丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马胆碱乙酰基转移酶mRNA表达的影响

目的:研究丁基苯酞对老龄大鼠慢性脑缺血后大脑海马中胆碱乙酰基转移酶(Chat)mRNA表达的影响。方法:50只大鼠随机分为5组,每组10只。其中4组永久性结扎双侧颈总动脉(2VO)制作慢性脑缺血模型。对照组除不结扎2VO外,其他操作同前。预防用药组于术前1个月按80mg/kg给予丁基苯酞每d灌胃,高、低剂量药物组术后2个月分别按120mg/kg、60mg/kg给予丁基苯酞每d灌胃,丁基苯酞用花生油稀释至2mL。模型组和对照组术后每d给予花生油2mL。3个月后,应用RT-PCR技术检测大鼠大脑海马组织中Chat mRNA的表达。结果:对照组海马Chat mRNA的表达水平为(0.75±0.09),模型组为(0.31±0.11),高、低剂量药物组分别为(0.61±0.16)和(0.48±0.11),预防用药组为(0.44±0.16)。与对照组比较,其他4组Chat mRNA的表达水平均低(P均<0.05);高剂量药物组Chat mRNA的表达高于低剂量药物组和预防用药组(P均<0.05),但该3组均高于模型组(P均<0.05)。结论:慢性脑缺血后大鼠海马Chat基因表达水平下降,丁基苯酞可使海马Chat mRNA表达水平提高。

人参皂苷Rg1对阿尔茨海默病模型大鼠脑片磷酸化Tau蛋白及胆碱乙酰基转移酶表达的影响

目的观察人参皂甙Rg1对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑片磷酸化tau蛋白(P-tau)及胆碱乙酰基转移酶(Ch AT)表达的影响。方法将5周龄雄性大鼠脑片随机分为五组,分别放置人工脑脊液中培养。3个人参皂苷Rg1组培养液中分别加入不同浓度人参皂苷Rg1,在模型组和3个人参皂苷Rg1组培养液中分别加入冈田酸,空白对照组不加任何处理。采用Western印迹、图像分析技术等方法,检测皮层和海马P-tau、Ch AT的表达水平。结果与空白对照组比较,模型组P-tau表达显著增加(P<0.01);Ch AT表达降低(P<0.01);与模型组比较,人参皂甙Rg1各组P-tau表达均明显减少(P<0.01),Ch AT表达均明显增加(P<0.01);Rg1三个浓度组之间差异显著(P<0.01),以高浓度组效果最佳。结论人参皂甙Rg1可通过降低P-tau表达水平,提高Ch AT活性,从而减少神经元纤维缠结的形成,并可能通过调节胆碱能功能的途径发挥抗痴呆的作用。

雌激素对卵巢摘除大鼠心内神经节细胞胆碱乙酰基转移酶和一氧化氮合酶表达的影响

目的 :探讨雌激素对卵巢摘除大鼠心内神经节细胞中神经递质的影响。方法 :建立去卵巢 (OVX)和雌激素替代疗法动物模型 ,2个月后用免疫组化结合图象分析方法观察大鼠心内神经节细胞中胆碱乙酰基转移酶 (ChAT)和一氧化氮合酶 (NOS1)的变化。结果 :在OVX大鼠心内神经节细胞中ChAT和NOS1较正常对照组明显减少 ,雌激素 (E2 )替代治疗组与正常对照组相比无明显变化 ,OVX +雌激素受体拮抗剂 (TAM)组较正常对照组显著减少 ,但与OVX组无明显差异。结论 :雌激素能上调大鼠 (OVX)心内神经节细胞中ChAT和NOS1的表达 ,雌激素可能够通过对心内神经节细胞中神经递质的调节 。

