胆总管结扎术和CCl4诱导大鼠肝纤维化模型的建立

目的:构建大鼠肝纤维化动物模型。方法:取雄性Wistar大鼠180只,其中90只通过腹腔内注射四氯化碳,1.5mL/kg,每周1次,共10周,建立大鼠肝纤维化动物模型;另90只胆总管结扎,结扎时间是1d、2d、4d、7d,建立大鼠肝纤维化动物模型。造模成功后处死大鼠,立即取新鲜肝脏。应用HE染色及免疫荧光法观察实验大鼠肝组织病理学变化。结果:CCl4诱导建模第6周肝脏假小叶形成,大鼠肝脏有明显的纤维化病灶,在第7周始最为典型;胆总管结扎术4d和7d模型组肝脏假小叶形成,大鼠肝脏有明显的纤维化病灶。结论:胆总管结扎术和CCl4诱导可成功建立大鼠肝纤维化动物模型。

胆总管结扎诱导大鼠肝肺综合征模型的建立初步研究

目的探讨胆总管结扎术诱导大鼠肝肺综合征(HPS)模型的建立。方法40只SD大鼠被随机分为实验组30只和对照组(假手术组)10只,采用胆总管结扎术建立肝硬化和HPS模型。使用血气分析仪测定PaO2、PaCO2和pH。结果在术后1 w,腹部超声检查显示实验组肝脏回声增粗,胆总管轻度扩张。在术后2 w,肝脏被膜不平整,胆总管显著增粗。在术后4~6 w,肝脏被膜不平整,部分表面可见小结节形成,胆总管显著增宽,并可见腹腔积液;在实验6 w,实验组PaO2为(65.5±8.2)mmHg,显著低于对照组【(95.5±4.5)mmHg,P<0.05】,血清一氧化氮(NO)浓度为(64.1±4.5)μmol/L,显著高于对照组【(32.8±4.3)μmol/L,P<0.05】,提示HPS造模成功;组织病理学检查显示实验组动物可见肝脏炎症细胞浸润,纤维条索和部分假小叶形成以及肺脏组织见肺微血管显著扩张。结论采用胆总管结扎术可建立大鼠HPS模型,具有造模周期短、稳定性高、无毒等优势。

梗阻性黄疸大鼠脂多糖结合蛋白的变化及其意义

目的 探讨梗阻性黄疸大鼠脂多糖结合蛋白在不同梗阻时间的变化及其增敏机理。方法 将 80只雄性Wistar大鼠随机分为梗阻性黄疸组 (OJ组 ,n =4 0 )和假手术组 (SO组 ,n =4 0 ) ,分别于胆总管结扎手术前及手术后 5d、10d、15d、2 0d检测两组大鼠血清中脂多糖结合蛋白及血浆中内毒素、TNF α和IL 6水平 ,每组每一时相点各取 8只大鼠。结果 OJ组大鼠在胆总管结扎术后 10d ,其血清中脂多糖结合蛋白值为 ( 11.2 5± 2 .4 1)mg/L ,较SO组〔( 5 .32± 1.35 )mg/L〕明显升高 (P<0 .0 5 ) ,且随着梗阻时间的延长而进一步升高。相关分析显示 ,血清脂多糖结合蛋白与血浆内毒素、TNF α和IL 6在大部分时相呈明显正相关。结论 梗阻性黄疸时血清脂多糖结合蛋白水平升高 ,其增敏作用在梗阻性黄疸多器官损害中可能具有重要的作用。由此提示 ,通过降低血清中脂多糖结合蛋白 ,阻断其增敏作用 。

