西瓜蔗糖转运蛋白SUT家族的鉴定及其在果实发育和逆境响应中的表达分析

蔗糖转运蛋白(SUTs)作为蔗糖主动转运的主要载体,在分配同化物从源到库组织的转运中起着关键作用。尽管SUTs的特性及其生物学功能已在高等植物中得到了深入研究,但该基因家族尚未在西瓜中进行鉴定。本研究在西瓜基因组中共鉴定了4个ClSUT基因,并对其基因和蛋白结构、保守基序、亚细胞定位、染色体分布、进化关系、启动子元件等进行了全面分析。基因结构分析表明,亚族Ⅰ的ClSUT3和ClSUT4基因均只含有一个内含子。所有ClSUT均被预测定位在质膜中,它们均含有一个保守的MFS-2结构域,并且含有与之对应的5个保守基序。系统发育分析发现拟南芥、水稻和西瓜中的SUT分为5个亚族,西瓜ClSUT与拟南芥SUT的亲缘关系更近,被聚类在亚族Ⅰ、亚族Ⅱ和亚族Ⅴ。还在西瓜ClSUT基因的启动子中鉴定到一些与激素和逆境响应相关的作用元件。此外,转录组数据表明,西瓜ClSUT基因的表达对渗透和盐胁迫呈现多样性,很可能参与西瓜对这些逆境的响应。

20例钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂致福涅尔坏疽病例及文献分析

目的探讨钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(SGLT-2i)致福涅尔坏疽(FG)的发生特点,为临床安全用药提供参考。方法采用计算机检索PubMed、Embase、中国知网、万方、维普数据库自建库起至2023年6月有关SGLT-2i致FG的病例报道,并对相关数据进行统计和分析。结果共纳入20篇文献,涉及20例患者。其中,男14例(70.00%),女6例(30.00%);年龄(56.0±11.5)岁;12例(60.00%)描述为肥胖,其中5例为极重度肥胖(体质量指数不低于40 kg/m^(2))。FG发生中位时间为425 d,FG发生时糖化血红蛋白(HbA_(1C))平均值为9.2%。SGLT-2i致FG相关性为很可能的有8例,可能的有12例。20例患者经停药、及时清创引流及给予抗菌药物治疗后转归均良好。结论临床使用SGLT-2i时需注意识别其致FG的危险因素,一旦生殖器或会阴区域出现可疑的肿胀、疼痛等不适,需立即就医,并给予积极治疗。

中国人胆固醇酯转运蛋白TaqIB基因多态性与冠心病关系的Meta分析

目的对中国人胆固醇酯转运蛋白TaqIB基因多态性与冠心病关系进行Meta分析。方法通过中国生物医学文献数据库、中国学术期刊全文数据库和Medline等文献检索途径,全面检索2005年12月31日以前发表的有关中国人胆固醇酯转运蛋白TaqIB基因多态性与冠心病关系的病例对照研究,由2名独立的研究者根据纳入标准评价筛选合格文献,漏斗图检验入选文献的发表偏倚,分析各研究的异质性并采用相应的数学模型进行数据合并,统计其总的比数比和95%可信区间。采用Meta分析专用软件Review Manager（4.2版）进行统计分析。结果7个研究共1 161名冠心病患者和1 149名对照者被纳入Meta分析,入选研究无明显发表偏倚,研究结果之间无明显异质性（χ^2=3.53,P=0.74）,按Peto固定模型进行数据合并,数据合并后胆固醇酯转运蛋白TaqIB中B1B1基因型与B1B2＋B2B2基因型的比数比为1.34,95%可信区间为1.12-1.60（P=0.002）。结论胆固醇酯转运蛋白基因TaqIB酶切位点多态性与中国人冠心病易感性相关,B1等位基因可能是冠心病的遗传危险因素。