高同型半胱氨酸血症对大鼠学习记忆能力和海马胆碱乙酰基转移酶表达的影响及叶酸的干预作用

目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对大鼠学习记忆能力和海马胆碱乙酰基转移酶(ChAT)表达的影响及叶酸的干预作用。方法将30只Wistar大鼠随机分为正常对照组、HHcy组和叶酸干预组,每组10只。在大鼠饮水中添加蛋氨酸[1.0g/(kg·d)]制作HHcy模型,叶酸干预组大鼠同时给予叶酸[0.4mg/(kg·d)]灌胃,共持续8周。在实验前后测定各组血浆同型半胱氨酸(Hcy)、叶酸的浓度,给各组大鼠进行Morris水迷宫试验检查学习记忆能力,实验8周后用免疫组化染色观察大鼠海马区ChAT的表达水平。结果与正常对照组和叶酸干预组比较,HHcy组水迷宫试验的逃避潜伏期明显延长,穿过平台次数明显减少,停留时间明显缩短(P<0.05～0.01);HHcy组大鼠海马CA3区ChAT阳性细胞平均灰度值明显降低(P<0.01)。叶酸干预组与正常对照组以上各项检查结果比较,差异无统计学意义。结论 HHcy导致大鼠学习记忆能力下降以及海马CA3区ChAT表达水平降低。补充叶酸能够起到很好的干预作用。

大鼠脑缺血再灌注损伤对海马组织中学习记忆相关的胆碱乙酰基转移酶活力变化的影响(英文)

背景:海马组织中乙酰胆碱的代谢情况可在一定程度上反映与学习记忆相关的胆碱能系统的功能状况,并影响智能程度。目的:观察大鼠脑缺血再灌注后海马组织胆碱乙酰基转移酶活力的动态变化。设计:以实验动物为观察对象的随机对照实验研究。单位:承德医学院科研处。材料:实验于2002年在承德医学院中心实验室完成。W istar大鼠24只,体质量260～280g,雌雄各半,清洁级。方法:24只大鼠随机分为3组:①模型组。高脂血症大鼠,阻断大鼠双侧颈总动脉进行脑缺血再灌注。②假手术组。高脂血症大鼠仅做双侧颈总动脉分离术,不进行缺血再灌注。③正常对照组。不加任何处理。各组大鼠分别于术后第1,7,15d 断头取脑,用比色法测海马组织胆碱乙酰基转移酶活力。主要观察指标:大鼠脑海马组织胆碱乙酰基转移酶活力的测定。结果:24只大鼠进入结果分析,无脱失。①模型组大鼠第1天、第7天胆碱乙酰基转移酶活力较正常对照组明显降低犤模型组:(0.037±0.006)μm ol/g·s,(0.017±0.006)μm ol/g·s;正常组对照组:(0.054±0.003) μm ol/g·s,(0.058±0.006)μm ol/g·s,P <0.01犦。②模型组大鼠第7天胆碱乙酰基转移酶活力明显低于第1天,随着缺血再灌注损伤的修复,第15天胆碱乙酰基转移酶活力有所回升(0.039±0.007)μnm ol/g·s。③假手术组胆碱乙酰基转移酶活力与正常组无明显差异(P >0.05)。结论:单纯手术不会导致脑组织胆碱乙酰基转移酶的变化,脑缺血再灌注后可使海马胆碱乙酰基转移酶活力降低,使中枢胆碱能系统功能紊乱,可能是导致大鼠智能障碍的原因。

