胆固醇7-羟化酶CYP7A1表达及调控相关研究进展

胆固醇7-羟化酶(cholesterol 7-alpha hydroxy-lase,CYP7A1)是胆汁酸合成代谢经典途径的限速酶.其表达不仅具有昼夜节律,而且可由基因多态性、饮食、激素、细胞因子及药物等多种因素调节.CYP7A1的基因多态性与疾病及对药物的治疗反应存在相关性,同时多种核受体参与了CYP7A1的表达的调控,共同组成了转录激活/抑制级联网络,维持体内胆汁酸合成及脂质动态平衡.本文主要对CYP7A1表达、调控及与疾病及治疗反应的相关性等方面的研究进行综述.

SLE患者血清EB病毒诱导基因2和胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平变化及临床意义

目的探讨EB病毒诱导基因2(EBI2)和胆固醇25α7羟化酶CYP7B1在系统性红斑狼疮(SLE)发生、发展中的作用。方法选取SLE患者20例(观察组),体检健康者20例(对照组),采用ELISA法检测两组血清EBI2和胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平。根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分,比较观察组SLEDAI<10分者和≥10分者血清EBI2和胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平。结果观察组血清EBI2及胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平分别为(2.82±0.60)×10^(-1)、(158.8±22.62)×10^(-1)ng/m L,均高于对照组的(1.89±0.68)×10^(-1)、(89.92±23.78)×10^(-1)ng/m L(P均<0.01)。观察组SLEDAI≥10分13例,SLEDAI<10分7例;SLEDAI≥10分者血清EBI2及胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平分别为(3.26±0.35)×10^(-1)、(183.78±17.41)×10^(-1)ng/m L,均高于SLEDAI<10分者的(2.20±0.25)×10^(-1)、(130.57±16.19)×10^(-1)ng/m L(P均<0.01)。结论 SLE患者血清EBI2及胆固醇25α7羟化酶CYP7B1水平均升高,二者可能共同参与了SLE的发生、发展。

胆固醇7α-羟化酶在毕赤酵母中的异源表达

胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)是胆固醇分解为胆汁酸的限速酶,其催化胆固醇为7α-羟基胆固醇,7α-羟基胆固醇是重要的甾体药物及中间体。以人源CYP7A1作为研究对象,首先构建了重组毕赤酵母/pPIC3.5K-CYP7A1;然后对7α-羟化酶进行分子改造,之后将酶与不同来源NADPH细胞色素氧化还原酶(CPR)适配,以提高目的产物7α-羟基胆固醇的产量。其中突变体G485A将7α-羟基胆固醇的产量提高了8.70%;5种不同来源的CPR与CYP7A1共表达毕赤酵母菌株均可提高7α-羟基胆固醇的产量,并且罗汉果(Siraitia grosvenorii)来源的CPR(SgCPR)与CYP7A1适配性最好,使7α-羟基胆固醇的产率提高了82.26%;在以上研究的基础上,构建突变体G485A与SgCPR共表达毕赤酵母菌株,最终7α-羟基胆固醇的产量提高了133.79%,其产量为0.25 mg/L。实验在毕赤酵母中成功异源表达人源胆固醇7α-羟化酶,并通过分子改造及与不同来源CPR适配的方法提高了7α-羟基胆固醇的产量。

胆固醇7α-羟化酶基因与妊娠期增重及妊娠结局相关性研究

目的:分析孕前体重指数(BMI)正常的单胎初产妇,胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)基因与妊娠期增重及妊娠结局相关性。方法:选择孕前BMI正常的单胎初产妇494例,根据是否合并妊娠期糖尿病(GDM)分为健康组(278例)与GDM组(216例),两组均行CYP7A1基因-204A/C多态性检测,在产前1周收集血液样本常规行空腹血糖(FBG)、血脂指标检测,并统计两组妊娠期增重程度与妊娠结局,进一步分析CYP7A1基因-204A/C多态性与妊娠期增重、不良妊娠结局等指标的相关性。结果:健康组CYP7A1基因-204A/C多态位点的等位基因A、C频率分别为56.12%、43.88%,GDM组分别为58.80%、41.20%,两组基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡原理(P>0.05)。GDM组甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、FBG水平高于健康组,妊娠期增重以及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平低于健康组(均P<0.05);各基因型亚组间比较,健康组的CC基因亚组FBG水平低于AA基因亚组,AC基因亚组的HDL-C水平高于AA基因亚组(均P<0.05);GDM组的CC基因亚组妊娠期增重小于AA基因亚组(P<0.05)。两组产妇再按照妊娠期增重标准不同进行分组,在妊娠期增重≤14.0 kg组中,CC基因型亚组的TG水平明显高于AA基因型亚组,且巨大儿发生率明显高于AA基因型亚组(均P<0.05);在妊娠期增重>14.0 kg组中,CC基因型亚组的FBG水平明显小于AA基因型亚组(P<0.05)。Pearson相关性分析,CC基因型与妊娠期增重呈负相关性(r=-0.339,P=0.004),与妊娠不良妊娠结局呈正相关性(r=0.214,P=0.011)。结论:CYP7A1-204A/C基因多态性或导致CYP7A1酶的表达或活性改变,可能对产妇妊娠期增重和新生儿不良妊娠结局产生影响。然而其调控机制较为复杂,尚需要更多研究来加以证实,以方便后期更好地进行妊娠期营养管理和母婴保健。

