雪旺细胞源神经营养因子对神经元胆碱乙酰基转移酶活性的影响

目的研究雪旺细胞源神经营养因子(SDNF)是否影响运动神经元胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活性,了解其对运动神经元功能的影响。方法SD大鼠制作成一侧面神经损伤模型,实验组局部应用雪旺细胞源神经营养因子,对照组应用磷酸盐缓冲液,连续21 d,采用免疫组化染色法研究损伤侧和实验侧面神经核中运动神经元ChAT活性改变。结果实验组中运动神经元的ChAT阳性细胞数,面积及灰度值均优于对照组(P<0.01)。结论外源性雪旺细胞源神经营养因子可以防止轴突损伤后运动神经元胆碱乙酰基转移酶活性的降低。

重症急性胰腺炎大鼠结肠黏膜下神经节一氧化氮合酶阳性神经元及乙酰胆碱转移酶阳性神经元的改变

目的探讨伴有胃肠动力障碍的重症急性胰腺炎(SAP)大鼠结肠黏膜下神经节一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元及乙酰胆碱转移酶(ChAT)阳性神经元的改变。方法20只SD大鼠随机均分为假手术组与SAP组,用逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠的方法制作大鼠SAP模型。24 h后,测定假手术组与SAP组小肠推进比、结肠蠕动频率、粪便含水量、胰腺病理评分及结肠蠕动频率与NOS、ChAT表达比例相关性分析。制备结肠黏膜下神经节全层标本,运用免疫荧光技术观察两组黏膜下神经节,NOS阳性神经元及ChAT阳性神经元的改变。结果与假手术组相比,SAP组结肠蠕动频率减慢(P<0.01)、小肠推进比减少(P<0.01)、粪便含水量降低(P<0.01),胰腺病理评分增高(P<0.01),其结肠黏膜下神经节中ChAT阳性神经元表达下调(43.85%±13.58%vs 16.27%±6.97%,P<0.05),但NOS阳性神经元无明显改变(22.49%±5.14%vs 24.36%±4.79%,P>0.05)。相关性分析显示ChAT阳性神经元与结肠蠕动频率呈正相关(r=0.738,P<0.01)。结论 SAP伴有胃肠动力障碍,其发病机制可能与ChAT阳性神经元或其他神经元的重塑有关。

雌激素对卵巢摘除大鼠心内神经节细胞胆碱乙酰基转移酶和一氧化氮合酶表达的影响

目的 :探讨雌激素对卵巢摘除大鼠心内神经节细胞中神经递质的影响。方法 :建立去卵巢 (OVX)和雌激素替代疗法动物模型 ,2个月后用免疫组化结合图象分析方法观察大鼠心内神经节细胞中胆碱乙酰基转移酶 (ChAT)和一氧化氮合酶 (NOS1)的变化。结果 :在OVX大鼠心内神经节细胞中ChAT和NOS1较正常对照组明显减少 ,雌激素 (E2 )替代治疗组与正常对照组相比无明显变化 ,OVX +雌激素受体拮抗剂 (TAM)组较正常对照组显著减少 ,但与OVX组无明显差异。结论 :雌激素能上调大鼠 (OVX)心内神经节细胞中ChAT和NOS1的表达 ,雌激素可能够通过对心内神经节细胞中神经递质的调节 。

中枢胆碱能神经元变性对小鼠肝叶切除术后认知功能的影响

目的观察中枢胆碱能神经元变性对小鼠肝叶切除术后认知功能的影响。方法将C57BL/6小鼠随机分为麻醉组、手术组、多奈哌齐组、mu-p75-sap组、对照组,每组5只。麻醉组动物吸入2.6%七氟烷、30%氧气、70%氮气混合气体6 h麻醉;手术组、多奈哌齐组、mu-p75-sap组采用同法麻醉并接受肝叶切除手术,其中多奈呱齐组术前给予选择性可逆中枢乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂多奈哌齐5 mg/kg灌胃4周,mu-p75-sap组麻醉后向小鼠各侧脑室双侧各注射免疫毒素mu-p75-sap 0.8μg制作胆碱能神经元变性模型。对照组动物不进行手术和麻醉操作。采用Morris水迷宫实验检测小鼠学习和记忆能力,采用考马斯亮兰蛋白测定试剂盒检测各组海马组织中枢胆碱能神经生物标志物[胆碱乙酰转移酶(ChAT)、AChE、乙酞胆碱(Ach)]。结果与对照组相比,手术组逃逸潜伏期延长,AChE表达增高,停留时间、穿越平台次数和海马组织ChAT、Ach表达减少(P均<0.05)。与手术组相比,多奈哌齐组逃逸潜伏期缩短、停留时间和穿越平台次数增多、AChE表达降低、ChAT和Ach表达增高,mu-p75-sap组小鼠逃逸潜伏期延长、停留时间和穿越平台次数减少、ChAT和Ach表达降低、AChE表达增高(P均<0.05)。结论肝叶切除术可影响小鼠术后认知功能,中枢胆碱能神经元变性可加重对术后认知功能的影响,可能会导致术后认知障碍的发生发展。

丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马胆碱乙酰基转移酶mRNA表达的影响

目的:研究丁基苯酞对老龄大鼠慢性脑缺血后大脑海马中胆碱乙酰基转移酶(Chat)mRNA表达的影响。方法:50只大鼠随机分为5组,每组10只。其中4组永久性结扎双侧颈总动脉(2VO)制作慢性脑缺血模型。对照组除不结扎2VO外,其他操作同前。预防用药组于术前1个月按80mg/kg给予丁基苯酞每d灌胃,高、低剂量药物组术后2个月分别按120mg/kg、60mg/kg给予丁基苯酞每d灌胃,丁基苯酞用花生油稀释至2mL。模型组和对照组术后每d给予花生油2mL。3个月后,应用RT-PCR技术检测大鼠大脑海马组织中Chat mRNA的表达。结果:对照组海马Chat mRNA的表达水平为(0.75±0.09),模型组为(0.31±0.11),高、低剂量药物组分别为(0.61±0.16)和(0.48±0.11),预防用药组为(0.44±0.16)。与对照组比较,其他4组Chat mRNA的表达水平均低(P均<0.05);高剂量药物组Chat mRNA的表达高于低剂量药物组和预防用药组(P均<0.05),但该3组均高于模型组(P均<0.05)。结论:慢性脑缺血后大鼠海马Chat基因表达水平下降,丁基苯酞可使海马Chat mRNA表达水平提高。

人参皂苷Rg1对阿尔茨海默病模型大鼠脑片磷酸化Tau蛋白及胆碱乙酰基转移酶表达的影响

目的观察人参皂甙Rg1对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑片磷酸化tau蛋白(P-tau)及胆碱乙酰基转移酶(Ch AT)表达的影响。方法将5周龄雄性大鼠脑片随机分为五组,分别放置人工脑脊液中培养。3个人参皂苷Rg1组培养液中分别加入不同浓度人参皂苷Rg1,在模型组和3个人参皂苷Rg1组培养液中分别加入冈田酸,空白对照组不加任何处理。采用Western印迹、图像分析技术等方法,检测皮层和海马P-tau、Ch AT的表达水平。结果与空白对照组比较,模型组P-tau表达显著增加(P<0.01);Ch AT表达降低(P<0.01);与模型组比较,人参皂甙Rg1各组P-tau表达均明显减少(P<0.01),Ch AT表达均明显增加(P<0.01);Rg1三个浓度组之间差异显著(P<0.01),以高浓度组效果最佳。结论人参皂甙Rg1可通过降低P-tau表达水平,提高Ch AT活性,从而减少神经元纤维缠结的形成,并可能通过调节胆碱能功能的途径发挥抗痴呆的作用。

乙酰胆碱酯酶阳性神经元在鼠脑的分布和形态特征

本文用乙酰胆碱酯酶(AChE)再生技术,研究AChE阳性神经元在鼠脑的分布和形态特征。按其染色程度,可见强度、中度和轻度三种染色细胞。强染色细胞多数是较大的多极细胞,主要分布于纹状体、基底前脑、下丘脑、黑质、红核、蓝斑,腹侧被盖区、臂旁核、桥被盖核和脑神经运动核。本文将AChE染色结果和胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫组织化学资料进行了比较,对AChE和胆碱能神经元的关系,以及AChE阳性神经元的性质和意义,进行了讨论。

