胆固醇-7,8-脱氢酶大肠杆菌工程菌的构建

7-去氢胆固醇在化妆品和医药领域具有较大的应用需求,但现有的生产方法为化工法,流程复杂,且易污染环境.发酵法生产7-去氢胆固醇是一条新颖且具有潜在竞争力的生产途径.以虾Y-器官微粒体的cDNA文库为模板进行胆固醇-7,8-脱氢酶基因的扩增,与质粒载体连接后转化大肠杆菌,并对该工程菌的生物催化胆固醇-7,8-脱氢能力进行检测.

7-脱氢胆固醇还原酶在人类肿瘤中致癌作用的泛癌分析

探究DHCR7(7-脱氢胆固醇还原酶)基因在肿瘤里的表达概况,以及临床预后关联情况。方法 采用数据库(TCGA和GEO)的数据研究DHCR7在癌组织和癌旁组织里的表达差异情况,采用GEPIA2数据库里分析DHCR7不同表达情况肿瘤患者的OS(总生存率)和DFS(无病生存率);使用cBioPortal工具分析肿瘤的蛋白质结构的改变频率、突变位点信息及类型、copy number changes (CNA)和3D (three-dimensional)结构数据;使用TIMER2数据库分析DHCR7的表达与所有TCGA数据库中肿瘤免疫浸润的关系。结果 与正常组织相比,DHCR7的表达水平在大多数人类肿瘤中增加,在几种原发性肿瘤组织中DHCR7的蛋白有更高的表达;DHCR7表达的升高与CESC、HNSC、BLCA和UVM癌症的的不良预后有关;DHCR7的最高改变频率在食管腺癌患者中约为22%,在不同类型的遗传改变中,扩增是最常见的类型;免疫细胞浸润分析结果显示DHCR7的表达与HNSC中CD8+ T细胞的浸润之间负相关。结论 DHCR7的表达水平在大多数人类肿瘤中升高,并且和临床不良预后紧密相关,DHCR7的表达的升高影响了肿瘤中免疫细胞的浸润,因此其可能作为肿瘤治疗新靶点。

胆固醇7-羟化酶CYP7A1表达及调控相关研究进展

胆固醇7-羟化酶(cholesterol 7-alpha hydroxy-lase,CYP7A1)是胆汁酸合成代谢经典途径的限速酶.其表达不仅具有昼夜节律,而且可由基因多态性、饮食、激素、细胞因子及药物等多种因素调节.CYP7A1的基因多态性与疾病及对药物的治疗反应存在相关性,同时多种核受体参与了CYP7A1的表达的调控,共同组成了转录激活/抑制级联网络,维持体内胆汁酸合成及脂质动态平衡.本文主要对CYP7A1表达、调控及与疾病及治疗反应的相关性等方面的研究进行综述.

附子多糖预防高胆固醇血症的作用及其对肝脏CYP7α-1表达的影响

目的:探讨附子多糖(FPS)预防高胆固醇血症的作用及其对肝脏胆固醇7α-羟化酶(CYP7α-1)表达的影响。方法:SPF级雄性Wistar大鼠50只,体重100 g,随机分为正常组(control)、高胆固醇组(HC)和HC+附子多糖(HC+FPS)低、中、高3个剂量组,每组10只,分别给予正常、高胆固醇及高胆固醇加附子多糖(224、448和896mg.kg-1.d-1)饮食,持续2周,检测各组的血脂水平;观察control组、HC组和HC+FPS(224 mg.kg-1.d-1)组大鼠的体重、进食量和粪便量的变化,实验结束后取3组大鼠的肝脏行HE染色;并检测3组大鼠肝脏羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶mRNA水平、CYP7α-1 mRNA和蛋白水平以及粪便总胆汁酸含量等方面的改变。结果:附子多糖能显著抑制高胆固醇血症大鼠血清中总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平(P<0.05);HC+FPS组大鼠肝细胞脂肪变性较HC组轻微;real-time PCR和Western blotting结果显示附子多糖能显著上调高胆固醇大鼠肝脏CYP7α-1 mRNA水平和蛋白表达并明显降低HMG-CoA还原酶的mRNA水平(P<0.01);HC组大鼠粪便中胆汁酸的含量增多而HC+FPS组进一步增加(P<0.05)。结论:附子多糖具有明显的降血胆固醇作用,其机制与上调CYP7α-1 mRNA及蛋白水平和下调大鼠肝脏HMG-CoA还原酶mRNA水平有关。

