胆固醇基键合相-反相高效液相色谱法测定正辛醇/水分配系数

通过反相高效液相色谱法系统地考察了中性和弱酸性化合物在新型胆固醇基键合相色谱柱(Cholester柱)上的保留行为。以甲醇和乙腈为有机调节剂,建立了保留因子(k)与有机调节剂比例(φ)间的关系,并外推获取100%水相为流动相时的log kw;同时进一步建立并验证了不同流动相下正辛醇/水分配系数的对数(log Kow)和log kφ(log kw)间的模型,并预测了部分化合物的log Kow。结果表明,使用Cholester柱测定log Kow时,甲醇比乙腈更适合作为有机调节剂;对中性化合物和中性状态的酸性化合物,可以用任意甲醇比例下获取的log kφ预测log Kow;对存在离解的酸性化合物,依然用外推方式获取的log kw预测log Kow。将采用Cholester柱与文献中采用C18柱、C8柱建立的log Kow-log kφ模型进行对比,结果表明化合物与胆固醇基键合相存在特别的作用。

一种新的胆固醇基偶氮液晶化合物的合成与表征

采用二环己基碳二亚胺(DCC)和4-二甲基氨基吡啶(DMAP)为催化剂,使丁二酸单胆固醇酯和4-羟基4 硝基偶氮苯酚进行酯化反应,合成了一种新的胆固醇基双液晶基元化合物．使用红外光谱、核磁共振、热台偏光显微镜、差示扫描量热法等测试手段对产物的化学结构和液晶性能进行了表征．研究表明该液晶化合物在加热过程(197-24l℃)和冷却过程(234-104℃)中很宽的温度范围内呈现胆甾相液晶并且有鲜艳的颜色．

直型和弯曲型双胆固醇基液晶基元化合物的合成与表征

以胆固醇和丁二酸酐反应生成丁二酸胆固醇单酯,丁二酸胆固醇单酯与对苯二酚反应合成了一种直型的双胆固醇基液晶化合物,与邻苯二酚反应合成了一种弯曲性双胆固醇基液晶化合物。对直型和弯曲双胆固醇基液晶化合物的液晶性能进行了表征,结果表明这2种液晶化合物在加热和冷却过程中均可以形成胆甾相液晶。直型液晶化合物的液晶温度范围较宽于弯曲型液晶化合物;这2种化合物的液晶态都具有胆甾相所特有的鲜艳颜色。

胆固醇基磷酰齐多夫定在大鼠体内的药代动力学研究

目的建立测定大鼠血浆及组织中胆固醇基磷酰齐多夫定(CPZ)及其代谢物齐多夫定(AZT)含量的方法,并应用于CPZ在大鼠体内的药代动力学研究。方法 CPZ的测定采用HPLC-UV法,生物样品用乙腈沉淀蛋白后,经Diamonsil C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm)分离,以甲醇-异丙醇(90∶10,V/V,含有2 mmol/L十六烷基二甲基溴化铵、2%乙酸、0.1%氨水)为流动相,1.0 ml/min流速等度洗脱,紫外检测波长为266 nm。AZT的测定采用LC-MS/MS法,血浆及组织样品用叔丁基甲醚提取后,经Poroshell 120 EC-C18柱(50 mm×2.1 mm,2.7μm)分离,以甲醇-0.2%乙酸水(35∶65,V/V)为流动相等度洗脱;用ESI源在多反应监测方式下进行正离子检测,用于定量分析的离子反应为m/z 268.2→m/z 127.0(AZT)和m/z 152.1→m/z 110.0(对乙酰氨基酚,内标)。结果 CPZ和AZT在大鼠生物样品中浓度测定方法的线性范围分别为5~400μg/ml和2~500 ng/ml,批内、批间精密度(RSD)均<15%,准确度在±13.8%之间。CPZ在大鼠体内消除较快,AZT消除较慢,半衰期约为8 h。CPZ和AZT在大鼠的肝、脾、肺中分布较多,在心、肾中分布较少。结论方法适用于CPZ自组装体在大鼠体内的药代动力学研究。药动学结果显示,CPZ能靶向控释AZT到大鼠的肝、脾和肺中。