CYP3A7与MDR1基因多态性与镇痛效应的关系研究

目的 分析CYP3A7、MDR1基因多态性与镇痛效应之间的关系。方法 回顾性分析87例行腹部手术患者的一般临床资料,术后均采用舒芬太尼镇痛,对影响患者术后镇痛效应的相关因素进行分析。结果 87例行腹部手术的患者中,术后轻度疼痛(轻度疼痛组)45例、术后中重度疼痛(中重度疼痛组)42例。两组的年龄、性别、美国麻醉医师协会(ASA)分级以及CYP3A7基因多态性比较差异无统计学意义(P>0.05);两组MDR1 2677G>T/A基因多态性比较差异有统计学意义(P<0.05)。将轻度疼痛组与中重度疼痛组患者具有统计学意义的单因素纳入Logistic回归模型进行多因素分析,结果表明MDR1 2677G>T/A GG、GA、TA、AA为术后镇痛效应的影响因素(OR=0.998、1.078、1.044、1.038,P<0.05)。结论 MDR1基因多态性对患者术后镇痛效应可产生影响,临床在制定镇痛方案时应该综合考虑患者基因型等相关因素制定个体化的镇痛治疗方案。

附子多糖预防高胆固醇血症的作用及其对肝脏CYP7α-1表达的影响

目的:探讨附子多糖(FPS)预防高胆固醇血症的作用及其对肝脏胆固醇7α-羟化酶(CYP7α-1)表达的影响。方法:SPF级雄性Wistar大鼠50只,体重100 g,随机分为正常组(control)、高胆固醇组(HC)和HC+附子多糖(HC+FPS)低、中、高3个剂量组,每组10只,分别给予正常、高胆固醇及高胆固醇加附子多糖(224、448和896mg.kg-1.d-1)饮食,持续2周,检测各组的血脂水平;观察control组、HC组和HC+FPS(224 mg.kg-1.d-1)组大鼠的体重、进食量和粪便量的变化,实验结束后取3组大鼠的肝脏行HE染色;并检测3组大鼠肝脏羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶mRNA水平、CYP7α-1 mRNA和蛋白水平以及粪便总胆汁酸含量等方面的改变。结果:附子多糖能显著抑制高胆固醇血症大鼠血清中总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平(P<0.05);HC+FPS组大鼠肝细胞脂肪变性较HC组轻微;real-time PCR和Western blotting结果显示附子多糖能显著上调高胆固醇大鼠肝脏CYP7α-1 mRNA水平和蛋白表达并明显降低HMG-CoA还原酶的mRNA水平(P<0.01);HC组大鼠粪便中胆汁酸的含量增多而HC+FPS组进一步增加(P<0.05)。结论:附子多糖具有明显的降血胆固醇作用,其机制与上调CYP7α-1 mRNA及蛋白水平和下调大鼠肝脏HMG-CoA还原酶mRNA水平有关。