胆固醇7α-羟化酶基因A-204C单核苷酸多态性及其与血浆血脂的关联

为探讨胆固醇7α-羟化酶基因(CYP7A1)多态性与中国四川汉族人群的分布及其与冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)易感性的关系,对183例CHD患者和101例对照用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)进行CYP7A1基因A-204C基因座Eco31I酶切多态性分析。结果可见CYP7A1基因A-204C多态基因座等位基因C、A频率在CHD组和正常对照组分别为0.840、0.160和0.822、0.178,基因频率分布符合Hardy-Weiberg平衡定律。CYP7A1基因A-204C多态基因座基因型频率,等位基因A、C频率在CHD患者组和正常对照组间比较差异无显著性(P>0.05),但冠心病患者组中AA,AC,CC3种基因型之间总胆固醇(TC)的差异具有显著性(P<0.05),AA基因型患者的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平较AC,CC基因型患者显著降低(P<0.05);而对照组中CC,CA基因型个体间总胆固醇(TC)水平差异有显著性(P<0.05)。中国汉族与白种人CYP7A1基因A-204C多态基因座等位基因频率比较,两者差异具有显著性(P<0.01)。提示CYP7A1基因A-204C多态基因座多态性与CHD无相关性,但与总胆固醇存在较密切的关联(P<O.05),在CHD患者组AA基因型中高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平显著下降(P<0.05)。

中链甘油三酯对小鼠胆固醇代谢和胆固醇7α-羟化酶表达的影响

目的研究中链甘油三酯对小鼠胆固醇代谢的影响及可能的机制。方法分别用AIN-93G配方饲料(BC),含1%胆固醇的AIN-93G配方饲料(Chol),含1%胆固醇和14%富含豆蔻酸的长链甘油三酯(LCT)的AIN-93G配方饲料(Chol+LCT),含1%胆固醇和14%的中链甘油三酯(MCT)的AIN-93G配方饲料(Chol+MCT)喂养C57小鼠6周,每组15只。观察血清总胆固醇(TC)、肝脏胆固醇含量、机体总胆汁酸含量以及肝脏胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)的表达。结果Chol+MCT组小鼠血清TC低于(P<0.01)、肝脏胆固醇高于(P<0.01)、机体总胆汁酸含量低于(P<0.01)、CYP7A1表达低于(P<0.01)Chol组小鼠;Chol+MCT组小鼠血清TC低于(P<0.01)、机体总胆汁酸含量以及CYP7A1表达高于(P<0.01)Chol+LCT组小鼠、肝脏胆固醇含量不变。结论MCT对机体胆固醇水平的影响与CYP7A1表达有关。

胆固醇7α-羟化酶基因研究进展

胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)是胆汁酸经典合成途径中的限速酶,对维持机体胆固醇代谢平衡起关键作用。目前已知CYP7A1基因的表达受包括该基因自身的多态性在内的多种因子调控。CYP7A1代谢途径作为脂类代谢通路的重要一部分,其活性发生改变后可能会引起与脂类代谢紊乱有关的胆结石、胆囊癌和心血管疾病等。就有关CYP7A1基因的最新研究进展进行了较系统的综述。

养心颗粒对易损斑块家兔模型胆固醇7-α-羟化酶和MMP-9含量的影响

目的:探讨养心颗粒对易损斑块家兔模型胆固醇7-α-羟化酶和MMP-9含量的影响。方法:采用球囊损伤家兔颈总动脉,同时给予家兔高脂饮食喂养8周,8周后注入p53腺病毒载体,将造模成功家兔随机分为模型对照组、养心颗粒组、辛伐他汀组,每组6只,另取6只家兔作为空白对照组,药物治疗2周后进行药物触发,用ELISA法检测胆固醇7-α-羟化酶和MMP-9含量。结果:养心颗粒组与治疗前比较,CYP7A1含量升高、MMP-9含量减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。辛伐他汀组与治疗前比较,CYP7A1含量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);两治疗组相互比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:养心颗粒可升高易损斑块家兔模型血清CYP7A1含量,降低MMP-9表达水平,这可能是养心颗粒稳定易损斑块的作用机制之一。

胆固醇7α-羟化酶调节的研究进展

胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)是在肝脏合成并促使胆固醇转化成胆酸的限速酶,对维持体内胆固醇代谢平衡起到关键作用。CYP7A1基因表达受脂代谢相关的多个核因子的精细调控,诸如HNF4a,LXR,FXR,SHP和FGF15/19及相关激素等其他因子,以维持胆固醇代谢平衡;多种中药及饮食成分对CYP7A1的基因表达也有明显调节作用,进而影响血脂代谢。本文就近10年来有关CYP7A1调节的研究进展综述如下。