胆固醇基修饰的普鲁兰纳米粒的摄取机制及亚细胞分布研究

目的 研究胆固醇基修饰的普鲁兰（CHSP）纳米粒的体外HepG2细胞的摄取机制及亚细胞分布.方法 采用异硫氰酸荧光素（FTTC）标记CHSP,透析法制备FITC标记的CHSP（FITC-CHSP）自组装纳米粒并进行表征.采用MTT法考察CHSP纳米粒对HepG2细胞的毒性.选用选择性的内吞途径抑制剂氯丙嗪、菲律宾菌素和阿米洛利来研究HepG2细胞摄取CHSP纳米粒的机制.最后,采用细胞免疫荧光法对内质网、高尔基体和溶酶体进行染色,使用激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）观察不同的孵育时间CHSP纳米粒的亚细胞分布.结果 成功合成了FITC-CHSP,且FITC-CHSP能在水介质中自组装成纳米粒,该纳米粒呈规则球形,平均粒径为（63.0 ±1.9） nm.MTT结果表明CHSP纳米粒对HepG2细胞无明显的细胞毒性.内吞抑制实验表明网格蛋白介导的内吞途径以及巨胞饮途径共同参与了CHSP纳米粒的入胞过程.纳米粒的亚细胞分布实验表明：在研究的孵育时间（4 h）内,并未发现CHSP纳米粒进入高尔基体和内质网;当纳米粒与HepG2细胞孵育30 min时,没有纳米粒定位于溶酶体中,随着孵育时间的延长,大量纳米粒分布于溶酶体中.结论 CHSP纳米粒有望成为细胞内递送治疗剂的一种通用载体.

新型肝靶向载体[(2-乳糖酰胺基)乙胺基]甲酸胆固醇酯的合成与鉴定

目的将肝靶向基团半乳糖基引入到胆固醇结构中,制备[(2-乳糖酰胺基)乙胺基]甲酸胆固醇酯(CH-ED-LA)。方法以乳糖酸、乙二胺和胆固醇氯甲酯为原料,设计了内酯法和活性酯法2条合成路线,通过一系列酯化反应和酰化反应合成CH-ED-LA,采用IR、MS和NMR对其进行表征。结果采用工艺简单、收率较高的内酯法合成CH-ED-LA。结论CH-ED-LA是乙二胺与乳糖酸和胆固醇氯甲酯通过酰胺键连接的半乳糖化胆固醇衍生物。

高效液相色谱法定量分析人胎肝细胞上清液及细胞裂解液中7-酮基胆固醇

用高效液相色谱法定量分析了７－酮基胆固醇在胎肝细胞上清液及细胞裂解液中的含量。色谱柱为μ－ＰｏｒａｓｉｌＳｉＯ２柱，流动相为正己烷∶异丙醇（９１∶９，Ｖ／Ｖ）。方法回收率高、色谱重复性好。

7-酮基胆固醇诱导心肌细胞凋亡的作用研究

目的研究不同浓度的7-酮基胆固醇(7-ketocholesterol,7-keto)对心肌细胞凋亡的影响。方法采用荧光染料Hoechst33342染核的方式观察7-keto对心肌H9C2细胞凋亡形态学的影响,采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测7-keto对心肌H9C2细胞LDH释放的作用。结果 Hoechst33342形态学观察结果显示:7-keto 25μmol/L时,细胞开始呈现数目减少,形态改变如核浓缩和DNA碎裂的凋亡形态。50μmol/L和100μmol/L时,一个光镜视野下,细胞密度极度下降,DNA荧光碎片增多。LDH定量分析结果显示:7-keto 25μmol/L,50μmol/L和100μmol/L浓度依赖性的增加LDH的释放量。结论 7-keto诱导心肌细胞发生凋亡,其作用可能与增加LDH的释放有关。