胆固醇7α-羟化酶基因A-204C单核苷酸多态性及其与血浆血脂的关联

为探讨胆固醇7α-羟化酶基因(CYP7A1)多态性与中国四川汉族人群的分布及其与冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)易感性的关系,对183例CHD患者和101例对照用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)进行CYP7A1基因A-204C基因座Eco31I酶切多态性分析。结果可见CYP7A1基因A-204C多态基因座等位基因C、A频率在CHD组和正常对照组分别为0.840、0.160和0.822、0.178,基因频率分布符合Hardy-Weiberg平衡定律。CYP7A1基因A-204C多态基因座基因型频率,等位基因A、C频率在CHD患者组和正常对照组间比较差异无显著性(P>0.05),但冠心病患者组中AA,AC,CC3种基因型之间总胆固醇(TC)的差异具有显著性(P<0.05),AA基因型患者的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平较AC,CC基因型患者显著降低(P<0.05);而对照组中CC,CA基因型个体间总胆固醇(TC)水平差异有显著性(P<0.05)。中国汉族与白种人CYP7A1基因A-204C多态基因座等位基因频率比较,两者差异具有显著性(P<0.01)。提示CYP7A1基因A-204C多态基因座多态性与CHD无相关性,但与总胆固醇存在较密切的关联(P<O.05),在CHD患者组AA基因型中高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平显著下降(P<0.05)。

中链甘油三酯对小鼠胆固醇代谢和胆固醇7α-羟化酶表达的影响

目的研究中链甘油三酯对小鼠胆固醇代谢的影响及可能的机制。方法分别用AIN-93G配方饲料(BC),含1%胆固醇的AIN-93G配方饲料(Chol),含1%胆固醇和14%富含豆蔻酸的长链甘油三酯(LCT)的AIN-93G配方饲料(Chol+LCT),含1%胆固醇和14%的中链甘油三酯(MCT)的AIN-93G配方饲料(Chol+MCT)喂养C57小鼠6周,每组15只。观察血清总胆固醇(TC)、肝脏胆固醇含量、机体总胆汁酸含量以及肝脏胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)的表达。结果Chol+MCT组小鼠血清TC低于(P<0.01)、肝脏胆固醇高于(P<0.01)、机体总胆汁酸含量低于(P<0.01)、CYP7A1表达低于(P<0.01)Chol组小鼠;Chol+MCT组小鼠血清TC低于(P<0.01)、机体总胆汁酸含量以及CYP7A1表达高于(P<0.01)Chol+LCT组小鼠、肝脏胆固醇含量不变。结论MCT对机体胆固醇水平的影响与CYP7A1表达有关。

黑米通过上调小鼠肝脏CYP7A1的表达调控胆固醇代谢

目的:研究黑米对小鼠血脂以及肝脏中胆固醇代谢相关基因及蛋白表达的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组,以玉米淀粉为碳水化合物来源的高脂高胆固醇膳食组为对照,实验组分别在高脂饲料中添加白米(精)和黑米(低剂量C+BL和高剂量C+BH)代替玉米淀粉。测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,Real-time PCR(RT-PCR)法检测肝脏中胆固醇代谢调控相关基因HMG-Co A-R、LXR-α、SREBP-2、LDL-R、CYP7A1等的m RNA表达水平,Western blot法检测LDL-R和CYP7A1的蛋白表达水平。结果:白米组血清中TC、TG、HDL-C含量较对照组无统计学差异,但黑米组血清中TC和TG含量较对照组降低,且HDL-C显著升高(P<0.05)。RT-PCR结果显示,与高脂组相比,黑米添加组LXR-α、SREBP-2、CYP7A1 m RNA表达水平均上调(P<0.05)。与高脂组相比,C+BH组小鼠CYP7A1蛋白表达显著上调(p<0.05)。结论:黑米调节机体胆固醇代谢平衡可能是通过升高血清中HDL-C含量,上调肝脏中胆固醇向胆汁酸转化酶CYP7A1的表达。

养肝利胆颗粒对胆固醇结石小鼠肝脏中PPAR-γ及CYP7A1表达的影响

目的:观察养肝利胆颗粒对胆固醇结石小鼠肝脏PPAR-γ及CYP7A1表达的影响。方法:38只C57BL/6雌性小鼠随机分为正常对照组(n=10)、模型组(n=15)和养肝利胆颗粒组(n=13)。其中后两组小鼠采用高脂饮食诱发法建立胆固醇结石模型。造模过程中,养肝利胆颗粒组小鼠予养肝利胆颗粒2.1g/(kg.d)灌胃治疗。8周后观察各组小鼠的成石率,并用Western Blotting法检测肝脏中PPAR-γ及CYP7A1的表达。结果:养肝利胆颗粒组成石率显著降低(P<0.01),小鼠肝脏PPARγ及CYP7A1表达增强。结论:养肝利胆颗粒可通过增强肝脏PPARγ及CYP7A1的表达,从而发挥防治胆石病的作用。