胆固醇7α-羟化酶基因多态性与儿童血脂水平的关系

目的:探讨胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)基因多态性与儿童血脂水平的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对216例健康儿童CYP7A1基因的A-204C基因座进行Eco31Ⅰ酶切多态性分析,血脂测定在全自动化分析仪上进行。结果:研究人群中CYP7A1基因的三型频率分别为:AA型6.0%,AC型26.4%、CC型67.6%。AA基因型在LDL-C,TC,Lp(a)水平上均低于其他基因型,并且其差异具有显著性(P<0.05)。CC基因型在HDL-C水平上均高于其他基因型,且其差异具有显著性(P<0.05)。三型在ApoA上两两之间均存在显著性差异,而在TG中无显著性差异。结论:CC基因型在研究人群中所占的比例最高,AA基因型所占的比例最小。CYP7A1的基因多态性与儿童的血脂水平存在密切的关系。

生物法合成7-脱氢胆固醇研究进展

化学合成维生素D3工艺虽然成熟,但有着本身难以解决的问题。酶促生化反应具有专一性强、条件温和、反应速度快、效率高等特点。本文主要阐述以生物合成维生素D3的原体-7-脱氢胆固醇几种方法,一种是以角鲨烯、醋酸盐为底物,通过动物肝脏微粒体酶生物合成7-脱氢胆固醇;另一种是利用螃蟹许多器官的酶能将胆固醇转化成维生素D3的原体-7-脱氢胆固醇。同时还论述了7,8-胆固醇脱氢酶的克隆与表达,就有关的研究进展、重要基因的克隆表达、技术的应用前景进行了综述。

胆固醇7α-羟化酶基因多态性与小儿血脂的关系

目的:探讨胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)基因多态性与湖北儿童血脂水平的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对216例健康儿童CYP7A1基因的A-204C基因座进行Eco31I酶切多态性分析,血脂测定在全自动化分析仪上进行。结果:研究人群中CYP7A1基因的3型频率分别为:AA型6.0%,AC型26.4%、CC型67.6%。AA基因型在LDL-C,TC,Lp(a)水平上均低于其他基因型,并且其差异具有显著性。CC基因型在HDL-C水平上均高于其他基因型,并且其差异具有显著性。3型在ApoA上两两之间均存在显著性差异,而在TG中无显著性差异。结论:CC基因型在研究人群中所占的比例最高,AA基因型所占的比例最小。CYP7A1的基因多态性与儿童的血脂水平存在密切的关系。

铅对原代培养小鼠肝细胞胆固醇7α-羟化酶基因表达影响

目的探讨醋酸铅对培养的小鼠肝细胞中胆固醇7α-羟化酶基因表达的作用,为解释铅与血脂之间的关系提供理论依据。方法提取20只昆明小鼠的肝细胞,进行离体培养,以不同剂量的醋酸铅作为处理因素,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测胆固醇7α-羟化酶基因的mRNA表达,并进行比较。结果不同剂量的醋酸铅对胆固醇7α-羟化酶基因转录水平的影响不同。高、中剂量组与对照组的差异均具有显著性(P<0.05或P<0.01),表现为随着染毒剂量的增加,胆固醇7α-羟化酶的mRNA表达量逐渐下降。结论醋酸铅作为一种暴露因素对胆固醇7α-羟化酶基因的表达有抑制作用。

阻塞性胆汁淤积大鼠肝脏胆固醇7α-羟化酶和核受体FXR、SHP表达变化

目的:通过建立梗阻性黄疸动物模型,观察胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7alpha-hydroxylase,CYP7A1)、类法尼醇X受体(farnesoid Xreceptor,FXR)及小异源二聚体伴侣受体(small heterodi mer partner,SHP)的表达变化,并分析CYP7A1和FXR、SHP之间的关系。方法:采用胆总管结扎术制备大鼠梗阻性黄疸模型,分别于术后1、3、14 d麻醉后放血处死。取大鼠肝脏,抽提总RNA,采用实时定量RT-PCR检测CYP7A1 mRNA表达;提取肝细胞核蛋白,采用蛋白质印迹技术检测FXR和SHP蛋白表达。结果:与假手术对照组相比,梗阻性黄疸组大鼠肝细胞CYP7A1 mRNA表达明显增强,FXR和SHP蛋白表达同步降低,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.05)。结论:CYP7A1表达增强可能与FXR、SHP表达减弱有关。

胆固醇7-羟化酶基因rs4738687多态性与乙型肝炎病毒感染的相关性研究

目的探讨胆固醇7-羟化酶(CYP7A1)基因rs4738687多态性与乙型肝炎病毒(HBV)感染的相关性。方法回顾性选取2015年1月至2019年2月在德阳市人民医院治疗的HBV感染病人200例(观察组),其中慢性HBV感染者140例,HBV相关肝硬化病人60例;同时选取该院健康体检者120例作为对照组。采用改良多重高温连接酶检测反应技术检测CYP7A1基因的rs4738687位点多态性。结果观察组和对照组rs4738687位点基因型和等位基因分布比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组HBV相关肝硬化病人rs4738687位点AG+GG基因型比例为90.00%,明显高于慢性HBV感染病人35.00%(P<0.05);观察组不同性别、年龄病人rs4738687位点AG+GG基因型比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论CYP7A1基因rs473868位点多态性与HBV感染易感性无明显关系,但可能与HBV相关肝硬化发生存在正相关关系。