三磷酸腺苷结合盒转运体A1在泡沫细胞胆固醇流出中的作用

以THP 1细胞源泡沫细胞为研究对象 ,观察三磷酸腺苷结合盒转运体A1在单核—巨噬细胞源泡沫细胞胆固醇流出中的作用。实验采用流式细胞术检测的方法 ,来判断三磷酸腺苷结合盒转运体A1激动剂 2 2 (R) 羟基胆固醇和抑制剂 4 ,4 -二异硫氰酸二丙乙烯 2 ,2 -二磺酸 (4 ,4’ diisothiocyanostilbene 2 ,2’ disulfonicacid ,DIDS)对THP 1细胞源泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响。实验结果发现 ,2 2 (R) 羟基胆固醇作用THP 1细胞源泡沫细胞不同时间后 ,能明显增加细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1的蛋白表达 ,流式细胞术检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的平均荧光强度从 0h的 31 .1增加到 2 4h的 4 5 .2 ;而DIDS作用THP 1细胞源泡沫细胞不同时间后 ,能明显降低细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1的蛋白表达 ,平均荧光强度从 0h的 2 9.4降低到 2 4h的1 0 .4。胆固醇流出实验发现 ,2 2 (R) 羟基胆固醇作用THP 1细胞源泡沫细胞不同时间后 ,能明显增加细胞胆固醇流出 ;而DIDS作用THP 1细胞源泡沫细胞不同时间后 ,能明显降低细胞胆固醇流出。这些结果表明 ,三磷酸腺苷结合盒转运体A1在THP

紫外光照射下胆固醇氧化产物分析

考察了紫外光照射下胆固醇的氧化情况.实验证明,经过0～5h的紫外光照射,用毛细管气相色谱法检测到有7 酮基胆固醇、5α,6α 环氧胆固醇和胆甾烷三醇生成,其含量随照射时间增加而增加.

一种新型四液晶基元化合物的合成及其液晶性能

合成了一种新型的四液晶基元化合物，其分子中含有2个胆固醇基团和2个席夫碱基团，这4个液晶基元以柔性间隔段相连，使用热台偏光屁微镜（POM）和差示扫描量热法（DSC）对该四液晶基元化合物的液晶性能进行了表征，结果表明它在加热过程中较宽的温度范围内（198—307℃）形成胆甾相液晶。

7-酮基胆固醇通过激活内质网应激通路诱导胰岛β细胞凋亡的研究

目的探讨7-酮基胆固醇(7-KC)对胰岛β细胞凋亡的影响及其可能分子机制。方法用0、0.25、2.5和25μmol/L浓度的7-KC孵育INS-1细胞24 h,应用Western blotting法筛选出引起INS-1细胞凋亡的浓度。再将INS-1细胞分为对照组、25μmol/L 7-KC组、25μmol/L 7-KC+1 mmol/L 4-苯基丁酸(4-PBA)组以及1 mmol/L 4-PBA组。应用Western blotting、流式细胞仪、免疫荧光、电镜和免疫共沉淀技术,检测细胞内质网应激标志蛋白[肌醇需求酶1α(IRE-1α)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、转录激活因子4(ATF4)、磷酸化α亚基的真核起始因子2(p-eIF-2α)、α亚基的真核起始因子2(eIF-2α)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、磷酸化IRE-1α(p-IRE-1α)、磷酸化PERK(p-PERK)和转录激活因子6(ATF6)]、凋亡蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase 3)]、内质网形态和内质网应激相互作用蛋白[葡萄糖调节蛋白78(GRP78)]表达水平,验证内质网应激在7-KC损害β细胞功能中的作用。两组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析,组内两两比较采用Bonferroni多重比较法。结果随着7-KC浓度的增加,cleaved-Caspase 3相对表达量呈剂量依赖性增加,并且在25μmol/L 7-KC时能显著增加cleaved-Caspase 3的水平(P<0.01)。与对照组相比,25μmol/L 7-KC组可引起内质网扩张和囊泡化,诱导内质网应激感受蛋白p-PERK、p-IRE-1α、ATF6及下游效应蛋白p-eIF-1α、ATF4、CHOP的表达。与25μmol/L 7-KC组比较,25μmol/L 7-KC+1 mmol/L 4-PBA组的内质网应激标志蛋白表达下降,同时凋亡蛋白表达减少(P<0.05)。免疫共沉淀结果显示,25μmol/L 7-KC组可抑制分子伴侣GRP78和PERK的结合,促进PERK自体磷酸化激活内质网应激。结论7-KC通过抑制细胞中GRP78与PERK结合来激活内质网应激,促进胰岛β细胞凋亡的发生。

基因工程用途广

人类有数千种病症，如某些类型的精神病、神经系统疾病、糖尿病、进行性肌营养不良症、癌症、心脏病等，都和基因有关。科技的进步和基因工程技术的发展给许多不治之症带来希望。治疗先天性免疫功能缺陷患先天性免疫功能缺陷的孩子，其免疫力很差，那怕患普通的感冒也有可...