家族性胆固醇结石患者肝组织CYP7A1 mRNA的表达

目的:研究家族遗传性胆囊胆固醇结石患者、散发性胆固醇结石患者和非结石患者肝组织CYP7A1基因mRNA的表达改变及其与胆汁成石性变化的关系。方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)技术,研究了28例具有家族遗传性胆囊胆固醇结石患者、30例散发性结石患者和32例非结石患者肝组织CYP7A1mRNA的表达变化;并采用生物化学技术行胆汁脂质分析,计算成石指数。结果:家族遗传性和散发性胆固醇结石组CYP7A1mRNA表达水平较非胆固醇结石组降低,差异有显著性;在家族遗传性和散发性胆固醇结石组两组间无统计学差别;各组肝组织CYP7A1mRNA表达与胆汁成石指数(LI)呈负相关。结论:胆囊胆固醇结石患者肝组织CYP7A1mRNA水平降低,因而CYP7A1mRNA表达下调可能是胆囊胆固醇结石形成的重要原因之一;CYP7A1是决定胆汁成石性和胆囊胆固醇结石发生的一个重要基因。

胆固醇7α-羟化酶基因研究进展

胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)是胆汁酸经典合成途径中的限速酶,对维持机体胆固醇代谢平衡起关键作用。目前已知CYP7A1基因的表达受包括该基因自身的多态性在内的多种因子调控。CYP7A1代谢途径作为脂类代谢通路的重要一部分,其活性发生改变后可能会引起与脂类代谢紊乱有关的胆结石、胆囊癌和心血管疾病等。就有关CYP7A1基因的最新研究进展进行了较系统的综述。

胆固醇7α-羟化酶调节的研究进展

胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)是在肝脏合成并促使胆固醇转化成胆酸的限速酶,对维持体内胆固醇代谢平衡起到关键作用。CYP7A1基因表达受脂代谢相关的多个核因子的精细调控,诸如HNF4a,LXR,FXR,SHP和FGF15/19及相关激素等其他因子,以维持胆固醇代谢平衡;多种中药及饮食成分对CYP7A1的基因表达也有明显调节作用,进而影响血脂代谢。本文就近10年来有关CYP7A1调节的研究进展综述如下。

中国上海人群中胆固醇7α-羟化酶基因多态性与高低密度脂蛋白胆固醇血症的关系研究

目的 :探讨上海地区中国人胆固醇 7α -羟化酶 (CYP7)基因多态性与血低密度脂蛋白胆固醇间的关系。方法 :研究包括上海地区中体重指数大于 2 5的肥胖者 6 8例 ,健康体检的体重正常人 92例。以限制性片段长度多态性 (RFLP)的方法进行分析CYP7基因翻译起始位点上游 2 78bp处C→A替换多态性 ,同时检测血清胆固醇 ,低密度脂蛋白胆固醇和甘油三脂浓度。结果 :肥胖和非肥胖者该多态性基因型分布无差异。CC纯合子较AC杂合子有较高的血清LDL -C水平和较高的高LDL -C血症的发生率。结论 :CYP7的基因多态性是决定血清LDL

养心颗粒对易损斑块家兔模型胆固醇7-α-羟化酶和MMP-9含量的影响

目的:探讨养心颗粒对易损斑块家兔模型胆固醇7-α-羟化酶和MMP-9含量的影响。方法:采用球囊损伤家兔颈总动脉,同时给予家兔高脂饮食喂养8周,8周后注入p53腺病毒载体,将造模成功家兔随机分为模型对照组、养心颗粒组、辛伐他汀组,每组6只,另取6只家兔作为空白对照组,药物治疗2周后进行药物触发,用ELISA法检测胆固醇7-α-羟化酶和MMP-9含量。结果:养心颗粒组与治疗前比较,CYP7A1含量升高、MMP-9含量减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。辛伐他汀组与治疗前比较,CYP7A1含量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);两治疗组相互比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:养心颗粒可升高易损斑块家兔模型血清CYP7A1含量,降低MMP-9表达水平,这可能是养心颗粒稳定易损斑块的作用机制之一。

阻塞性胆汁淤积大鼠肝脏胆固醇7α-羟化酶和核受体FXR、SHP表达变化

目的:通过建立梗阻性黄疸动物模型,观察胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7alpha-hydroxylase,CYP7A1)、类法尼醇X受体(farnesoid Xreceptor,FXR)及小异源二聚体伴侣受体(small heterodi mer partner,SHP)的表达变化,并分析CYP7A1和FXR、SHP之间的关系。方法:采用胆总管结扎术制备大鼠梗阻性黄疸模型,分别于术后1、3、14 d麻醉后放血处死。取大鼠肝脏,抽提总RNA,采用实时定量RT-PCR检测CYP7A1 mRNA表达;提取肝细胞核蛋白,采用蛋白质印迹技术检测FXR和SHP蛋白表达。结果:与假手术对照组相比,梗阻性黄疸组大鼠肝细胞CYP7A1 mRNA表达明显增强,FXR和SHP蛋白表达同步降低,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.05)。结论:CYP7A1表达增强可能与FXR、SHP表达减弱有关。

