小异二聚体伴侣与胆固醇7a-羟化酶在肝内胆汁淤积症孕鼠中的表达

目的建立妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠模型，检测小异二聚体伴侣（SHP）及其靶基因胆固醇7a-羟化酶（CYP7A1）在肝脏的表达，探讨其在妊娠期肝内胆汁淤积症发病机制中的作用。方法孕15d SD大鼠30只随机分为对照组和雌激素组，每组15只。用药前和用药后第5天分别检测血清中ALT、AST、碱性磷酸酶、总胆汁酸、总胆红素、直接胆红素水平，同时观察肝脏形态学变化，并应用RT-PCR和Western blot分别检测肝脏SHP和CYP7A1的mRNA和蛋白质的表达。结果雌激素组用药后ALT、AST、碱性磷酸酶、总胆汁酸、总胆红素、直接胆红素比用药前明显升高（P〈0．01）；对照组用药前后各血清生物化学指标无明显变化（P〉0.05）。雌激素组孕鼠肝脏出现肝内胆汁淤积表现，对照组肝脏形态、结构正常。雌激素组和对照组SHP mRNA分别为0．4865±0．0237和0．3657±0．0317，CYP7A1 mRNA分别为0．4311±0．0157和0．3285±0．0123，差异均有统计学意义（P〈0．01）。雌激素组和对照组SHP蛋白表达分别为0．5033±0、0274和0、3762±0．0284，CYP7A1蛋白表达分别为0．4802±0．0217和0．3570±0．0175，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论雌激素诱导的胆汁淤积促进肝脏SHP及其靶基因CYP7A1表达增加，导致胆汁酸合成进一步增加，从而引发胆汁淤积，这可能是妊娠期肝内胆汁淤积症发病机制之一。

熊果酸对肝细胞胆固醇代谢的影响

目的探讨熊果酸对人肝癌细胞Hep G2及小鼠肝细胞AML^(-1)2胆固醇代谢的影响及其相关机制。方法0,10,20,40μmol·L^(-1)熊果酸处理Hep G2及AML^(-1)2细胞24 h,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting检测细胞内胆固醇代谢关键基因胆固醇7A-羟化酶(CYP7A1)mRNA和蛋白表达,应用酶法检测细胞内胆固醇浓度。结果与0μmol·L^(-1)熊果酸组比较,20和40μmol·L^(-1)熊果酸组Hep G2及AML^(-1)2细胞内CYP7A1 mRNA及蛋白表达水平均显著增加(均P<0.05),相应的细胞内胆固醇浓度也随之下降(均P<0.05)。结论一定浓度的熊果酸能够降低肝细胞内胆固醇浓度,CYP7A1可能参与了调节过程。

“胆病从肝论治”在防治胆结石实验研究中的应用

目的:以"胆病从肝论治"为原则研究大黄灵仙胶囊防治胆结石的作用机制。方法:使用致石饲料诱发方法建立豚鼠胆囊结石模型,治疗组造模期间每日予大黄灵仙胶囊(制作成悬液)灌胃治疗,连续8周。观察比较治疗组和模型组豚鼠胆囊结石形成率,检测各组豚鼠肝脏病理和超微结构变化情况以及荧光定量PCR检测肝组织胆固醇、胆汁酸代谢相关酶的表达量。结果:模型组和治疗组豚鼠胆囊结石形成率分别是100%和50%,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗组豚鼠肝组织病变较模型组明显减轻,胆固醇7a-羟化酶、胆汁酸盐输出泵基因表达分别是模型组的2.08倍和2.57倍(P<0.01)。结论:大黄灵仙胶囊具有较好的防治结石功效,作用机制与其保护肝组织以及在转录水平上调胆固醇、胆汁酸代谢相关酶的表达有关。"胆病从肝论治"在胆结石防治实验研究中具有重要的指导价值。

