大黄素加重蛋氨酸-胆碱缺乏饲料诱导的小鼠非酒精性脂肪肝

目的研究大黄素(emodin)对蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饲料诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的影响。方法C57BL/6J小鼠随机分为3组,分别为添加蛋氨酸-胆碱饲料组(MCS)、MCD饲料联合DMSO注射组(MCD)、MCD饲料联合emodin注射组(MCD-emodin)。三组小鼠喂养相应饲料,10 d后,每天腹腔分别注射DMSO或emodin,连续注射20 d。HE染色观察肝脏病理改变;全自动生化分析仪检测血清谷氨酸氨基转移酶(ATL)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、碱性磷酸酶(ALP)和葡萄糖(GLU)水平;实时定量PCR技术检测肝脏白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。结果 HE染色显示,与MCS组相比,MCD饲料组引起明显的脂肪变性和炎性细胞浸润,且注射emodin后脂肪变性及炎性细胞浸润明显增加;与单纯MCD饲料组相比,emodin注射后,血清ALT和AST水平显著升高,IL-1β和IL-6的mRNA水平明显上升。结论 Emodin加重MCD饲料诱导的NAFLD。

甲状旁腺激素相关蛋白加重蛋氨酸胆碱缺乏饲料诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病进展

目的研究甲状旁腺激素相关蛋白(PTHr P)对蛋氨酸胆碱缺乏饲料(MCD)诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的影响。方法构建小鼠NAFLD模型并分为空白对照组(普通饲料喂养4周)、AAV-Vehicle组(注射空载腺相关病毒AAVVehicle)和AAV-PTHr P组(注射PTHr P过表达腺相关病毒)。实验期间监测小鼠体质量。收集小鼠肝脏组织进行HE染色、油红染色和天狼星红染色评估肝脏组织病理学改变;检测肝脏及血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、甘油三酯和游离脂肪酸浓度评估小鼠肝脏损伤及脂肪代谢水平。250μmol/LFFAs诱导小鼠正常肝细胞和人正常肝细胞24 h构建NAFLD细胞。根据有无PTHr P处理分为PTHr P组、对照组。油红及尼罗红染色检测细胞内脂质沉积程度;CCK8试剂盒检测PTHr P对脂肪变性肝细胞的毒性作用。结果动物实验:对比AAV-Vehicle组,AAV-PTHr P组小鼠体重下降更为快速;AAV-PTHr P组小鼠肝脏谷草转氨酶(P<0.05)、谷丙转氨酶(P<0.05)、甘油三酯(P<0.01)、游离脂肪酸(P<0.05)水平,NAS评分以及SAF评分均显著升高(P<0.01,P<0.05),肝脏脂滴堆积更为明显。细胞实验:同时加入PTHr P,小鼠及人NAFLD细胞模型的脂质沉积更为明显(P<0.01),且细胞活性下降(P<0.05)。结论PTHr P可能通过促进肝细胞脂滴沉积,加重MCD诱导的小鼠NAFLD。

胆碱-蛋氨酸缺乏饲料诱导的非酒精性脂肪肝大鼠chemerin及其受体的表达

目的 探讨胆碱.蛋氨酸缺乏饲料（MCD）诱导非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）不同时期大鼠肝脏chemerin及其受体（chemokine-like receptor 1,CMKLRI）表达的动态变化.方法 Wistar大鼠随机分为对照组和MCD组.适应性喂养1周后,分别给予普通饲料和MCD饲料喂养,分别在喂养1、4、10周时处死.检测血清谷丙转氨酶（alanine transarninase,ALT）、血脂、肝功能及肝脏TG含量,并做HE染色观察肝脏形态变化;采用实时荧光定量PCR检测细胞因子chemerin及CMKLR1 mRNA水平的表达变化,并用Northern印迹进一步确认chemerin mRNA水平的表达变化.Western印迹检测小鼠血清chemerin水平.结果 MCD饲料喂养1、4和10周后,MCD组肝脏chemerin的mRNA表达逐渐下降（1.00±0.08对0.72±0.10;1.00±0.24对0.63±0.31;1.00±0.05对0.50±0.13）;CMKLR1表达逐渐上升（1.00±0.14对0.84±0.26;1.00±0.38对1.51±0.33;1.01±0.13对1.84±0.39）.血清chemerin含量减少（1.00±0.11对0.96±0.39;1.00±0.12对0.21±0.77;1.00±0.42对0.21±0.11）.结论 Chemerin及其受体的表达变化可能参与了MCD饲料诱导的非酒精性脂肪肝的发病过程.

Nrf2减轻小鼠非酒精性脂肪性肝炎

目的研究Nrf2对小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的作用及其可能机制。方法通过蛋氨酸-胆碱缺乏饲料(MCD)饲喂小鼠获得NASH模型;随机分为对照组、模型组以及Nrf2组,Nrf2组灌胃姜黄素0.9 mL/d,对照组和模型组给予相应体积的0.9%氯化钠注射液灌胃。4周后检测肝组织中Nrf2含量,肝指数,血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶水平(AST)、葡萄糖(GLU)、三酰甘油(TG)和胆固醇(Chol)含量;对肝脏进行油红O染色;检测肝组织中TG、Chol、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;并检测细胞色素C和ATP含量。结果与模型组小鼠相比,Nrf2组小鼠的血清中ALT,AST和GLU含量下降(P<0.05),肝组织中TG、Chol和MDA含量下降(P<0.05),GSH水平、SOD活性升高(P<0.05);同时细胞色素C漏出降低,ATP含量上升(P<0.05)。结论 Nrf2对由蛋氨酸-胆碱缺乏所引起的NASH具有一定的保护作用,其机制可能是通过减少氧化应激,提高线粒体活性实现的。