TA9902对SAM-P/8小鼠脑胆碱乙酰转移酶神经元的影响

目的 探讨抗氧化剂TA990 2 (TA990 1配伍EGb76 1)对加速老化鼠P/ 8(SAM P/ 8)脑胆碱乙酰转移酶 (ChAT)神经元的影响 ,为治疗阿尔采默病 (AD)提供理论依据。方法 选用 3月龄雄性SAM P/ 8小鼠 83只 ,随机分为TA90 0 1组、TA990 2低剂量组、TA990 2高剂量组、EGb76 1组、HAT组和老年组 ;另选 3月龄 15只为年轻组。对隔区切片用胆碱乙酰转移酶 (ChAT)免疫组化染色 ,并对ChAT阳性神经元进行计数和图像分析。结果 老年SAM P/ 8小鼠内侧隔核 斜角带 (MS DB)区ChAT神经元明显受损。TA990 2对MS DB区ChAT受损害神经元有显著改善作用 ,主要表现在ChAT神经元数量的增加和平均灰度值的下降 ,尤以高剂量组明显 ,这种改善作用虽有优于对照药HAT的趋势 ,但与HAT无显著性差异。相关分析结果表明ChAT阳性神经元数量与小鼠避暗试验测得的STL和STS分别呈显著正相关和负相关 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 TA990 2有促进SAM P/ 8鼠脑受损胆碱能系统恢复的作用 ,这可能是其改善SAM P/

高同型半胱氨酸血症对大鼠学习记忆能力和海马胆碱乙酰基转移酶表达的影响及叶酸的干预作用

目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对大鼠学习记忆能力和海马胆碱乙酰基转移酶(ChAT)表达的影响及叶酸的干预作用。方法将30只Wistar大鼠随机分为正常对照组、HHcy组和叶酸干预组,每组10只。在大鼠饮水中添加蛋氨酸[1.0g/(kg·d)]制作HHcy模型,叶酸干预组大鼠同时给予叶酸[0.4mg/(kg·d)]灌胃,共持续8周。在实验前后测定各组血浆同型半胱氨酸(Hcy)、叶酸的浓度,给各组大鼠进行Morris水迷宫试验检查学习记忆能力,实验8周后用免疫组化染色观察大鼠海马区ChAT的表达水平。结果与正常对照组和叶酸干预组比较,HHcy组水迷宫试验的逃避潜伏期明显延长,穿过平台次数明显减少,停留时间明显缩短(P<0.05～0.01);HHcy组大鼠海马CA3区ChAT阳性细胞平均灰度值明显降低(P<0.01)。叶酸干预组与正常对照组以上各项检查结果比较,差异无统计学意义。结论 HHcy导致大鼠学习记忆能力下降以及海马CA3区ChAT表达水平降低。补充叶酸能够起到很好的干预作用。

大鼠脑缺血再灌注损伤对海马组织中学习记忆相关的胆碱乙酰基转移酶活力变化的影响(英文)

背景:海马组织中乙酰胆碱的代谢情况可在一定程度上反映与学习记忆相关的胆碱能系统的功能状况,并影响智能程度。目的:观察大鼠脑缺血再灌注后海马组织胆碱乙酰基转移酶活力的动态变化。设计:以实验动物为观察对象的随机对照实验研究。单位:承德医学院科研处。材料:实验于2002年在承德医学院中心实验室完成。W istar大鼠24只,体质量260～280g,雌雄各半,清洁级。方法:24只大鼠随机分为3组:①模型组。高脂血症大鼠,阻断大鼠双侧颈总动脉进行脑缺血再灌注。②假手术组。高脂血症大鼠仅做双侧颈总动脉分离术,不进行缺血再灌注。③正常对照组。不加任何处理。各组大鼠分别于术后第1,7,15d 断头取脑,用比色法测海马组织胆碱乙酰基转移酶活力。主要观察指标:大鼠脑海马组织胆碱乙酰基转移酶活力的测定。结果:24只大鼠进入结果分析,无脱失。①模型组大鼠第1天、第7天胆碱乙酰基转移酶活力较正常对照组明显降低犤模型组:(0.037±0.006)μm ol/g·s,(0.017±0.006)μm ol/g·s;正常组对照组:(0.054±0.003) μm ol/g·s,(0.058±0.006)μm ol/g·s,P <0.01犦。②模型组大鼠第7天胆碱乙酰基转移酶活力明显低于第1天,随着缺血再灌注损伤的修复,第15天胆碱乙酰基转移酶活力有所回升(0.039±0.007)μnm ol/g·s。③假手术组胆碱乙酰基转移酶活力与正常组无明显差异(P >0.05)。结论:单纯手术不会导致脑组织胆碱乙酰基转移酶的变化,脑缺血再灌注后可使海马胆碱乙酰基转移酶活力降低,使中枢胆碱能系统功能紊乱,可能是导致大鼠智能障碍的原因。