海南黎族冠心病患者胆固醇酯转运蛋白基因多态性测定及分析

目的探讨胆固醇酯转运蛋白(CETP)基因多态性在海南黎族人群冠心病发病中的作用。方法应用等位基因特异性PCR方法,对海南黎族47例冠心病患者(观察组)及330例健康查体者(对照组)的CETP基因6种多态位点进行检测,比较两组基因型频率和等位基因频率。结果两组TaqIB突变位点可检测出B1B1、B1B2、B2B23种基因型,I405V突变位点可检测出Ⅱ、Ⅳ、ⅤⅤ3种基因型,D442G突变位点可检测出DD、DG2种基因型;两组TaqIB突变位点的等位基因频率及D442G突变位点的基因型分布和等位基因频率存在显著差异(P<0.05)。结论 CETP基因TaqIB和D442G位点的多态性与海南黎族人群冠心病显著相关;本研究样本数较少,有关CETP基因多态性与海南黎族人群冠心病的确切关系尚有待于开展大样本流行病学调查。

缢蛏ABC转运蛋白基因家族成员全基因组鉴定及表达模式分析

腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP binding cassette transporter,ABC transporter)家族是最古老的膜蛋白家族之一,广泛存在于原核生物和真核生物体内,利用ATP水解释放的能量对氨基酸、脂质、抗生素等物质进行跨膜运输,参与生物体内多种生理活动。目前,对软体动物ABC转运蛋白家族的鉴定,仅在虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)、栉孔扇贝(Chlamys farreri)和长牡蛎(Crassostrea gigas)3种双壳类中有系统研究,对缢蛏(Sinonovacula constricta)ABC转运蛋白家族的鉴定和表达模式分析尚未见报道。利用缢蛏基因组和转录组数据,运用本地及NCBI在线BLAST程序、FGENESH+、SMART、Ex PASy、MEGA X、Mev 4.90和MapInspect等生物信息学分析工具,在全基因组水平系统地鉴定出52个缢蛏ABC转运蛋白,并对转运蛋白基因外显子数目、染色体定位等信息进行分析;通过系统进化分析,将缢蛏ABC转运蛋白家族分为8个亚家族,即ABCA~ABCH;通过比较分析不同物种ABC转运蛋白家族,推测基因串联复制事件对软体动物ABC转运蛋白家族成员数目的增加有影响。ABC转运蛋白基因在缢蛏不同发育时期和组织的表达分析显示,ABCC和ABCG亚家族多个基因在缢蛏稚贝时期表达量达到最高值,ABC转运蛋白基因在鳃、肝胰腺和性腺中表达种类较多。软体动物作为第二大动物类群,目前仅有3个物种的ABC转运蛋白得到了系统分类,缢蛏ABC转运蛋白基因家族的系统鉴定与表达模式分析为研究软体动物ABC转运蛋白基因的进化和缢蛏ABC转运蛋白功能提供了基础资料。

绝经后妇女雌激素缺乏与胆固醇酯转运蛋白水平改变的关系

目的 探讨雌激素是否影响血清胆固醇酯转运蛋白 (CETP)水平的调节。方法 采用放射免疫分析法测定了 196例包括绝经前 (5 2例 ,年龄 18～ 40y)、绝经后妇女 (87例 ,年龄 61～ 81y)及围绝经期妇女 (5 7例 ,年龄 41～ 60 y)的血清雌二醇(E2 )、促卵泡生成激素 (FSH) ;自制CETP单抗建立的ELISA法测定CETP水平 ,同时测定血脂类指标。结果 绝经后妇女CETP水平明显低于绝经前和围绝经期妇女 (P <0 0 0 0 1) ,E2 水平较绝经前和围绝经期妇女显著下降 (P <0 0 0 0 1) ,而FSH水平显著升高 (P <0 0 0 0 1) ,各组血脂水平亦有显著性差异。CETP与E2 呈正相关 (r =0 .2 4,P <0 0 0 1) ,与FSH呈负相关(r =- 0 .2 7,P <0 0 0 1) ,与年龄呈负相关 (r=- 0 .3 1,P <0 0 0 0 1)。

中国健康人血清胆固醇酯转运蛋白水平

为研究中国健康人血清胆固醇酯转运蛋白水平和分布特征 ,采用“Sandwich”酶免疫法测定了 112 8例健康人群血清胆固醇酯转运蛋白水平 ,结果为 1.84± 1.5 5mg/L ,胆固醇酯转运蛋白水平倾向于低浓度的偏态分布 ,女性胆固醇酯转运蛋白水平明显高于男性 (分别为 2 .40± 1.6 5mg/L和 1.49± 1.37mg/L ,P <0 .0 0 1)。胆固醇酯转运蛋白水平与年龄之间呈显著的负相关 (r=- 0 .19,P <0 .0 0 1) ,与其他各项血脂浓度间均无相关性。

