小鼠视网膜胆碱能无长突细胞出生后的密度分析

为了研究小鼠出生后视网膜胆碱能无长突细胞密度和空间分布的发育变化,使用免疫组织化学的方法对不同天龄小鼠视网膜的胆碱能无长突细胞进行免疫荧光标记,并对用激光共聚焦显微镜采集的数据进行统计学分析.结果表明,小鼠视网膜胆碱能无长突细胞的密度随天龄增长而降低,这个结果与通过眼球直径预测的变化一致.

小鼠视网膜胆碱能无长突细胞阵列分布及发育过程中的变化

目的本研究分析了小鼠视网膜胆碱能无长突细胞空间分布的规律,并观察了出生后视网膜的生长对其规律性的影响。方法我们用免疫组织化学方法标记不同发育期(P8、P13和成年)的小鼠视网膜神经节细胞层(ganglion cell layer,GCL)及内核层(inner nuclear layer,INL)胆碱能无长突细胞的胞体,用Voronoi domain来量化分析胆碱能阵列的空间分布规律,并使用规则指数RI评价规则度。结果小鼠胆碱能阵列的规则指数RI(5.27)明显高于随机点的规则指数(2.05),这种高规则性在成年小鼠视网膜不同离心度保持高度的一致性,离心度0.25、0.50、0.75、≈1.00时规则指数分别为:INL:4.87±0.67、4.77±0.83、4.31±0.68、4.66±1.38;GCL:2.52±0.83、3.53±0.26、3.70±0.83、3.43±0.43。INL Voronoi domain的面积随离心度增加而扩大,各离心度面积分别为:(650.89±134.00)μm2、(747.23±157.00)μm2、(946.39±220.00)μm2、(1141.79±245.00)μm2。GCL各离心度面积分别为:(875.36±258.00)μm2、(838.07±211.00)μm2、(915.60±256.00)μm2、(1155.40±371.00)μm2,GCL的Voronoi domain的面积在0.25、0.50离心度时差异无统计学意义(P>0.05),但在余离心度时面积随离心度增加而扩大。而在P8、P13和成年三个不同发育阶段,胆碱能阵列的规则指数RI分别为:INL:5.5±0.7、4.7±0.5、4.6±0.9;GCL:4.9±1.2、4.1±0.7、4.2±0.7;P8INL高于P13和成年时(均为P<0.05),而GCL各年龄段差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论视网膜胆碱能阵列的空间分布有非常高的规则性,且这种规则性在出生后早期就形成,而在发育过程中虽然视网膜在扩张,但其规则性并不发生改变。

小鼠视网膜胆碱能无长突细胞和方向选择性神经节细胞树突野发育的相关性研究

目的探讨小鼠视网膜方向选择性神经节细胞(DSGC)树突野(DF)的发育及其与胆碱能细胞阵列的关系。方法选用中国科学院生物物理研究所实验动物中心繁殖的清洁级YFP(H)品系的转基因小鼠(种鼠来源于The Jackson实验室)共36只,0～1月龄,雌雄不限。对出生后不同发育时期(P8、P13及成年)的小鼠视网膜中ON/OFF DSGC及OFF DSGC的DF范围内包含的胆碱能细胞的数目采用单因素方差分析进行比较,当差异有统计学意义时,进一步两两比较。结果 ON/OFF DSGC作为经典的方向选择性神经节细胞,其树突具有两层树突结构,分别分布在视网膜内网状层的ON和OFF亚层中,其树突弯曲度和树突分支之间的夹角比较大,分支多向胞体方向返回呈半环状,显著的特点是同一细胞的树突不会发生交叉。P8时,D2亚类神经节细胞(即ON/OFF DSGC) DF范围中分别包含(25.6±4.8)个内核层(INL)的胆碱能无长突细胞和(28.4±5.7)个视网膜神经节细胞(GCL)的胆碱能无长突细胞(n=7); P13时,D2亚类神经节细胞DF范围中分别包含(30.8±9.5)个INL的胆碱能无长突细胞和(35.2±10.4)个GCL的胆碱能无长突细胞(n=10);成年时,D2亚类神经节细胞DF范围中分别包含(33.7±7.4)个INL的胆碱能无长突细胞和(32.1±5.6)个GCL的胆碱能无长突细胞(n=9),三个时期的胆碱能无长突细胞的数目差异均无统计学意义(F=2.16,1.55; P>0.05)。而视网膜中另外一种方向选择性神经节细胞OFF DSGC的DF范围内无长突细胞的数目从P8到P13先增多,然后从P13到成年又减少。P8时,该类细胞DF范围内位于GCL的无长突细胞数目为(20.0±2.5,n=8)个,明显少于P13时的(32.0±7.1,n=6)个;成年时,数目又减少到(23.7±7.5,n=14)个。,三个时期的胆碱能无长突细胞的数目差异均无统计学意义(F=6.19,1.55; P<0.05)。结论小鼠视网膜ON/OFF DSGC的DF在出生后早期就已经发育成熟,并和胆碱能细胞形成稳定的联系,不再受后期双极细胞及光刺激的影响,而OFF DSGC的DF发育可能包含不同的分子和细胞机制。