一种脑胆碱乙酰基转移酶活性测定法

对测定胆碱乙酰基转移酶的Ｆｏｎｎｕｍ法稍加改进，并严格控制操作条件。应用改进的方法测定了大鼠脑胆碱乙酰基转移酶活性，结果更准确。

慢性脑缺血对大鼠海马微血管构筑及胆碱乙酰基转移酶蛋白表达的影响

目的:探讨慢性脑缺血致大鼠海马胆碱能神经元损伤的作用,初步阐明其作用机制。方法:选取90只健康成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组(30只)和实验组(60只)。实验组大鼠采用结扎双侧颈总动脉的方法,建立慢性脑缺血模型;假手术组大鼠颈部正中切口,分离双侧颈总动脉,不做结扎。分别于术后第7、14和21天随机各取假手术组大鼠10只、实验组大鼠20只处死取材。免疫组织化学SP法观察海马神经元胆碱乙酰基转移酶(ChAT)蛋白表达水平的动态变化,单宁酸-氯化铁媒染法观察大鼠海马微血管构筑的动态变化,采用MiVnt图像分析系统定量分析免疫组织化学阳性结果、大鼠海马水平部的微血管密度(MVD)和微血管面积密度(MVA)。结果:实验组大鼠海马神经元ChAT的表达水平较假手术组大鼠明显降低(P<0.05);且随缺血时间的延长,ChAT的表达水平逐渐降低,实验组14d时大鼠ChAT的表达水平明显低于实验组7d时(P<0.05),实验组21d时明显低于实验组14和7d(P<0.05)。实验组各时间点大鼠海马的MVA和MVD均较假手术组明显降低(P<0.05)。随着造模时间的延长,MVA逐渐降低,实验组14和21d时大鼠的MVA明显低于实验组7d时(P<0.05);随着造模时间的延长,MVD也逐渐降低,实验组14和21d时的MVD明显低于实验组7d(P<0.05),实验组21d时明显低于实验组14d(P<0.05)。结论:慢性脑缺血可致大鼠海马MVA、MVD及ChAT蛋白的表达水平进行性下降,进而导致学习和记忆功能障碍逐渐加重,这可能是血管性痴呆发生的原因之一。

海洛因、麻黄素对小鼠仔鼠下丘脑、海马组织结构及胆碱乙酰基转移酶活性的影响

目的探讨海洛因和麻黄素对仔鼠下丘脑、海马组织结构及胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活性的影响,观察Bax蛋白和角质细胞生长因子(KGF)在下丘脑、海马的表达。方法108只昆明小鼠仔鼠,采用递增剂量连续腹腔注射海洛因和麻黄素,利用吉姆萨染色及免疫组织化学方法观察下丘脑和海马凋亡细胞的变化及Bax蛋白和KGF的表达,利用比色法检测下丘脑和海马ChAT活性的变化。结果仔鼠注射海洛因、麻黄素5d、10d、15d、20d,下丘脑和海马凋亡细胞及Bax蛋白和KGF阳性表达细胞的数量均高于对照组,ChAT的活性低于对照组,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);海洛因组仔鼠下丘脑和海马的上述4项指标与麻黄素组相比,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)。随着海洛因和麻黄素剂量的递增,仔鼠下丘脑和海马凋亡细胞及Bax蛋白和KGF阳性表达细胞的数量呈增多趋势。结论海洛因和麻黄素影响仔鼠下丘脑和海马的组织结构及ChAT活性,其机制可能与下丘脑和海马组织的细胞凋亡有一定相关性。

胆碱乙酰基转移酶对老年性痴呆模型小鼠学习记忆的影响

早老性痴呆（阿尔茨默氏病，Alzheimer＇sdisease．AD）是一种以认知障碍和记忆力损害为特征的胆碱能神经进行性退行性疾病。从源头上补充胆碱能神经递质乙酰胆碱的合成酶胆碱乙酰基转移酶（choline—O—acetyltransferase，ChAT），应能增强胆碱能神经功能。首先人源性重组ChAT融合蛋白基因进行构建、克隆及表达，重组ChAT静脉注射给小鼠后能穿越血脑屏障并在中枢催化合成乙酰胆碱。重组ChAT静脉给予自然衰老认知障碍模型小鼠后，能显著地改善痴呆症状。

小鼠胆碱乙酰基转移酶慢病毒载体的构建及其在RAW264.7细胞中的表达

目的:构建胆碱乙酰基转移酶(ChAT)过表达的慢病毒载体,转染小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7,上调细胞中ChAT表达。方法:利用PCR方法从小鼠cDNA文库中调取ChAT基因,克隆至pGC-FU慢病毒载体上,经PCR和测序鉴定。用pGC-FU ChAT质粒转染RAW264.7后,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,real-time PCR检测RAW264.7细胞中ChAT基因表达丰度。结果:融合表达GFP的慢病毒载体pGC-FU-ChAT感染RAW264.7细胞的效率可达80%以上,感染细胞ChAT基因表达大幅上调。结论:成功构建了携带ChAT基因的慢病毒载体,能有效感染RAW264.7细胞,细胞中ChAT基因过表达。