虾Y-器官7、8-脱氢酶转化胆固醇为7-脱氢胆固醇研究

[目的]以虾Y-器官微粒体7、8-脱氢酶催化胆固醇,制备7-脱氢胆固醇。[方法]通过单因素试验,研究影响转化反应的各种因素。[结果]将摘除眼柄的刀额新对虾(Metapenaeus ensis)Y-器官,匀浆、离心制备的微粒体酶液,于22℃与胆固醇避光反应6 h,可以积累相对较多的7-脱氢胆固醇。[结论]该研究为利用虾Y-器官7、8-脱氢酶转化胆固醇为7-脱氢胆固醇奠定基础。

7β-羟基胆固醇对创伤性癫痫大鼠海马谷氨酸转运体表达的影响及机制

目的:研究7β-羟基胆固醇(7-βOHCH)对创伤性癫痫大鼠谷氨酸转运体mRNA表达的影响及其机制。方法:105只大鼠脑内立体定向单侧杏仁体注射三氯化铁(FeCl3)建立创伤性癫痫模型,随机分成对照组(A组)、模型组(B组)和7-βOHCH治疗组(C组),动态观察各组大鼠行为学表现、脑电图变化、海马区域GFAP和谷氨酸转运体mRNA表达。结果:A组大鼠术后无明显行为学改变;术后30 d时,B组94.2%大鼠出现癫痫样发作而C组为74.3%(P<0.05)。A组在整个实验过程中各导联均以α和β波为主要节律的基础脑电图,B、C组出现与痫性发作一致的高幅棘波、棘慢波综合和尖波。注射侧海马组织各区B组均有大量胶质细胞增生而C组无(P<0.01)。海马3种谷氨酸转运体mRNA的表达与A组比较,B、C组均呈先高后低的变化趋势。结论:7β-OHCH通过抑制海马区域胶质细胞增生、上调GLAST和GLT1的表达,发挥治疗创伤性癫痫的作用。

RP-HPLC同时检测发酵液中7-脱氢胆固醇与胆固醇的研究

7-脱氢胆固醇是维生素D3的直接前体,试验研究了RP-HPLC同时检测发酵液中7-脱氢胆固醇及其前体胆固醇的方法和条件。应用Waters sunfire C18(Φ416×150 mm,5μm)色谱柱,乙腈∶异丙醇=80∶20(v∶v)为流动相,1.0mL/min流速,38℃柱温,于波长210 nm紫外检测器检测。在此条件下,7-脱氢胆固醇和胆固醇呈现较好的分离和重现性,其保留时间分别为8.248min和9.598min左右,最低检测浓度分别为8mg/L和10 mg/L,平均回收率分别为99.53%和97.67%。

7β-羟基胆固醇减少铁离子所致的大鼠脑反应性胶质增生

目的 研究 7β 羟基胆固醇 (7βOHCH)抗脑损伤后反应性星形胶质细胞增生的作用及其意义。方法 在大鼠脑皮质注射铁离子致胶质细胞增生 ,损伤部位同时注入含 7βOHCH脂质体悬液或不含 7βOHCH脂质体悬液 ,用免疫组化和图像分析技术观察各组大鼠脑损害改变及胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数。结果 注入铁离子的大鼠脑损伤周围皮质有大量炎性细胞浸润 ,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数比对照组明显增多 ,注入 7βOHCH的大鼠脑损伤周围皮质细胞结构、胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数与对照组相似。 结论 7βOHCH对反应性星形胶质细胞增生有明显抑制作用 ,为防止脑损伤后反应性胶质增生和帮助脑功能恢复提供了又一途径。

7-脱氢胆固醇的合成工艺研究

胆固醇在石油醚中与醋酸酐反应得到胆固醇醋酸酯,经2,4,4,6-四溴-2,5-环己二烯酮处理得到7-溴化胆固醇酯,再用2,4,6-三甲基吡啶脱溴得到7-脱氢胆固醇醋酸酯,最后水解得到目标产物7-脱氢胆固醇.对上述四步反应条件进行了研究,第三步以2,4,4,6-四溴-2,5-环己二烯酮为溴化剂,具有选择性高、反应条件温和、产率高等特点.四步总收率(以胆固醇计)达68.9%.