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胆汁螺杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立
被引量:
3
1
作者
伍妙梨
袁文
+5 位作者
饶丹
王静
朱余军
尹雪琴
黄韧
郭鹏举
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2015年第10期59-63,共5页
目的建立快速、敏感、特异的胆汁螺杆菌(Helicobacter bilis,H.bilis)Taq Man探针实时荧光定量PCR检测方法,对胆汁螺杆菌进行定量检测。方法 PCR扩增H.bilis保守基因P17序列全长ORF435 bp,进行TA克隆,构建质粒标准品p MD-HBP17。通过...
目的建立快速、敏感、特异的胆汁螺杆菌(Helicobacter bilis,H.bilis)Taq Man探针实时荧光定量PCR检测方法,对胆汁螺杆菌进行定量检测。方法 PCR扩增H.bilis保守基因P17序列全长ORF435 bp,进行TA克隆,构建质粒标准品p MD-HBP17。通过对p MD-HBP17标准品的定量分析,优化反应体系,检测Taq Man探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性及重复性;用所建立的q PCR方法检测77份临床样品,并与普通PCR的检测结果作比对。结果所建立的q PCR检测方法,质粒DNA浓度在10^8-10^1拷贝之间表现出较好的线性和相关性,所得标准曲线的斜率为-3.46,相关系数为0.999,检测灵敏度达到20个拷贝,对77份临床样品的检出率为14.3%,较普通PCR(7.8%)的检出率高。结论建立的H.bilis q PCR检测方法特异性好、敏感性高、稳定性强,可用于胆汁螺杆菌的定量及定性检测。
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关键词
胆汁螺杆菌
(H.bilis)
荧光定量PCR(q
PCR)
TAQ
Man探针
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职称材料
抗胆汁螺杆菌单克隆抗体的制备
被引量:
1
2
作者
陈锡福
刘星
+1 位作者
张丽芳
李红
《中国比较医学杂志》
CAS
2008年第5期50-53,共4页
目的制备抗胆汁螺杆菌单克隆抗体(McAbs)。方法用胆汁螺杆菌B2m株皮下免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行融合。以酶联免疫吸附实验(ELISA)筛选抗胆汁螺杆菌单克隆杂交瘤细胞株并初步鉴定其特异性;免疫印迹试验测定单抗所结合的抗原表位...
目的制备抗胆汁螺杆菌单克隆抗体(McAbs)。方法用胆汁螺杆菌B2m株皮下免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行融合。以酶联免疫吸附实验(ELISA)筛选抗胆汁螺杆菌单克隆杂交瘤细胞株并初步鉴定其特异性;免疫印迹试验测定单抗所结合的抗原表位;免疫双向扩散试验确定IgG亚类;腹腔接种法、辛酸-硫酸铵盐析法大量制备、纯化单克隆抗体。结果经过ELISA筛选获得11个阳性杂交瘤细胞株,其效价最高达1:4×105以上,并与实验动物常见的15种病原菌呈阴性反应;IgG亚类为IgG2a和IgG2b;免疫印迹试验显示,6株(A^F)与胆汁螺杆菌大约相对分子质量(172、0、21、30、52、66)×103的抗原特异结合,5株(G^K)皆与胆汁螺杆菌、幽门螺杆菌等三种螺杆菌大约相对分子质量(52、82)×103的抗原呈阳性反应,表明A^F株针对的是胆汁螺杆菌特异性抗原,G^K株可能具有属特异性。结论筛选的单克隆抗体具有较高的特异性和敏感性,所结合的抗原为胆汁螺杆菌或螺杆菌的免疫优势抗原,为进一步的种、属生物学特性研究、菌株分型及血清学检测方法建立等奠定了基础。
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关键词
胆汁螺杆菌
杂交瘤技术
单克隆抗体
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职称材料
啮齿类螺杆菌的分离鉴定
被引量:
7
3
作者
张丽芳
刘星
李红
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2007年第3期215-219,共5页
目的对分离自啮齿类实验动物的17株螺杆菌进行鉴定,以期获得生物学、遗传学特性典型的菌株作为模式菌株。方法通过生物学特性、16S rRNA序列测定、系统发育树及超微结构分析,对螺杆菌进行种的鉴定。结果确定所分离的17株菌株分为两大类...