一种脑胆碱乙酰基转移酶活性测定法

对测定胆碱乙酰基转移酶的Ｆｏｎｎｕｍ法稍加改进，并严格控制操作条件。应用改进的方法测定了大鼠脑胆碱乙酰基转移酶活性，结果更准确。

慢性脑缺血对大鼠海马微血管构筑及胆碱乙酰基转移酶蛋白表达的影响

目的:探讨慢性脑缺血致大鼠海马胆碱能神经元损伤的作用,初步阐明其作用机制。方法:选取90只健康成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组(30只)和实验组(60只)。实验组大鼠采用结扎双侧颈总动脉的方法,建立慢性脑缺血模型;假手术组大鼠颈部正中切口,分离双侧颈总动脉,不做结扎。分别于术后第7、14和21天随机各取假手术组大鼠10只、实验组大鼠20只处死取材。免疫组织化学SP法观察海马神经元胆碱乙酰基转移酶(ChAT)蛋白表达水平的动态变化,单宁酸-氯化铁媒染法观察大鼠海马微血管构筑的动态变化,采用MiVnt图像分析系统定量分析免疫组织化学阳性结果、大鼠海马水平部的微血管密度(MVD)和微血管面积密度(MVA)。结果:实验组大鼠海马神经元ChAT的表达水平较假手术组大鼠明显降低(P<0.05);且随缺血时间的延长,ChAT的表达水平逐渐降低,实验组14d时大鼠ChAT的表达水平明显低于实验组7d时(P<0.05),实验组21d时明显低于实验组14和7d(P<0.05)。实验组各时间点大鼠海马的MVA和MVD均较假手术组明显降低(P<0.05)。随着造模时间的延长,MVA逐渐降低,实验组14和21d时大鼠的MVA明显低于实验组7d时(P<0.05);随着造模时间的延长,MVD也逐渐降低,实验组14和21d时的MVD明显低于实验组7d(P<0.05),实验组21d时明显低于实验组14d(P<0.05)。结论:慢性脑缺血可致大鼠海马MVA、MVD及ChAT蛋白的表达水平进行性下降,进而导致学习和记忆功能障碍逐渐加重,这可能是血管性痴呆发生的原因之一。

雪旺细胞源神经营养因子对神经元胆碱乙酰基转移酶活性的影响

目的研究雪旺细胞源神经营养因子(SDNF)是否影响运动神经元胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活性,了解其对运动神经元功能的影响。方法SD大鼠制作成一侧面神经损伤模型,实验组局部应用雪旺细胞源神经营养因子,对照组应用磷酸盐缓冲液,连续21 d,采用免疫组化染色法研究损伤侧和实验侧面神经核中运动神经元ChAT活性改变。结果实验组中运动神经元的ChAT阳性细胞数,面积及灰度值均优于对照组(P<0.01)。结论外源性雪旺细胞源神经营养因子可以防止轴突损伤后运动神经元胆碱乙酰基转移酶活性的降低。

海洛因、麻黄素对小鼠仔鼠下丘脑、海马组织结构及胆碱乙酰基转移酶活性的影响

目的探讨海洛因和麻黄素对仔鼠下丘脑、海马组织结构及胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活性的影响,观察Bax蛋白和角质细胞生长因子(KGF)在下丘脑、海马的表达。方法108只昆明小鼠仔鼠,采用递增剂量连续腹腔注射海洛因和麻黄素,利用吉姆萨染色及免疫组织化学方法观察下丘脑和海马凋亡细胞的变化及Bax蛋白和KGF的表达,利用比色法检测下丘脑和海马ChAT活性的变化。结果仔鼠注射海洛因、麻黄素5d、10d、15d、20d,下丘脑和海马凋亡细胞及Bax蛋白和KGF阳性表达细胞的数量均高于对照组,ChAT的活性低于对照组,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);海洛因组仔鼠下丘脑和海马的上述4项指标与麻黄素组相比,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)。随着海洛因和麻黄素剂量的递增,仔鼠下丘脑和海马凋亡细胞及Bax蛋白和KGF阳性表达细胞的数量呈增多趋势。结论海洛因和麻黄素影响仔鼠下丘脑和海马的组织结构及ChAT活性,其机制可能与下丘脑和海马组织的细胞凋亡有一定相关性。

胆碱乙酰基转移酶对老年性痴呆模型小鼠学习记忆的影响

早老性痴呆（阿尔茨默氏病，Alzheimer＇sdisease．AD）是一种以认知障碍和记忆力损害为特征的胆碱能神经进行性退行性疾病。从源头上补充胆碱能神经递质乙酰胆碱的合成酶胆碱乙酰基转移酶（choline—O—acetyltransferase，ChAT），应能增强胆碱能神经功能。首先人源性重组ChAT融合蛋白基因进行构建、克隆及表达，重组ChAT静脉注射给小鼠后能穿越血脑屏障并在中枢催化合成乙酰胆碱。重组ChAT静脉给予自然衰老认知障碍模型小鼠后，能显著地改善痴呆症状。

