发现巨噬细胞和其他炎性细胞、泡沫细胞、新生血管形成;免疫组织化学染色示:正常主动脉瓣未见巨噬细胞,而DAVD大量巨噬细胞浸润;RT-PCR检测显示,与正常主动脉瓣相比,DAVD中ACAT1和ABCA1的表达增高(P<0.05)。正常主动脉瓣无CD68表达,DAVD表达CD68。单元线性回归分析表明,CD68与ACAT1(r=-0.83,P<0.05),ABCA1(r=-0.89,P<0.05)表达正相关。与正常主动脉瓣相比,DAVD中TNF-α、IL-1β、MCP1的表达增高,而IL-10表达降低(P<0.05)。单元线性回归分析表明,CD68表达与TNF-α(r=0.87,P<0.05)、IL-1β(r=0.92,P<0.05)、MCP1(r=0.87,P<0.05)呈正相关,与IL-10(r=-0.64,P<0.05)负相关。结论:在DAVD病变中,巨噬细胞浸润的同时伴随着ABCA1、ACAT1和促炎因子表达增加,巨噬细胞标志CD68与胆固醇相关基因ABCA1、ACAT1和促炎因子正相关。