目的对分离自啮齿类实验动物的17株螺杆菌进行鉴定,以期获得生物学、遗传学特性典型的菌株作为模式菌株。方法通过生物学特性、16S rRNA序列测定、系统发育树及超微结构分析,对螺杆菌进行种的鉴定。结果确定所分离的17株菌株分为两大类,其中一类为胆汁螺杆菌(H.bilis);另外一类属于螺杆菌属成员。结论所分离到的菌株分别是胆汁螺杆菌和未鉴定到种的螺杆菌,其中胆汁螺杆菌与ATCC51630模式菌株16SrRNA序列比较,相似性达99.6%,可作为检测用的模式菌株。
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关键词
啮齿类
螺
杆菌
胆汁螺杆菌
鉴定
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职称材料
啮齿动物螺杆菌多重PCR检测方法的建立
被引量:
4
4
作者
李瑞娇
冯洁
+2 位作者
谢建云
胡建华
高诚
《中国比较医学杂志》
CAS
2012年第12期35-40,共6页
目的建立一种可同时检测肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌的多重PCR方法。方法根据已公布的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌16SrRNA基因序列设计三对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果三对引物能分别扩增出特异性的417 bp、364 bp...
目的建立一种可同时检测肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌的多重PCR方法。方法根据已公布的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌16SrRNA基因序列设计三对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果三对引物能分别扩增出特异性的417 bp、364 bp、324 bp目的条带。最佳退火温度为52℃,镁离子浓度为2.0mmol/L,dNTP浓度为200μmol/L,引物浓度为0.625μmol/L。在此条件下多重PCR同时检测的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌敏感度均为10 fg。结论本实验建立的多重PCR是一种敏感、特异、高效的方法,为同时检测啮齿动物中肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌奠定了良好的基础。
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关键词
肝
螺
杆菌
胆汁螺杆菌
啮齿类
螺
杆菌
多重PCR
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职称材料
实验树鼩肠道螺杆菌属细菌特征分析
被引量:
2
5
作者
古文鹏
贾杰
+5 位作者
施梅言
邱丹丹
阮蕾颖
李娜
仝品芬
代解杰
《动物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第2期238-246,共9页
近年来,树鼩(Tupaia belangeri)作为一种新型的实验动物被广泛应用于生物医学研究的各个领域。本研究组前期的研究结果显示,螺杆菌属(Helicobacter)是树鼩肠道微生物群落中相对丰度最高的一类细菌,但其具体的细菌种类和结构特征仍然不...
近年来,树鼩(Tupaia belangeri)作为一种新型的实验动物被广泛应用于生物医学研究的各个领域。本研究组前期的研究结果显示,螺杆菌属(Helicobacter)是树鼩肠道微生物群落中相对丰度最高的一类细菌,但其具体的细菌种类和结构特征仍然不清楚。因此,本研究将开展实验树鼩肠道中螺杆菌属细菌的分布种类和特征分析,为后续实验研究工作提供资料。通过系统采集72只树鼩的粪便样本,提取核酸后采用巢氏PCR法应用属特异性引物扩增螺杆菌属特异性片段,再分别采用7个种特异性引物对属特异性阳性样本扩增螺杆菌种特异性片段,包括肝螺杆菌(H.hepaticus)、家鼠螺杆菌(H.muridarum)、胆汁螺杆菌(H.bilis)、啮齿类螺杆菌(H.rodentium)、弯曲螺杆菌(Flexispira rappini)、鼩螺杆菌(H.suncus)和盲肠螺杆菌(H.typhlonius)。属特异性引物扩增阳性但种引物扩增阴性的样本进行核酸序列测定和BLAST比对分析,确认其最终所属的螺杆菌种类。结果显示,72份树鼩粪便样本中,属特异性引物扩增阳性有18份,总体阳性率为25.0%。其中,盲肠螺杆菌阳性8株、胆汁螺杆菌阳性6株,其余8份阳性样本经过测序和BLAST比对分析后确认为同性恋螺杆菌(H.cinaedi)阳性5株、猫螺杆菌(H.felis)阳性2株和猕猴螺杆菌(H.macacae)阳性1株。有4份树鼩粪便样本出现同时携带盲肠螺杆菌和胆汁螺杆菌的情况。将螺杆菌属细菌携带结果与实验树鼩的性别和年龄组进行比较分析后发现,不同性别间以及不同年龄组间,属或种阳性样本情况均无差异(P>0.05)。本研究结果表明,实验树鼩具有较高的螺杆菌携带率,且不分性别和年龄,主要以盲肠螺杆菌、胆汁螺杆菌和同性恋螺杆菌为主。
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关键词