小鼠胆碱乙酰基转移酶慢病毒载体的构建及其在RAW264.7细胞中的表达

目的:构建胆碱乙酰基转移酶(ChAT)过表达的慢病毒载体,转染小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7,上调细胞中ChAT表达。方法:利用PCR方法从小鼠cDNA文库中调取ChAT基因,克隆至pGC-FU慢病毒载体上,经PCR和测序鉴定。用pGC-FU ChAT质粒转染RAW264.7后,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,real-time PCR检测RAW264.7细胞中ChAT基因表达丰度。结果:融合表达GFP的慢病毒载体pGC-FU-ChAT感染RAW264.7细胞的效率可达80%以上,感染细胞ChAT基因表达大幅上调。结论:成功构建了携带ChAT基因的慢病毒载体,能有效感染RAW264.7细胞,细胞中ChAT基因过表达。

穴位电针刺激对周围性面神经损伤兔面神经核中脑源性神经营养因子和胆碱乙酰转移酶的调节

目的:观察穴位电刺激对面神经损伤兔面神经核中脑源性神经营养因子、胆碱乙酰转移酶的影响,揭示针刺促进损伤面神经再生修复的作用途径。方法:实验于2005-03/2005-09在黑龙江中医药大学解剖教研室完成。①选用日本大耳白兔120只,雌雄各半,6～8月龄。随机将兔分为5组,每组24只:假手术组、模型组、西药组、传统针刺组、电针刺激组,每组再分为术后7,14,21,28d4个时间点进行观察。②应用神经卡压法造成周围性面神经损伤模型。假手术组:切开左侧面部皮肤后缝合。模型组:造模后不给任何处置。西药组:造模术后第1天每只给予维生素B110mg/d,维生素B1250μg加地塞米松肌肉注射。地塞米松用量从每只2mg/d开始,以后每隔7d减为半量。传统针刺组:造模后第1天开始用0.25mm×40mm毫针针刺术侧穴位:翳风直刺1.0cm,颧骨谬直刺0.3cm,地仓直刺0.5cm,颊车直刺0.5cm,四白向下平刺0.5cm、阳白向下平刺0.5cm,每10min捻转1次,留针30min,每针刺治疗5d,休息2d。电针刺激组:从造模后第1天开始取术侧穴位电针刺激,穴位位置、进针角度及进针深度同传统针刺组,翳风(阴极)与颊车(阳极)、地仓(阴极)与四白(阳极)连接全能脉冲电疗仪,频率为1～100Hz,电压2V,疏密波刺激,治疗30min/d,每针刺治疗5d,休息2d。各组均干预28d。③手术后7,14,21,28d,取兔左侧脑干组织,固定,石蜡包埋,切片。采用内氏染色的方法,光镜下观察面神经核中神经元形态的改变。按SP试剂盒操作说明,用免疫组织化学方法对神经元进行染色,每张片显微镜下计数5个固定点高倍(10×40)视野下面神经核脑源性神经营养因子和胆碱乙酰转移酶表达阳性细胞数。组间计量资料差异比较采用方差分析。结果:大耳白兔120只均进入结果分析。①面神经核中内氏体:随治疗时间延长,西药组、传统针刺组、电针刺激组均有不同程度增多,其中电针刺激组增多最明显,但这3组仍少于假手术组。②面神经核脑源性神经营养因子阳性神经元数:术后7,14,21,28d电针刺激组均明显多于其他4组(P<0.01);西药组、传统针刺组、电针刺激组均有随治疗时间延长逐渐增多的趋势(P<0.01)。③面神经核胆碱乙酰转移酶阳性神经元数:术后7,14,21,28d:电针刺激组均明显多于模型组、西药组、传统针刺组穴P<0.01雪鸦西药组、传统针刺组、电针刺激组均有随治疗时间延长逐渐增多的趋势穴P<0.05雪。结论:穴位电针刺激可调节面神经核脑源性神经营养因子、胆碱乙酰转移酶,对面神经神经核神经元具有一定的保护作用,对损伤面神经修复起促进作用。