大黄灵仙胶囊对胆结石防治作用机制的实验研究

目的运用现代医学实验方法,从生物化学、分子生物学水平研究和探讨大黄灵仙胶囊对胆结石的防治作用机制。方法选健康新西兰大白兔共80只,分为模型组、大黄灵仙组、消炎利胆组和正常对照组4组,每组20只。模型组、大黄灵仙组、消炎利胆组进行慢性肝损伤造模,完成后大黄灵仙组和消炎利胆组分别予大黄灵仙胶囊(制作成悬液)、消炎利胆片(制作成悬液)灌胃;模型组和对照组以等量生理盐水灌胃。6周后取材,观察、比较胆囊成石情况;检测各组兔血清相关指标;检测兔肝组织总RNA和肝组织中CYP7A1mRNA和acbc11mRNA基因表达相对量。结果大黄灵仙组在降低胆固醇含量、增加胆汁酸含量方面结果优于消炎利胆组;模型组兔肝组织中CYP7A1和acbc11基因表达显著下调,分别只有正常组的54.0%和49.9%;大黄灵仙组、消炎利胆组兔肝组织CYP7A1mRNA和胆汁酸盐输出泵acbc11mRNA表达量亦比正常组下降,但却比模型组有明显上升趋势,同时比较二者治疗结果,大黄灵仙组优于消炎利胆组(P<0.05),特别是在改善acbe11基因表达方面更具优势。结论大黄灵仙胶囊能够修复受损肝细胞,稳定肝细胞CYP7A1、胆汁酸盐输出泵acbc11的基因表达,改善肝脏胆固醇代谢和胆汁酸代谢等,有效地保护了肝脏功能,起到了减少和预防结石形成的作用。

枸杞多糖对高脂血症小鼠血脂及肝脏氧化应激的影响

目的探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对高脂血症小鼠肝脏胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7-alpha hydroxylase,CYP7A1)mRNA表达及氧化应激功能的影响。方法选取健康雄性昆明种小鼠26只,随机分为正常对照组、高脂血症组、高脂血症+LBP组;除正常对照组给予正常饮食,高脂血症组、高脂血症+LBP组采用高脂饲料喂养法建立小鼠高脂血症模型;模型建立成功后,高脂血症+LBP组于每天上午9:00按80mg·(kg·d)-1LBP灌胃;正常对照组、高脂血症组在同样时间以同样容量生理盐水灌胃,持续灌胃30d。采用酶联免疫法测定血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP 70)水平;采用吸光光度法测定肝脏超氧化物歧化酶(super oxide dismutase,SOD)、肝脏丙二醛(malondialdehyde,MDA)表达水平;采用实时荧光定量PCR技术测定肝脏CYP7A1mRNA表达水平。结果与正常对照组比较,高脂血症组小鼠血清TC、TG、肝脏MDA均升高(P<0.01),肝脏SOD、肝脏CYP7A1 mRNA表达水平均下降(P<0.01),高脂饮食+LBP组血清TC、TG、HSP70升高(P<0.01),而肝脏CYP7A1 mRNA表达水平则降低(P<0.05);与高脂血症组比较,高脂血症+LBP组小鼠血清TC、肝脏MDA均下降(P<0.01),肝脏SOD、肝脏CYP7A1 mRNA表达水平、HSP 70升高(P<0.05或P<0.01)。结论 LBP可提高高脂血症小鼠抗氧化应激能力,并可能通过上调高脂血症小鼠肝脏CYP7A1 mRNA的表达降低胆固醇。

大黄灵仙胶囊对胆结石豚鼠肝组织超微结构及CYP7A1 mRNA表达的影响

目的从转录水平探讨大黄灵仙胶囊防治胆结石的可能机制。方法将60只普通豚鼠随机分为3组,每组20只。模型组和大黄灵仙胶囊治疗组采用致石饲料诱发胆囊结石。治疗组造模开始即分别按剂量予大黄灵仙胶囊混悬液灌胃,模型组和正常对照组以等量生理盐水灌胃。8周后统计胆囊结石形成率;运用实时荧光定量PCR方法检测各组豚鼠肝组织胆固醇7α一羟化酶(CYP7A1)mRNA的表达情况。结果模型组、治疗组豚鼠的胆囊结石形成率分别为100%和50%,与模型组相比,治疗组结石形成率明显降低(P<0.01)。模型组豚鼠肝组织中的CYP7A1mRNA表达较正常对照组显著减少(P<0.01),而治疗组豚鼠肝组织中的CYP7A1mRNA表达是模型组的2.13倍,差异有统计学意义(P<0.01)。结论大黄灵仙胶囊具有较好的预防结石形成的作用,其机制可能与其具有减轻肝细胞损伤、间接稳定CYP7A1mRNA表达的作用有关。