实验树鼩
盲肠
螺
杆菌
胆汁螺杆菌
同性恋
螺
杆菌
PCR
原文传递
题名
胆汁螺杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立
被引量:
3
1
作者
伍妙梨
袁文
饶丹
王静
朱余军
尹雪琴
黄韧
郭鹏举
机构
广东省实验动物监测所
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2015年第10期59-63,共5页
基金
国家科技支撑计划(2013BAK11B01)
文摘
目的建立快速、敏感、特异的胆汁螺杆菌(Helicobacter bilis,H.bilis)Taq Man探针实时荧光定量PCR检测方法,对胆汁螺杆菌进行定量检测。方法 PCR扩增H.bilis保守基因P17序列全长ORF435 bp,进行TA克隆,构建质粒标准品p MD-HBP17。通过对p MD-HBP17标准品的定量分析,优化反应体系,检测Taq Man探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性及重复性;用所建立的q PCR方法检测77份临床样品,并与普通PCR的检测结果作比对。结果所建立的q PCR检测方法,质粒DNA浓度在10^8-10^1拷贝之间表现出较好的线性和相关性,所得标准曲线的斜率为-3.46,相关系数为0.999,检测灵敏度达到20个拷贝,对77份临床样品的检出率为14.3%,较普通PCR(7.8%)的检出率高。结论建立的H.bilis q PCR检测方法特异性好、敏感性高、稳定性强,可用于胆汁螺杆菌的定量及定性检测。
关键词
胆汁螺杆菌
(H.bilis)
荧光定量PCR(q
PCR)
TAQ
Man探针
Keywords
Helicobacter bilis
QPCR
Taq Man probe
分类号
R-332 [医药卫生]
下载PDF
职称材料
题名
抗胆汁螺杆菌单克隆抗体的制备
被引量:
1
2
作者
陈锡福
刘星
张丽芳
李红
机构
中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
2008年第5期50-53,共4页
文摘
目的制备抗胆汁螺杆菌单克隆抗体(McAbs)。方法用胆汁螺杆菌B2m株皮下免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行融合。以酶联免疫吸附实验(ELISA)筛选抗胆汁螺杆菌单克隆杂交瘤细胞株并初步鉴定其特异性;免疫印迹试验测定单抗所结合的抗原表位;免疫双向扩散试验确定IgG亚类;腹腔接种法、辛酸-硫酸铵盐析法大量制备、纯化单克隆抗体。结果经过ELISA筛选获得11个阳性杂交瘤细胞株,其效价最高达1:4×105以上,并与实验动物常见的15种病原菌呈阴性反应;IgG亚类为IgG2a和IgG2b;免疫印迹试验显示,6株(A^F)与胆汁螺杆菌大约相对分子质量(172、0、21、30、52、66)×103的抗原特异结合,5株(G^K)皆与胆汁螺杆菌、幽门螺杆菌等三种螺杆菌大约相对分子质量(52、82)×103的抗原呈阳性反应,表明A^F株针对的是胆汁螺杆菌特异性抗原,G^K株可能具有属特异性。结论筛选的单克隆抗体具有较高的特异性和敏感性,所结合的抗原为胆汁螺杆菌或螺杆菌的免疫优势抗原,为进一步的种、属生物学特性研究、菌株分型及血清学检测方法建立等奠定了基础。
关键词
胆汁螺杆菌
杂交瘤技术
单克隆抗体
Keywords
Helicobacter bilis
Hybridoma technique
Monoclonal antibody
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
下载PDF
职称材料
题名
啮齿类螺杆菌的分离鉴定
被引量:
7
3
作者
张丽芳
刘星
李红
机构
中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所
出处
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2007年第3期215-219,共5页
基金
国家科技基础条件平台工作重点项目(编号:2003DIA7J033)
文摘
目的对分离自啮齿类实验动物的17株螺杆菌进行鉴定,以期获得生物学、遗传学特性典型的菌株作为模式菌株。方法通过生物学特性、16S rRNA序列测定、系统发育树及超微结构分析,对螺杆菌进行种的鉴定。结果确定所分离的17株菌株分为两大类,其中一类为胆汁螺杆菌(H.bilis);另外一类属于螺杆菌属成员。结论所分离到的菌株分别是胆汁螺杆菌和未鉴定到种的螺杆菌,其中胆汁螺杆菌与ATCC51630模式菌株16SrRNA序列比较,相似性达99.6%,可作为检测用的模式菌株。
关键词
啮齿类
螺
杆菌
胆汁螺杆菌
鉴定
Keywords
Rodent Helicobacter
Helicobacter bilis
Identification
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
啮齿动物螺杆菌多重PCR检测方法的建立
被引量:
4
4
作者
李瑞娇
冯洁
谢建云
胡建华
高诚
机构
东华大学化学化工与生物工程学院
上海实验动物研究中心
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
2012年第12期35-40,共6页
基金
上海市科技基金项目(11140901000)