柚皮素通过调控TGF-β1/smad通路抑制肝纤维化

目的研究柚皮素(naringenin,NGN)对小鼠肝纤维化的抑制作用及机制。方法TGF-β1孵育LX2细胞24 h,构建体外纤维化模型,NGN(100、200μmol·L^(-1))处理细胞;喂饲8~10周龄雄性C57BL/6小鼠蛋氨酸-胆碱缺乏饲料6周,诱导小鼠肝脏纤维化模型,同时灌胃给予NGN(100 mg·kg^(-1)),研究NGN抑制肝纤维化的作用及机制。qRT-PCR检测α-SMA、col1和col3的基因水平;Western blot检测α-SMA、col1、TGF-β1、p-smad2和p-smad3的蛋白水平;HE染色和天狼猩红染色分别检测小鼠肝脏组织形态和纤维化程度。结果体内外实验均表明,与模型组相比,NGN处理明显降低了α-SMA、col1和col3的mRNA和蛋白表达水平,同时明显抑制TGF-β1/smad通路的激活。HE染色和天狼猩红染色结果同样表明,NGN处理与模型组相比明显降了MCD饲料诱导的肝脏纤维化程度。结论NGN可明显抑制TGF-β1诱导的LX2细胞纤维化及蛋氨酸-胆碱缺乏饲料诱导的小鼠肝纤维化,机制与其抑制TGF-β1/smad通路激活有关。

过表达apoA-I对小鼠非酒精性脂肪性肝炎作用的研究

目的研究非酒精性脂肪性肝炎(NASH),脂肪酸(FFA)及载脂蛋白A1(apoA-I)三者之间的作用及其对预防治疗NASH的意义。方法通过胆碱-蛋氨酸缺乏(MCD)饲料喂养的小鼠NASH模型,注射含有人apoA-I基因的腺病毒载体或对照腺病毒载体一周后,检测小鼠肝脏指数,血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平,对肝脏切片进行油红O染色,检测血清和肝组织中甘油三酯(TG),FFA及胆固醇(Chol)的含量。结果与对照组相比,过量表达apoA-I的小鼠肝脏病变减轻,脂质堆积减少,血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平有所下降,肝组织中TG,FFA及Chol含量明显降低,相应的其血清TG,Chol水平升高。结论过量表达apoA-I可通过减少小鼠肝脏中过量脂质的堆积而对NASH起到缓解作用。

Nrf2对小鼠非酒精性脂肪性肝炎保护作用机制的研究

通过饲喂小鼠蛋氨酸-胆碱缺乏饲料(methionine choline-deficient diet,MCD)获得小鼠非酒精性脂肪肝炎(nonalcoholic steatohepatities,NASH)模型。随机分为对照组,模型组及姜黄素诱导Nrf2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)组。给予姜黄素诱导Nrf2组0.9ml/d姜黄素剂量进行灌胃,对照组、模型组给予相应体积的生理盐水灌胃。模型组和姜黄素诱导Nrf2组均饲喂MCD饲料。饲喂4周后,通过HE染色和油红O染色检测小鼠非酒精性脂肪性肝炎情况。检测血清和肝组织中甘油三酯(TG)和胆固醇(Chol)含量;检测肝组织中葡萄糖调节蛋白-78(glucose-regulated protein-78,GRP-78),固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)、磷酸化双链RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(phospho-PRK-1ike ER kinase,p-PERK)的含量。结果表明:与模型组相比,姜黄素诱导Nrf2组血清中TG和Chol水平升高;肝组织中TG和Chol含量降低;同时肝组织中GRP78表达上调,SREBP1的前体和成熟体均有所下降;PERK磷酸化水平降低。因此,Nrf2对蛋氨酸-胆碱缺乏所引起的NASH具有一定的保护作用,而这种保护作用可能与减轻内质网应激相关。

非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型构建及基因表达谱分析

目的研究非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型小鼠肝脏基因表达谱变化,为NASH发生发展的分子机制及防治药物研发提供参考。方法甲硫氨酸(蛋氨酸)-胆碱缺乏(MCD)饲料喂饲C57BL/6小鼠构建NASH模型,分别于造模0、1、2、3周称量小鼠体质量,摘眼球取血,全自动生化仪检测血糖、转氨酶、甘油三酯、胆固醇及游离脂肪酸,脱颈活杀小鼠后摘取肝脏称重,肝组织HE染色,并用称重法检测肝脏甘油三酯。TRIzol提取造模0周和3周组小鼠肝脏总RNA并检测基因表达谱变化,对差异基因进行基因本体(GO)分析及RT-PCR验证。结果与0周小鼠相比,随着MCD饲料喂饲时间延长,小鼠体质量不断下降、肝缩小、转氨酶水平升高、血糖下降、血清甘油三酯和胆固醇略微下降、肝脏中甘油三酯显著增加,HE染色可见MCD喂饲第1周小鼠肝细胞出现水泡变性,MCD 2周组小鼠肝细胞发生气球样变,MCD 3周组小鼠肝脏存在广泛重度脂肪变性以及坏死肝细胞。基因芯片检测结果显示,MCD喂饲3周后导致小鼠肝脏出现8951个差异基因,其中3649个上调基因、5302个下调基因。富集分析结果显示,差异基因显著富集在炎症反应、氧化应激、凋亡、胆固醇合成、内质网应激(ERS)、鞘脂代谢、糖酵解、TGFβ通路、NF-κB通路和PPAR通路。采用RT-PCR对炎症、ERS以及TGFβ通路基因的变化进行验证,与芯片结果一致。结论利用MCD喂饲构建小鼠NASH模型成功,与正常小鼠相比,NASH小鼠肝组织大量基因表达水平存在显著差异,特别是炎症、应激等过程及其涉及的通路,可作为NASH疾病机制探索及药物研发的靶点。