中老年人胆固醇酯转运蛋白基因多态性与高脂血症的关系

目的 了解胆固醇酯转运蛋白 (CETP)基因多态性与中老年人高脂血症的关系。方法 对北京市西城区 4 2 1名 35岁～ 81岁中老年人进行血脂谱水平测定及胆固醇酯转运蛋白基因TaqIB(CETP TaqIB)位点多态性检测 (PCR RFLP方法 )。结果 CETP基因TaqIB位点B1B1、B1B2、B2B2基因型频率分别为 30 4 %、5 2 0 %、17 6 % ,其等位基因B1、B2频率分别为5 6 4 %、4 3 6 % ,与欧美白种人、日本人、中国台湾汉族人等相近 ;高脂血症组与血脂正常组CETP TaqIB位点基因型构成差异无显著性 ;B1B1、B1B2、B2B2基因型的HDL C水平呈上升趋势 ,但差异无显著性 ,且不同基因型的TC、TG、LDL C、ApoAI、ApoB水平差异无显著性 ,分性别分析结果相同。分析其原因可能有 :(1)遗传变异是多位点、多种类的 ,在不同种族、不同人群中的表现不同 ;(2 )单个基因的作用“微效” ;(3)混杂因素的影响。结论 尚不能证实CETP基因TaqIB位点多态性与北京市西城区中老年人高脂血症有关。

胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系及意义

目的：检测胆固醇酯转运蛋白（CETP）基因1405V多态性与颈动脉粥样硬化斑块稳定性之间的相关性及临床意义。方法：2013年1—12月河北省人民医院功能科首次发现有颈动脉斑块者2756例为研究组．以同期无动脉斑块者2100例为对照组。应用聚合酶链反应（PCR）分析技术结合DNA直接测序技术，对研究对象CETP基因1405V（A／G）多态位点进行分型，按等位基因A和G的出现情况分为II、IV、VV3种基因型。采用非条件Logistic分析统计CETP基因多态位点与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系。同时检测研究对象的血脂水平及BMI等指标。结果：研究组血脂指标中TC、TG、LDL-C、家族史与对照组比较明显升高，而HDL—C则明显低于对照组（均P〈0．05）。II、IV、VV基因型在研究组中的分布频率分别为71．8％、19．2％、9．0％，在对照组中分别为90．1％、9．1％、1．0％，两组间基因型频率分布差异有显著性（χ2=8-324，P=0．007）。多因素回归分析研究发现，CETP基因1405V（A／G）多态位点G变异等位基因与颈动脉粥样硬化斑块稳定性有显著的相关性（OR=8．27。95％CI=5．43～32．57，P〈0．01）。结论：CETP基因1405VfA／G）位点基因突变可能是影响颈动脉粥样硬化斑块稳定性的重要原因。

应用等位基因特异性PCR检测胆固醇酯转运蛋白基因突变

目的:建立检测胆固醇酯转运蛋白(cholesterol ester transfer protein,CETP)基因6种常见突变的等位基因特异性PCR技术。方法:应用针对CETP基因TaqIB(G→A)、I405V(A→G)、D442G(A→G)、R451Q(G→A)、A373P(G→C)和I14A(G→A)这6种常见的突变位点设计的等位基因特异性PCR技术,对海南汉、黎族人群中CETP基因突变类型进行了检测,同时对经上述等位基因特异性PCR检测的样本进行序列测定。结果:在海南汉、黎族人群中,TaqIB(G→A)突变位点可检测出GG、GA、AA3种基因型,I405V(A→G)突变位点可检测出AA、AG、GG3种基因型,D442G(A→G)突变位点可检测出AA、AG2种基因型,但在海南汉、黎族人群中未检测到R451Q(G→A)、A373P(G→C)和I14A(G→A)3种突变类型,用等位基因特异性PCR鉴定的CETP基因突变的基因分型结果与序列测定结果完全符合。结论:等位基因特异性PCR技术操作简便,重复性和稳定性好,可作为鉴定CETP基因突变类型的可行方法。