文摘
目的建立一种可同时检测肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌的多重PCR方法。方法根据已公布的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌16SrRNA基因序列设计三对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果三对引物能分别扩增出特异性的417 bp、364 bp、324 bp目的条带。最佳退火温度为52℃,镁离子浓度为2.0mmol/L,dNTP浓度为200μmol/L,引物浓度为0.625μmol/L。在此条件下多重PCR同时检测的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌敏感度均为10 fg。结论本实验建立的多重PCR是一种敏感、特异、高效的方法,为同时检测啮齿动物中肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌奠定了良好的基础。
关键词
肝
螺
杆菌
胆汁螺杆菌
啮齿类
螺
杆菌
多重PCR
Keywords
H.hepaticus
H.bilis
H.rodentium
multiplex PCR
分类号
R33 [医药卫生—人体生理学]
下载PDF
职称材料
题名
实验树鼩肠道螺杆菌属细菌特征分析
被引量:
2
5
作者
古文鹏
贾杰
施梅言
邱丹丹
阮蕾颖
李娜
仝品芬
代解杰
机构
中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心
云南省疾病预防控制中心急性传染病防制所
出处
《动物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第2期238-246,共9页
基金
云南省科技人才和平台计划项目(No.2017HC019)
中央高校基本科研业务费专项资金(No.3332018162)。
文摘
近年来,树鼩(Tupaia belangeri)作为一种新型的实验动物被广泛应用于生物医学研究的各个领域。本研究组前期的研究结果显示,螺杆菌属(Helicobacter)是树鼩肠道微生物群落中相对丰度最高的一类细菌,但其具体的细菌种类和结构特征仍然不清楚。因此,本研究将开展实验树鼩肠道中螺杆菌属细菌的分布种类和特征分析,为后续实验研究工作提供资料。通过系统采集72只树鼩的粪便样本,提取核酸后采用巢氏PCR法应用属特异性引物扩增螺杆菌属特异性片段,再分别采用7个种特异性引物对属特异性阳性样本扩增螺杆菌种特异性片段,包括肝螺杆菌(H.hepaticus)、家鼠螺杆菌(H.muridarum)、胆汁螺杆菌(H.bilis)、啮齿类螺杆菌(H.rodentium)、弯曲螺杆菌(Flexispira rappini)、鼩螺杆菌(H.suncus)和盲肠螺杆菌(H.typhlonius)。属特异性引物扩增阳性但种引物扩增阴性的样本进行核酸序列测定和BLAST比对分析,确认其最终所属的螺杆菌种类。结果显示,72份树鼩粪便样本中,属特异性引物扩增阳性有18份,总体阳性率为25.0%。其中,盲肠螺杆菌阳性8株、胆汁螺杆菌阳性6株,其余8份阳性样本经过测序和BLAST比对分析后确认为同性恋螺杆菌(H.cinaedi)阳性5株、猫螺杆菌(H.felis)阳性2株和猕猴螺杆菌(H.macacae)阳性1株。有4份树鼩粪便样本出现同时携带盲肠螺杆菌和胆汁螺杆菌的情况。将螺杆菌属细菌携带结果与实验树鼩的性别和年龄组进行比较分析后发现,不同性别间以及不同年龄组间,属或种阳性样本情况均无差异(P>0.05)。本研究结果表明,实验树鼩具有较高的螺杆菌携带率,且不分性别和年龄,主要以盲肠螺杆菌、胆汁螺杆菌和同性恋螺杆菌为主。
关键词
实验树鼩
盲肠
螺
杆菌
胆汁螺杆菌
同性恋
螺
杆菌
PCR
Keywords
Laboratory tree shrew
Helicobacter typhlonius
H.bilis
H.cinaedi
PCR
分类号
Q953 [生物学—动物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
胆汁螺杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立
伍妙梨
袁文
饶丹
王静
朱余军
尹雪琴
黄韧
郭鹏举
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2015
3
下载PDF
职称材料
2
抗胆汁螺杆菌单克隆抗体的制备
陈锡福
刘星
张丽芳
李红
《中国比较医学杂志》
CAS
2008
1
下载PDF
职称材料
3
啮齿类螺杆菌的分离鉴定
张丽芳
刘星
李红
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2007
7
下载PDF
职称材料
4
啮齿动物螺杆菌多重PCR检测方法的建立
李瑞娇
冯洁
谢建云
胡建华
高诚
《中国比较医学杂志》
CAS
2012
4
下载PDF
职称材料
5
实验树鼩肠道螺杆菌属细菌特征分析
古文鹏
贾杰
施梅言
邱丹丹
阮蕾颖
李娜
仝品芬
代解杰
《动物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020
2
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