培哚普利和氯沙坦对肝纤维化组织TLR4表达的影响

目的观察大鼠正常肝脏和肝纤维化(HF)组织Toll样受体4(TLR4)表达差异及培哚普利(Pe)和氯沙坦(Lo)对其的影响。方法 Wistar雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、胆总管结扎术(BDL组)、Pe 14 d和30 d及Lo 14d和30d组,6只/组。BDL组和治疗组均通过BDL制备大鼠HF模型。予Pe(2 mg/kg)和Lo(50 mg/kg)灌胃,1次/dc 14 d和30 d后分别应用Westernblotting检测肝脏TLR4水平。结果 BDL 14 d组大鼠肝脏TLR4为Sham组的(6.53±1.11)倍(P<0.05);Pe 14 d组和Lo 14 d组TLR4分别下降到Sham组的(1.71±0.41)倍(P>0.05)和(0.95±0.38)倍(P>0.05)。Pe 30 d组和Lo 30 d组大鼠肝脏TLR4分别回升为Sham组的(6.51±0.87)倍(P<0.05)和(5.64±0.87)倍(P<0.05)。结论大鼠HF后肝脏TLR4水平上升,Pe和Lo可降低实验性HF组织的TLR4水平,但长期服用其抑制TLR4的作用减弱。

口服枸杞多糖抑制实验性小鼠肝纤维化损伤的作用

目的探讨口服枸杞多糖(LBP)对实验性小鼠肝纤维化损伤的抑制作用及其机制。方法 2018年,将体重为(16±1.9)g的健康、雄性小鼠30只,采用完全随机方法划分成对照组、模型组及LBP干预组,每组平均10只。模型组:通过结扎小鼠胆总管后制备肝纤维化模型;LBP干预组:小鼠在结扎胆总管后,第2周口服LBP 30μg/g,每天1次,共用20天。对照组:小鼠暴露腹腔、分离、置线,不对胆总管做其他操作,闭合腹腔后第2周口服等剂量的生理盐水,每天1次,共用20天。制备3组的肝组织标本,采用苏木素-伊红染色法、天狼猩红染色法分析其肝脏组织的形态结构变化;酶联免疫检测小鼠血液里肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-1β(IL-1β)的含量。结果模型组小鼠肝组织里正常小叶的轮廓不清楚,内有面积不等的坏死,汇管区发现胆总管数量增加和纤维组织增生。血浆中TNF-α[(1 672.34±157.26)ng/L]及IL-1β[(1 386.33±111.35)ng/L]水平比假手术组升高(P<0.05);LBP干预组小鼠肝组织坏死减少、胆总管数目减少和纤维组织增生减轻,TNF-α[(865.41±87.12)ng/L]及IL-1β[(611.24±68.97)ng/L]水平比模型组减少(P<0.05)。结论结扎小鼠胆总管后会引起肝组织纤维化损伤,LBP可通过抑制炎性因子TNF-α及IL-1β的水平来保护肝组织。

枸杞多糖抑制小鼠肝纤维化组织中α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白的表达

目的探讨枸杞多糖(LBP)对小鼠胆总管结扎术后引起的肝纤维化组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)表达的影响。方法选取体重为(0.32±0.28)kg的健康、雄性小鼠30只,采用完全随机方法分成对照组、模型组及LBP干预组,每组10只。模型组:小鼠通过结扎胆总管后诱导肝纤维化损伤。LBP干预组:小鼠在结扎胆总管后第21天口服LBP 30μg/g,每天1次,共用15天。对照组:小鼠暴露腹腔、分离、置线,不对胆总管做其他操作,闭合腹腔后第21天口服等剂量的0.90%生理盐水,每天1次,共用15天。制备3组的肝组织标本,采用苏木素-伊红染色法、天狼猩红染色法分析其肝脏组织的病理学变化;免疫印迹法测定3组肝组织中α-SMA和ColⅠ的含量。结果模型组小鼠肝小叶结构被破坏,肝组织有面积不等的坏死,汇管区发现胆总管数量增加和纤维组织增生,表明采用胆总管结扎术可以成功地诱导肝纤维化损伤,肝组织中α-SMA和ColⅠ的含量(0.877±0.015,1.102±0.063)增加,与对照组(0.286±0.005,0.765±0.017)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。LBP干预组小鼠肝组织坏死减少、胆总管数目减少和纤维组织增生减轻,肝组织中α-SMA和ColⅠ的含量(0.302±0.011,0.456±0.010)减少,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LBP可抑制肝纤维化组织中α-SMA和ColⅠ的表达,因此可作为临床上预防和治疗肝纤维化的一种新型药物。