冠心病患者血浆胆固醇酯转运蛋白水平与高密度脂蛋白亚类组成的关系

目的探讨冠心病患者胆固醇酯转运蛋白(CETP)水平与血浆高密度脂蛋白(HDL)亚类组成的关系。方法收集冠心病患者血浆116例和健康对照组血浆87例,采用双向电泳-免疫印迹检测法分析其HDL亚类浓度,用酶联免疫法测定CETP浓度。按CETP浓度均值加或减去一个标准差作为分割点,将冠心病患者分为3组:低CETP组(CETP≤0.69 mg/L)、中CETP组(0.69<CETP<1.59 mg/L)、高CETP组(CETP≥1.59 mg/L)。结果随着CETP浓度的升高,冠心病患者血浆总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平呈增加趋势,高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A1水平和载脂蛋白A1/B100比值呈减少趋势。与低CETP组相比,中CETP组和高CETP组preβ_1-HDL及HDL_(3c)含量增加,而HDL_(2b)含量降低(P<0.05或P<0.001)。直线相关和多元回归分析中发现,血浆CETP水平与preβ_1-HDL浓度呈正相关,与HDL_(2b)浓度呈负相关。结论随着血浆CETP水平的升高HDL颗粒有变小的趋势,CETP可能阻碍了HDL的成熟代谢。

肥胖儿童血浆胆固醇酯转运蛋白与血脂相关性

目的 :探讨单纯性肥胖儿童血浆胆固醇酯转运蛋白 (CETP)与血脂的相关性及其与动脉粥样硬化 (AS)的关系。 方法 :用本室建立的酶联免疫测定法 (EL ISA)检测 49例单纯性肥胖儿童血浆 CETP水平。 结果 :肥胖儿童与健康儿童相比 ,其血浆胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG )、低密度脂蛋白胆固醇 (L DL - C)、载脂蛋白 B(apo B)的浓度均显著升高 (P<0 .0 5 ) ,存在较明显的脂质代谢紊乱 ;高密度脂蛋白胆固醇 (HDL- C)、载脂蛋白 A1(apo A1)水平与健康儿童差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;CETP水平显著高于正常儿童 (P<0 .0 5 ) ,且与 L DL- C、apo B、TC/ HDL- C、L DL- C/ HDL- C、apo B/ apo A1显著相关 ,而与 HDL- C、apo A1则不相关。 结论 :肥胖儿童存在脂蛋白代谢紊乱 ,且可能与其 CETP水平增高有密切关系 ;过量脂肪摄入和缺乏体育锻炼也是其 CETP水平增高的重要因素。

不同程度冠脉病变男性患者胆固醇酯转运蛋白水平及其临床意义

目的探讨不同程度冠脉病变男性患者胆固醇酯转运蛋白(CETP)水平及临床意义。方法用ELISA法测定42例男性冠心病(CHD)患者及49例健康男性对照血清CETP浓度。根据冠状动脉造影结果将CHD组分为单支病变组、双支病变组及多支病变组;局限病变组及弥漫病变组;轻度狭窄组及重度狭窄组。结果CHD组CETP水平(1.37±1.07mg/L)明显高于健康对照组(0.99±0.53mg/L)(P<0.05);多支病变组(1.87±1.38mg/L)明显高于双支病变组(1.06±0.62mg/L)及单支病变组(0.93±0.49mg/L)(P<0.05);弥漫病变组(1.56±1.18mg/L)明显高于局限病变组(0.85±0.44mg/L)(P<0.05);重度狭窄组(1.67±1.22mg/L)较轻度狭窄组(0.85±0.36mg/L)明显升高(P<0.01)。结论CETP水平与冠脉病变的严重程度呈一定相关性,提示检测血清CETP水平可能有助于判断冠脉病变程度。