高效液相色谱法分析人胎肝细胞培养液中7-酮基胆固醇

建立了高效液相色谱法分析人胎肝细胞培养液中７－酮基胆固醇。人胎肝细胞培养液经氯仿－甲醇（体积比为２∶１）混合液提取后，水洗，氮气吹干。色谱条件为色谱柱：μＰｏｒａｓｉｌＳｉＯ２，流动相：正己烷∶异丙醇（体积比为９１∶９），２３３ｎｍ检测。这一方法具有快速，灵敏度高，重复性好等特点。

人胎肝中低分子抑瘤物的分离纯化、结构鉴定及其对肿瘤细胞生长的选择性抑制作用

在胎儿组织中存在一类低分子肿瘤抑制物。胎肝细胞的甲醇－丙酮提取物中保留有大部分抑瘤活性。用体外液体培养条件下对人急性粒系白血病细胞系（ＨＬ－６０）的抑制作用为指标，跟踪指导分离过程。提取物经反相Ｃ１８中压液相色谱、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０凝胶色谱及氨基键合相高效液相色谱分离得到一纯活性物质，经ＮＭＲ和ＭＳ鉴定为７－酮基胆固醇（７－ｋｅｔｏｃｂｌｅｓｔｅｒｏｌ，７－ＫＣ）。体外琼脂培养条件下７－ＫＣ对小鼠ＷＥＨ１－３和Ｓ－１８０细胞较对正常小鼠骨髓粒一巨噬系祖细胞有更强的抑制增殖及集落生成作用。７－ＫＣ对ＨＬ－６０细胞增殖较对正常人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ有更强的抑制作用。

高效液相色谱法测定卤制鸡肝中两种胆固醇氧化物

目的建立一种可以分析测定鸡肝中7-酮基胆固醇和胆甾烯酮的方法。方法样品与弗罗里硅土填料混合研磨后装柱，乙腈为洗脱剂，萃取与净化一步完成。无水乙醇为流动相，在240～285nm变波长条件下液相色谱测定。结果2种胆固醇氧化物在0．25～100μg／ml范围内线性关系良好，r均〉0．9993，方法检出限分别为0．015、0．045μg／g。优化条件下，组分在鸡肝样品中的平均回收率在74．1％～97．0％之间，RSDs〈5．57％。结论该方法适合于鸡肝中胆固醇氧化物的测定。

齐多夫定棕榈酸酯半乳糖化脂质体在小鼠体内的分布

肝实质细胞作为人类免疫缺陷病毒的贮库,与病毒不断地向外周循环扩散有关。本文制备了含自制[(2-乳糖酰胺基)乙胺基]甲酸胆固醇酯([(2-lactoylamido)ethylamino]formic acid cholesterol ester,CH-ED-LA)为“肝自导向”辅料的齐多夫定棕榈酸酯(azidothymidine palmitate,AZTP)半乳糖化脂质体(GalLs),并对齐多夫定棕榈酸酯半乳糖化脂质体在小鼠体内的分布进行了研究。采用乙醇注入-超声分散法制备了以下4种脂质体,脂质构成分别为:大豆磷脂(SPC)/胆固醇(CH)/CH-ED-LA(80∶10∶10,10%GalLs),SPC/CH/CH-ED-LA(80∶15∶5,5%GalLs),SPC/CH/CH-ED-LA(80∶17∶3,3%GalLs)和SPC/CH(80∶20,CL),测得各脂质体的包封率均大于95%,平均粒径均小于100 nm;CH-ED-LA的加入量对AZTP脂质体的膜电位和药物含量均无影响。小鼠尾静脉注射齐多夫定溶液剂15.85 mg.kg-1、齐多夫定棕榈酸酯普通脂质体及半乳糖化脂质体各30 mg.kg-1,HPLC法测定药物在小鼠体内各组织中的分布。各脂质体组的药物半衰期较溶液组均有显著增加(P<0.05);与齐多夫定溶液剂相比,齐多夫定棕榈酸酯普通脂质体和CH-ED-LA分别占脂质总量3%,5%,10%(mol/mol)的半乳糖化脂质体的药物肝靶向摄取率(re)分别为1.32和1.48,2.13和1.50。结果表明含新糖脂CH-ED-LA的脂质体可显著改善齐多夫定棕榈酸酯的肝靶向性,可望成为一种有用的靶向肝的药物传递载体。