橘皮素通过抑制Notch信号通路干预小鼠肝纤维化进程

目的探讨橘皮素对胆汁淤积性肝纤维化小鼠模型的治疗机制。方法将45只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(n=10)、胆总管结扎手术(biliary duct ligation,BDL)模型组(n=15)、橘皮素治疗组(n=10)及单纯橘皮素用药组(n=10)。药物治疗组中,BDL手术10 d后开始橘皮素灌胃,模型建立30 d后采血处死各组小鼠并留取肝组织。通过H-E染色、Masson及天狼星红染色分析各组小鼠肝组织纤维化程度;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组小鼠血清肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及纤维化指标透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)水平;通过蛋白质印迹、荧光定量聚合酶链反应(PCR)、免疫组织化学方法检测各组小鼠肝组织中羟脯氨酸(Hyp)含量及Notch通路各组分表达量变化;通过免疫组化法检测肝纤维经典通路TGF-β1/smads通路各组分表达量变化。结果造模30 d后,与BDL模型组相比,橘皮素治疗组小鼠肝纤维化假小叶减少,纤维化病理评分值低(P<0. 05);胶原纤维沉积减少(P<0. 05),Ⅰ型胶原纤维总量减少(P<0. 05);小鼠肝功能指标ALT、AST明显降低(P<0. 05),纤维化指标HA、LN降低(P<0. 05); Hyp含量降低(P<0. 05),Notch信号通路组分Notch1、RBPJ、Hes1、Hey1蛋白及RNA表达量均下调(均P<0. 05);肝纤维化TGF-β1/smads经典通路组分TGF-β1、smad2及smad3表达量下调(均P<0. 05)。结论橘皮素作为Notch信号通路抑制剂可通过与TGF-β1/smads通路相互作用延缓肝纤维化进程。