胆固醇酯转运蛋白基因TaqⅠ多态性与多廿烷醇降脂疗效的关系

目的:了解胆固醇酯转运蛋白(CETP)TaqⅠ基因多态性与新型降脂药物多廿烷醇(policosanol)疗效的关系。方法:入选54例LDL-C≥3.62 mmol.L-1,或TC≥6.2 mmol.L-1汉族原发性高胆固醇血症患者,服用10mg.d-1多廿烷醇12周,于0周和12周进行血脂检查;同时进行CETP TaqI位点多态性检测(PCR-RFLP方法)。结果:CETP基因TaqI位点B1B1,B1B2,B2B2基因型频率分别是31.48%,44.44%,24.07%。0周时apoA水平在3种基因型呈B1B1<B1B2<B2B2依次增高,且HDL-C在B1B1型最低,但apoA,HDL-C在3种基因型间差异无统计学意义。多廿烷醇治疗12周后,可显著降低TC,LDL-C,apoB和LPa(P<0.05);apoA升高无统计学意义,HDL-C升高也不明显;其中B1B1,B1B2及B2B2型的HDL-C升高分别为3.19%,0.58%和0.42%,apoA升高分别为17.00%,9.64%和8.02%,但在3种基因型间差异无统计学意义。结论:多廿烷醇能显著降低原发性高胆固醇血症患者的TC,LDL-C,apoB和Lpa,但尚不能证实CETP基因TaqⅠ多态性与多廿烷醇降脂疗效有关。

胆固醇酯转运蛋白基因多态性与肥胖及对膳食干预的影响

目的探讨胆固醇酯转运蛋白(CETP)基因多态性与肥胖的关系及其对肥胖膳食干预的影响。方法从血凝块中提取DNA,用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)检测上海340名成年人的CETP基因TaqIB位点多态性;对研究对象进行体格检查并测定血脂;对其中的肥胖人群进行膳食干预,分析CETP基因多态性对干预效果的影响。结果(1)B1B1、B1B2和B2B2三种基因型的频率分别为35·6%、47·9%和16·5%,符合Hardy-Weinberg定律;B1等位基因为优势等位基因;肥胖组人群和正常组的基因型构成差异无显著性,控制相关影响因素后结果相同。(2)三种基因型的高密度脂蛋白(HDL)水平差异有显著性,B2B2型的HDL水平最高。控制环境影响因素后这种相关性仍然存在。(3)B1B2型膳食干预后HDL水平明显升高,这与其他基因型显著不同;控制基线HDL水平和性别因素后基因型对HDL水平改变没有影响。结论CETP-TaqIB位点B2B2基因型具有较高的血清HDL水平,成年肥胖人中此位点多态性无特殊性;基线HDL水平影响不同基因型的HDL对膳食干预的反应。

胆固醇酯转运蛋白基因15外显子D442G突变的检测

应用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP)的方法检测 110例脑动脉粥样硬化患者胆固醇酯转运蛋白 (CETP)基因 15外显子D44 2G错义突变。首先用聚合酶链反应特异性扩增包含人CETP基因 15外显子第 15 0 6位碱基的基因序列 ,扩增产物用限制性内切酶MspⅠ酶切 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳后分析结果。 110例脑动脉粥样硬化患者中发现 4例杂合突变 ,突变率 3 6 % ,与对照组 4%比较无明显差异。该方法简单、快速、准确 ,适合于一般实验室开展及大规模人群调查。

