酯酰-胆固醇酯酰转移酶亚型与动脉粥样硬化

巨噬细胞或者平滑肌细胞聚集,吞噬脂质后形成泡沫化细胞是动脉粥样硬化病变的一个起始环节。酯酰-胆固醇酯酰转移酶(ACAT)是细胞内唯一催化胆固醇酯化的酶,存在ACAT1和ACAT2两种亚型。本文就其两种亚型在动脉粥样硬化中的作用及其调控因素作一综述。

降胆固醇药Ezetimibe的发现——基于受体外的药物设计新方法

综述新型降胆固醇药Ezetimibe的设计与发现,着重介绍对其先导物SCH48461及体内代谢物的药理活性研究和基于SCH48461活性代谢物及软、硬药理论的药物设计过程,展现了一种完全脱离受体模型、基于受体外的药物设计新方法。

酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1在退行性瓣膜钙化灶周围的表达

脂酰辅酶A：胆固醇酯酰转移酶1（ACAT1）是细胞内胆固醇代谢重要的限速酶。我们推测ACAT1可能参与退行性主动脉瓣疾病的发生发展。 一、资料与方法 1．一般资料：收集2012年10月至2013年10月在海南省人民医院心脏外科因退行性主动脉瓣膜行手术切除的主动脉瓣标本30例[其中男17例，女13例，年龄（55±6）岁]，因夹层动脉瘤行Bentall手术切除正常主动脉瓣标本7例[男4例，女3例，年龄（41±8）岁]。所有组织标本均经患者及家属知情同意后采集，研究方案获医院伦理委员会批准。

IL-1通过PKC/MAPK激活蛋白激酶通路上调泡沫细胞ACAT-1的表达及活性

目的研究白细胞介素1(IL-1)是否通过蛋白激酶C/丝裂原激活蛋白激酶(PKC/MAPK)信号通路上调泡沫细胞中脂酰CoA胆固醇酯酰转移酶-1(ACAT-1)的表达及活性。方法复苏并培养人单核细胞白血病细胞系/THP-1细胞,与200 nmol/L乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)共孵育48 h,再与氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)共孵育24 h,油红O染色观察胞质内脂质沉积;分别以非放射性酶法和Western blot检测细胞中PKC和MAPK活性;加入PKC和MAPK抑制剂后,以Western blot及液相闪烁计数法检测ACAT-1的蛋白表达及酶活性。结果与PMA共孵育48 h后,THP-1细胞逐渐伸出突起,由圆形、悬浮式生长转变为多角形、梭形,呈阿米巴样贴壁生长;经Ox-LDL诱导24 h后,油红O染色胞质内可见大量吞噬的脂质小滴。与泡沫细胞组相比,泡沫细胞加IL-1组PKC活性、MAPK活性、ACAT-1蛋白表达及活性增加(P<0.05);ACAT-1蛋白表达由4.92±0.11增至5.95±0.12(P<0.05);PKC抑制剂和MAPK抑制剂能显著抑制IL-1上调ACAT-1表达(P<0.05)及活性(P<0.05)的作用。结论 IL-1上调泡沫细胞ACAT-1表达及活性,其作用是通过PKC/MAPK信号通路途径实现的。

西红花酸对大鼠血浆胆固醇的调节作用及其机制研究

目的:探讨西红花酸对高胆固醇血症大鼠血浆胆固醇的影响及其机制。方法:建立大鼠高胆固醇血症模型,观察西红花酸对胆固醇吸收、合成、转化等方面的影响。同时,建立细胞模型,考察西红花酸对内源性胆固醇合成的影响。结果:西红花酸能降低血浆总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度,升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)浓度及卵磷脂胆固醇酯酰转移酶(LCAT)、7α-羟化酶(CYP7A1)活性及mRNA表达,降低HMG-COA还原酶(HMG-CoAR)活性及mRNA表达;增加胆汁酸排泄。体外试验显示,西红花酸可抑制内源性胆固醇的合成。结论:西红花酸能降低大鼠血浆胆固醇水平,其机制可能是抑制内源性胆固醇合成及促进胆固醇向胆汁酸转化及排泄。

马齿苋脂肪油对动脉粥样硬化大鼠胆固醇逆向转运相关基因表达的影响

目的探讨马齿苋脂肪油有效成分对肝脏卵磷脂胆固醇酯酰转移酶(LCAT)、载脂蛋白AI(apoAI)和高密度脂蛋白受体(SR-BI)基因表达的干预作用,分析马齿苋调节胆固醇逆向转运(RCT)通路的分子机制。方法健康雄性SD大鼠24只,随机分为模型组、多烯康组、马齿苋组、正常组,每组6只。应用高脂高胆固醇膳食诱导建立动脉粥样硬化(AS)大鼠模型,用定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术测定LCAT、apoAI及SR-BI mRNA表达量,以免疫比浊法、沉淀法测定血清apoAI、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。结果模型组大鼠肝脏LCAT mRNA和apoAI mRNA的表达量明显下降,分别为0.43±0.20、2.33±0.35,与正常组(分别为1.49±0.32、6.30±0.82)、多烯康组(分别为1.15±0.16、4.32±0.69)、马齿苋组(分别为1.12±0.12、4.21±0.76)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠血清apoAI([0.15±0.03)g/L]和HDL-C水平([0.53±0.25)mmol/L]明显下降,与马齿苋组([0.39±0.09)g/L、(0.86±0.04)mmol/L]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。除正常组外,多烯康组、马齿苋组、模型组肝脏LCAT mRNA表达量与HDL-C水平均呈明显的正相关(r值分别为0.935、0.927、0.892,P<0.01)。模型组大鼠肝脏SR-BI mRNA水平(1.33±0.57)下降,马齿苋组(3.20±0.41)高于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论在转录水平阻抗高脂高胆固醇负荷下调大鼠肝脏LCAT和apoAI mRNA以及SR-BI mRNA表达的作用,促进RCT过程是马齿苋改善高脂血症、抗动脉粥样硬化的重要分子机制。