条件免疫对胶原性关节炎大鼠烟碱样乙酰胆碱受体及胆碱乙酰转移酶表达的影响

目的建立条件免疫反应(CIR)模型,研究CIR状态下胶原性关节炎(CIA)大鼠烟碱样乙酰胆碱受体α7亚单位(nAChRα7)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)蛋白和mRNA表达,探讨CIR可能的胆碱能通路作用机制。方法将大鼠分为健康对照组和CIA模型组,模型组大鼠分为5组:CIR组;甲氨蝶呤(MTX)+泼尼松(Pred)治疗组;MTX+Pred治疗减量组;单纯闻樟脑气味组;空白对照组。用免疫组织化学方法和RT-PCR方法检测各组大鼠关节滑膜nAChRα7、ChAT蛋白和mRNA表达。结果免疫组织化学和RT-PCR均显示CIR组关节滑膜nAChRα7、ChAT蛋白和mRNA的表达明显均高于空白对照组(P均<0.01);空白对照组大鼠表达nAChRα7、ChAT明显低于健康对照组和CIR(P均<0.01),而MTX+Pred组、MTX+Pred减量组、单纯闻樟脑气味组均与空白对照组差异无显著性(P均>0.05)。结论CIR状态下nAChRα7、ChAT mRNA和蛋白表达水平增高,表明胆碱能抗炎通路在CIR治疗胶原性关节炎大鼠的作用机制中起重要作用。

缺血性脑血管病患者血浆卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性与其脂质代谢(英文)

背景:脂质代谢异常是缺血性脑血管病的危险因素之一。很多研究提出其与体内卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性变化有关。目的:观察缺血性脑血管病患者血浆卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性与红细胞膜脂质成分含量变化的关系。设计:病例对照(实验组对照,标准对照)。单位:一所大学医学院附属医院的检验科、急诊室及神经内科。对象:2002-03/2003-12青岛大学医学院附属医院急诊神经门诊就诊及住院的脑血管病患者105例,均符合第二届全国脑血管病会议的诊断标准,选择脑动脉硬化患者42例和脑梗死63例构成两个患者组,其中男67例,女38例。同期选择在本院健康查体者65例构成对照组,男36例,女29例。方法:采集参与者空腹血8mL,采用酶学方法检测血浆卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性和血清高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A1和载脂蛋白B水平,采用邻苯二甲醛-醋酸硫酸方法测定红细胞膜胆固醇含量,采用化学定量法测定红细胞膜磷脂含量。主要观察指标:患者组与对照组卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性变化及红细胞膜脂质成分含量的变化。结果:按意向分析处理,105例患者组和65例对照组全部进入结果分析。①卵磷脂-胆固醇酰基转移酶活性:脑动脉硬化组和脑梗死组活性变化均明显低于对照组犤(2.14±0.72)kat/L,(2.06±0.80)

卵巢切除大鼠不同脑区胆碱乙酰化转移酶阳性细胞表达的变化(英文)

目的 观察卵巢切除大鼠脑内不同部位胆碱乙酰化转移酶（CHAT）阳性细胞表达的变化，了解ChAT改变与轻度认知障碍（MCI）相关的可能机制。方法 成年健康雌性Wistar大鼠14只，应用SINGH法建立大鼠卵巢切除模型（模型组），对照组除不切除卵巢外，其余步骤同模型组。常规处死大鼠，取脑组织行ChAT免疫细胞化学染色，观察海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核等部位ChAT阳性细胞表达变化。结果 模型组与对照组比较脑内海马CA1区、大脑皮质区、杏仁复合体区、Meynert核区ChAT阳性细胞数明显减少（t=5．15～16．48，P〈0．01）。结论 雌激素下降可致大鼠脑内多部位ChAT阳性细胞表达减少，这种病理变化可能与MCI发病有关。