胆固醇7α-羟化酶基因多态性与儿童血脂水平的关系

目的:探讨胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)基因多态性与儿童血脂水平的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对216例健康儿童CYP7A1基因的A-204C基因座进行Eco31Ⅰ酶切多态性分析,血脂测定在全自动化分析仪上进行。结果:研究人群中CYP7A1基因的三型频率分别为:AA型6.0%,AC型26.4%、CC型67.6%。AA基因型在LDL-C,TC,Lp(a)水平上均低于其他基因型,并且其差异具有显著性(P<0.05)。CC基因型在HDL-C水平上均高于其他基因型,且其差异具有显著性(P<0.05)。三型在ApoA上两两之间均存在显著性差异,而在TG中无显著性差异。结论:CC基因型在研究人群中所占的比例最高,AA基因型所占的比例最小。CYP7A1的基因多态性与儿童的血脂水平存在密切的关系。

胆固醇7α-羟化酶基因多态性与小儿血脂的关系

目的:探讨胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)基因多态性与湖北儿童血脂水平的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对216例健康儿童CYP7A1基因的A-204C基因座进行Eco31I酶切多态性分析,血脂测定在全自动化分析仪上进行。结果:研究人群中CYP7A1基因的3型频率分别为:AA型6.0%,AC型26.4%、CC型67.6%。AA基因型在LDL-C,TC,Lp(a)水平上均低于其他基因型,并且其差异具有显著性。CC基因型在HDL-C水平上均高于其他基因型,并且其差异具有显著性。3型在ApoA上两两之间均存在显著性差异,而在TG中无显著性差异。结论:CC基因型在研究人群中所占的比例最高,AA基因型所占的比例最小。CYP7A1的基因多态性与儿童的血脂水平存在密切的关系。

鹅胆固醇7α-羟化酶基因克隆及原核表达

为进一步研究胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)在胆汁酸合成和胆固醇代谢过程中的调节机制,采用RT-PCR和RACE方法从鹅(Anser anser)肝组织克隆CYP7A1基因全长cDNA序列,亚克隆其CDS区并构建原核表达载体pET-28a-cyp7α1。重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中经IPTG诱导表达。经His-Bind纯化试剂盒纯化的His-CYP7A1免疫Bal b/c小鼠,制备小鼠抗鹅CYP7A1多克隆抗体,Western blotting验证His-CYP7A1免疫原性和抗体的特异性。序列分析结果表明,该蛋白与鸡、大鼠、人、短尾猊、小鼠的CYP7A1蛋白氨基酸序列同源性分别为93%、66%、67%、68%、66%。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白His-CYP7A1得到正确高效表达,该His-CYP7A1分子质量约为59ku,经纯化获得高纯度重组His-CYP7A1蛋白。制备了小鼠抗鹅CYP7A1多克隆抗体,效价达1∶104。Western blotting检测表明,该蛋白能够被小鼠抗His抗体和小鼠抗CYP7A1抗体所识别,小鼠抗CYP7A1多克隆抗体具有较好的特异性。试验结果为进一步研究CYP7A1基因结构和CYP7A1在鹅肝脏脂类代谢中的作用提供了基础和技术手段。

铅对原代培养小鼠肝细胞胆固醇7α-羟化酶基因表达影响

目的探讨醋酸铅对培养的小鼠肝细胞中胆固醇7α-羟化酶基因表达的作用,为解释铅与血脂之间的关系提供理论依据。方法提取20只昆明小鼠的肝细胞,进行离体培养,以不同剂量的醋酸铅作为处理因素,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测胆固醇7α-羟化酶基因的mRNA表达,并进行比较。结果不同剂量的醋酸铅对胆固醇7α-羟化酶基因转录水平的影响不同。高、中剂量组与对照组的差异均具有显著性(P<0.05或P<0.01),表现为随着染毒剂量的增加,胆固醇7α-羟化酶的mRNA表达量逐渐下降。结论醋酸铅作为一种暴露因素对胆固醇7α-羟化酶基因的表达有抑制作用。