Genistein对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元影响的体内研究

本文旨在研究染料木素(genistein)对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响。雌性大鼠双侧卵巢切除2周后用genistein和雌激素替代治疗1周。称子宫重量以确定手术是否成功及雌二醇(E2)的治疗是否有效。用免疫组化染色、RT-PCR和Westernblot等方法对胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量进行检测。结果显示:去卵巢3周后子宫变轻,雌激素替代治疗能增加去卵巢子宫的重量,而genistein替代治疗对去卵巢子宫的重量影响不明显;去卵巢3周后,内侧隔核(MS)和斜角带垂直臂核(VDB)内的胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量均明显减少,雌激素和genistein替代治疗后能显著增加去卵巢大鼠MS和VDB内的胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量。本研究结果提示:genistein对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元具有类似雌激素样神经保护作用,而对子宫影响不明显。

神经干细胞与血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经元变化的相关性

背景:血管性痴呆患者存在额叶皮质及海马胆碱能神经元受损,可能是导致患者认知功能受损的形态学基础。目的:探讨神经干细胞与血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经元变化的相关性。方法:纳入90只SD大鼠,随机均分为3组,其中假手术组仅分离颈总动脉,模型组和神经干细胞移植组采用两血管结扎法建立血管性痴呆动物模型,神经干细胞移植组在建立血管性痴呆动物模型之后向大鼠海马CA1区注射5μL神经干细胞,另外两组按照同样的操作注射相同剂量的生理盐水。移植后第3,7,14,30,60天,分别处死各组6只大鼠,采用S-P免疫组化法检测各组脑实质Brd U阳性细胞和Ch AT阳性细胞分布情况,利用Morris水迷宫系统检测大鼠学习记忆能力。结果与结论:Brd U阳性细胞主要分布在大脑皮质区以及海马区,尤其是血管周围。在基底核和丘脑以及室管膜区,可观察到少量Brd U阳性细胞存在。随着时间的推移,Brd U阳性细胞数目不断下降,到移植后60 d,仅存在少量Brd U阳性细胞存活。移植后不同时间模型组和神经干细胞移植组的Ch AT阳性细胞数均显著大于假手术组(P<0.05);模型组Ch AT阳性细胞数显著低于神经干细胞移植组(P<0.05)。模型组寻找平台时间显著长于假手术组,穿越平台次数显著少于假手术组(P<0.05);神经干细胞移植组的寻找平台时间显著短于模型组,穿越平台次数显著大于模型组(P<0.05)。结果表明神经干细胞可以在大鼠脑内存活并发生迁移,显著改善血管性痴呆大鼠学习记忆能力,相关机制可能与海马胆碱能神经元分化和生长有关。

针刺对干眼模型兔胆碱能神经元ChAT表达的影响

目的:通过观察针刺对干眼模型兔泪液分泌量及各脑区神经元中Ch AT含量的变化,探讨针刺治疗干眼模型兔的作用机制。方法:新西兰兔随机分为正常组、模型组、西药组和针刺组4组,每组4只。正常组不做任何处理;模型组皮下注射氢溴酸东莨菪碱,2.0 mg/次,4次/d,直至实验结束;西药组和针刺组从干眼动物模型制作成功开始,分别滴1%毛果芸香碱滴眼液和针刺治疗,连续治疗7 d。采用Schirmer试纸检测各组实验兔不同时间段泪液分泌量,采用免疫荧光组织化学方法,观察各组实验兔各脑区神经元中Ch AT表达的变化。结果:Schirmer试纸检测泪流量结果显示,在实验第28天即治疗7 d后,针刺组与西药组与实验第21天相比,泪流量明显增加;实验第28天,针刺组与西药组分别与模型组比较,差异具有显著性(P<0.05)。Ch AT免疫阳性神经元表达与分布显示,Ch AT免疫反应阳性产物较多位于脑桥的被盖背侧核和臂旁外侧核内。其阳性物质计数显示,西药组、针刺组分别与模型组比较,被盖背侧核和臂旁外侧核中Ch AT免疫阳性神经元表达个数均增多,且均值具有显著差异性(P<0.05)。平均光密度值显示,西药组、针刺组分别与模型组比较,以上两核团内Ch AT免疫阳性细胞平均光密度值均大于模型组。结论:毛果芸香碱滴眼液和针刺治疗均可增加脑桥的被盖背侧核和臂旁外侧核的Ch AT表达,促进兔泪腺分泌泪液,从而改善干眼症状。