孕烯醇酮对老年大鼠记忆相关脑区胆碱乙酰转移酶表达的影响

目的观察孕烯醇酮对老年大鼠记忆相关脑区胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达的影响。方法雄性老年大鼠40只,随机分为空白组、溶剂组、小剂量孕烯醇酮组、大剂量孕烯醇酮组,每组10只。隔日腹腔注射1个月,通过免疫组织化学技术分别检测各组大鼠额叶、颞叶、海马皮质区ChAT表达情况。结果与空白组比较,大剂量孕烯醇酮组大鼠额叶、颞叶、海马皮质区ChAT免疫阳性细胞明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);而溶剂组和小剂量孕烯醇酮组ChAT阳性细胞数无明显增加,差异无统计学意义(P>0.05)。结论大剂量孕烯醇酮可以显著改善老年大鼠胆碱能系统活性。

卵磷脂胆固醇酰基转移酶基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的研究

目的探讨卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)基因511C/T多态性在中国汉族人群中的分布及其与动脉粥样硬化性脑梗死(ACI)的关系。方法应用PCR、单链构象多态性技术和DNA测序法检测ACI患者150例(ACI组)和健康体检者122例(对照组)LCAT511C/T多态性。根据基因多态性将ACI组分为2个亚组,511CC组(135例)和511CT组(15例)。结果LCAT第四外显子511位点存在多态现象,此多态位点C/T在ACI组和对照组均符合Hardy-Weinberg平衡定律。ACI组CT基因型频率、T等位基因频率均显著高于对照组(P<0.01)。511CC组HDL-C水平高于511CT组(P<0.05)。结论LCAT第四外显子511C/T多态性可能为中国汉族人群ACI易感因素,T等位基因可能与HDL-C代谢有关。

知母皂苷对AD模型大鼠学习记忆能力及磷酸化Tau蛋白和胆碱乙酰基转移酶表达的影响

目的:研究知母皂苷(SAa B)对Aβ1-42诱导的大鼠学习记忆障碍的改善作用及机制。方法:选用SD大鼠48只随机分为4组:正常对照组,Aβ1-42组,SAa B(1、2.5 mg/ml)+Aβ1-42组,每组12只,侧脑室注射给药后第2 d进行Morris水迷宫实验,第7d快速取海马CA1区,Western Blot法观察磷酸化tau(P-tau)、磷酸化GSK-3β、磷酸化Akt蛋白及胆碱乙酰基转移酶(Ch AT)蛋白表达水平。结果:脑室内注射Aβ1-42大鼠出现明显的空间学习记忆障碍,表现为逃避潜伏期和游泳路程较正常对照组明显延长,在原平台象限游泳时间占总时间的百分比明显降低,同时伴有海马P-tau表达明显增加,p-GSK-3β、p-Akt、Ch AT表达明显降低。侧脑室内注射SAa B后,与Aβ1-42组相比,SAa B(1、2.5 mg/ml)+Aβ1-42组大鼠逃避潜伏期和游泳路程明显缩短,原平台象限游泳时间占总游泳时间百分比升高;海马P-tau表达明显降低,p-GSK-3β、p-Akt、Ch AT表达明显增加。结论:侧脑室内注射知母皂苷可通过降低Ptau表达水平,提高Ch AT活性,从而减少神经元纤维缠结的形成,并可能通过调节胆碱能功能的途径发挥抗痴呆的作用。

川芎嗪对拟AD小鼠脑胆碱乙酰基转移酶和NMDA受体的影响

目的探讨川芎嗪(TMP)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠脑胆碱乙酰基转移酶(ChAT)和N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的影响。方法 56只小鼠随机分为五组:正常对照组(A组,10只)、D-半乳糖(D-gal)模型组(B组,10只)、TMP低、高剂量组(C、D组,各12只)和哈伯因阳性对照组(E组,12只)。Morris水迷宫测试学习记忆功能,同时进行大脑皮层、海马ChAT活性测定和NMDA受体结合试验。结果与A组相比,B组学习记忆能力和海马NMDA受体含量均下降(P<0.01);TMP可明显改善模型小鼠的学习记忆能力,增强皮层和海马ChAT活性,上调海马NMDA受体数目(P<0.05)。结论 TMP可明显提高模型小鼠的学习记忆功能,这可能与增强ChAT活性及保护NMDA受体有关。