IL-1对单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中ACAT-1 mRNA表达的影响

目的:研究IL-1对单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中ACAT-1 mRNA表达的影响。方法:(1)复苏并培养人单核细胞株THP-1细胞并诱导为巨噬细胞和泡沫细胞。(2)RT-PCR法检测A-CAT-1 mRNA在单核细胞、巨噬细胞、泡沫细胞以及泡沫细胞加IL-1和泡沫细胞加IL-1/IL-1单克隆抗体中的表达。结果:(1)单核细胞株THP-1细胞被诱导为巨噬细胞和泡沫细胞。(2)与单核细胞比,巨噬细胞、泡沫细胞以及泡沫细胞加IL-1的ACAT-1 mRNA表达均明显增高,尤以泡沫细胞加IL-1中增高明显;与泡沫细胞加IL-1比,泡沫细胞加IL-1/IL-1单克隆抗体的ACAT-1 mRNA表达下降。结论:(1)IL-1对单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中ACAT-1 mRNA的表达有上调作用,IL-1单克隆抗体可以拮抗这种效应。(2)IL-1可上调ACAT-1 mRNA表达水平,可能是巨噬细胞脂质过负荷后A-CAT-1上调的始动因子之一。

ACAT-1在单核细胞向泡沫细胞分化过程中的表达变化

目的研究单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中脂酰CoA胆固醇酯酰转移酶-1(ACAT-1)表达及活性的变化。方法复苏、培养人单核细胞株THP-1细胞,与乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)、PMA+氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育1～4 d,RT-PCR方法检测单核细胞分化过程中ACAT-1 mRNA表达,Westernblotting检测ACAT-1蛋白表达的变化。结果(1)单核细胞复苏后加入PMA诱导48 h后,分化为巨噬细胞。经PMA+ox-LDL诱导24 h后分化为泡沫细胞。(2)与无血清培养单核细胞对照组比较,在PMA诱导单核细胞株THP-1向巨噬细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平明显增高(P<0.05),呈时间依赖效应。(3)巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平增高,呈时间依赖效应。但和无血清培养巨噬细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论单核细胞株THP-1经PMA,PMA/ox-LDL诱导后,可分化为巨噬细胞、泡沫细胞。ACAT-1的表达及活性增高在单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中起着重要作用。

老年退行性主动脉瓣中巨噬细胞标志分子CD68与ACAT1、ABCA1、促炎因子表达的相关性

目的:研究胆固醇相关因子脂酰辅酶A:胆固醇酯酰转移酶1(ACAT1)、ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、MCP1、IL-10在老年退行性主动脉瓣疾病(DAVD)中的表达。方法:收集因退行性主动脉瓣狭窄而行手术切除的严重钙化主动脉瓣标本80例,经HE和免疫组织化学染色,观察退行性主动脉瓣组织学改变和ACAT1、ABCA1表达特点,RT-PCR检测组织中胆固醇相关基因CD68、ACAT1、ABCA1和炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、MCP1、IL-10基因的表达,单元线性回归分析巨噬细胞标志分子CD68与ACAT1、ABCA1和TNF-α、IL-1β、MCP1、IL-10表达的相关性。结果:与正常主动脉瓣比较,DAVD增厚,结节性钙化灶存在,增生纤维组织排列紊乱使瓣膜失去原有结构,钙化周围发现巨噬细胞和其他炎性细胞、泡沫细胞、新生血管形成;免疫组织化学染色示:正常主动脉瓣未见巨噬细胞,而DAVD大量巨噬细胞浸润;RT-PCR检测显示,与正常主动脉瓣相比,DAVD中ACAT1和ABCA1的表达增高(P<0.05)。正常主动脉瓣无CD68表达,DAVD表达CD68。单元线性回归分析表明,CD68与ACAT1(r=-0.83,P<0.05),ABCA1(r=-0.89,P<0.05)表达正相关。与正常主动脉瓣相比,DAVD中TNF-α、IL-1β、MCP1的表达增高,而IL-10表达降低(P<0.05)。单元线性回归分析表明,CD68表达与TNF-α(r=0.87,P<0.05)、IL-1β(r=0.92,P<0.05)、MCP1(r=0.87,P<0.05)呈正相关,与IL-10(r=-0.64,P<0.05)负相关。结论:在DAVD病变中,巨噬细胞浸润的同时伴随着ABCA1、ACAT1和促炎因子表达增加,巨噬细胞标志CD68与胆固醇相关基因ABCA1、ACAT1和促炎因子正相关。