胆固醇酯转运蛋白基因TaqIB多态性对高糖低脂膳食诱导的健康青年血脂比值变化的影响

目的探讨胆固醇酯转运蛋白基因(CETP)TaqIB位点多态性对健康青年血脂比值的影响及在高糖低脂(HC/LF)膳食诱导的血脂比值变化中的作用。方法56名健康青年志愿者,给予7d的平衡膳食和6d的HC/LF膳食,平衡膳食蛋白、脂肪、碳水化合物含量分别为15%、31%、54%,HC/LF膳食分别为15%、15%、70%。于第1d、第8d及第14d取空腹血,测定血脂水平,计算甘油三酯/高密度脂蛋白胆固醇(TG/HDL-C)、log(TG/HDL-C)、总胆固醇(TC)/HDL-C、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)/HDL-C值。分离基因组DNA,以聚合酶链反应-限制性酶切法分析CETPTaqIB位点多态性。分析不同基因型间血脂比值的差异。结果不同基因型受试者血脂比值的基础值无明显差异。平衡膳食后,男性组B2等位基因携带者TC/HDL-C值比B1B1纯合子明显降低(P<0.05),而在女性组没发现差异。HC/LF膳食后,无论是在受试人群整体还是将男女分组分析,不同基因型之间血脂比值均无明显差异。与HC/LF膳食前相比,在受试人群整体,B1B1基因型受试者4个血脂比值均发生明显改变(P<0.05),而B2等位基因携带者仅LDL-C/HDL-C和TC/HDL-C明显降低(P<0.05)。HC/LF膳食前后4个血脂比值的差值在各基因型之间没有明显差异。男女分组分析发现,HC/LF膳食后TG/HDL-C和log(TG/HDL-C)较膳食前升高(P<0.05)仅在女性B1B1基因型受试者中出现;而LDL-C/HDL-C和TC/HDL-C均明显下降(P<0.05),且不受性别和CETPTaqIB位点多态性的影响。4个血脂比值在HC/LF膳食前后的差值,仅TC/HDL-C在男性B1B1受试者与B2携带者之间存在明显差异(P<0.05)。结论CETPTaqIB位点多态性在健康青年男性影响HC/LF膳食诱导的TC/HDL-C改变,在女性TG/HDL-C和log(TG/HDL-C)的升高中也有一定作用。

胆固醇酯转运蛋白变异体Ile405Val在欧亚人群中的频率及其对血脂代谢影响的比较研究

采用基因特异性引物通过致突变分离聚合酶链反应（ ＭＳＰＣＲ） 技术一步法检测胆固醇酯转运蛋白（ ＣＥＴＰ） 第４０５ 位异亮氨酸（Ｉｌｅ） 和缬氨酸（ Ｖａｌ） 等位基因，从而对欧洲的德意志和意大利及亚洲的日本正常人群中ＣＥＴＰ 变异体Ｉｌｅ４０５ Ｖａｌ 基因型和表现型及其相互关系进行了对比研究。结果表明该ＣＥＴＰ 基因变异体在德意志、意大利和日本人群中出现频率显著不同（０ ．３０ ｖｓ ０ ．４０ ｖｓ０ ．５１ ，Ｐ＜ ０ ．０１） ，但均与血清高密度脂蛋白胆固醇（ ＨＤＬＣ） 的升高和甘油三酯（ ＴＧ） 的降低密切相关，前者在德意志和意大利正常人群中十分显著（ Ｐ＜ ０ ．０１） ，后者在日本人群中极为明显（ Ｐ＜ ０ ．０５） 。本研究提示欧亚不同人群ＣＥＴＰ４０５Ｖａｌ 等位基因频率的差异可能是其血清ＨＤＬＣ

胆固醇酯转运蛋白－TaqIB 基因多态性与冠心病发病的相关性研究

目的：探讨胆固醇酯转运蛋白（ CETP）－TaqIB基因多态性与冠心病（ CHD）发病的相关性。方法选取天津市胸科医院2012－07～2013－03入院行冠状动脉造影检查的符合纳入标准的患者400例，冠状动脉直径狭窄≥50％者为冠心病组（312例），非冠心病组88例，进行血脂水平检测，并抽取空腹静脉血进行CETP－TaqIB基因型检测，分析CETP－TaqIB基因型与冠心病发病的相关性。结果冠心病组基因型分布和等位基因频数分布与非冠心病组比较差异均无统计学意义（ P＞0．05）。 CETP－TaqIB基因多态性与冠状动脉血管病变支数无相关性（ P＞0.05）。高密度脂蛋白（HDL－C）、低密度脂蛋白（LDL－C）与冠心病有相关性（P＜0．05），而总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、TaqIB基因型与冠心病发病无相关性（P＞0．05）。 CETP－TaqIB基因多态性与冠心病严重程度无相关性（P＞0．05）。结论 CETP－TaqIB基因分型与冠心病患者HDL－C、LDL－C水平有关，TaqIB的基因型与冠心病发病无相关性，与冠心病三支病变严重程度无相关性，TaqIB基因可能不是冠心病发病的独立危险因素。