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胆固醇对兔胆管成纤维细胞增生的影响 被引量:5
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作者 陈宝莹 魏经国 +6 位作者 王耀程 杨向新 钱济先 于军 陈志南 徐静 吴道澄 《世界华人消化杂志》 CAS 2002年第5期566-570,共5页
目的:研究胆固醇(CL)对兔胆管成纤维细胞增生的影响,并对其机制进行探讨。 方法:分离、纯化、培养兔胆管成纤维细胞,完全随机分为两组:对照组、中等浓度胆固醇组(0.6g/L)和高浓度胆固醇组(1.2g/L)。以MTT法测定各组细胞的增生情况、并... 目的:研究胆固醇(CL)对兔胆管成纤维细胞增生的影响,并对其机制进行探讨。 方法:分离、纯化、培养兔胆管成纤维细胞,完全随机分为两组:对照组、中等浓度胆固醇组(0.6g/L)和高浓度胆固醇组(1.2g/L)。以MTT法测定各组细胞的增生情况、并以流式细胞仪(FCM)测定细胞周期。进而采用免疫组化法定量分析各组细胞内增生细胞核抗原(PCNA)的表达情况。 结果:中等浓度CL(0.4~0.8g/L)可以使培养的兔胆管成纤维细胞MTT A_(490nm)值显著升高,CL(0.4g/L)A_(490nm值为0.422±0.015,较对照组增加51.4%(P<0.05);CL(0.6g/L)A_(490nm)值达到最大为0.486±0.019,较对照组增加95.2%(P<0.01);0.8g/L CL组A_(490nm)值为0.472±0.017较对照组增加89.6%(P<0.01);高浓度CL(1.2g/L)明显抑制细胞生长,A_(490nm)值为0.163±0.018,较对照组下降34.5%(P<0.05)。流式细胞仪分析显示,与正常组相比,中等浓度CL(0.6g/L)显著增加G_2/M期细胞比例,从9.8%上升为13.0%,S期细胞比例从11.7%上升为33.4%,而显著减少进入G_0/G_1期的细胞比例,从78.5%下降为53.6%。高浓度CL(1.2g/L)显著减少G_2/M期细胞比例,从9.8%降低为6.7%,S期细胞比例从11.7%下降为5.9%,而显著增加进入G_0/G_1期的细胞比例,从78.5%上升为87.4%。 展开更多
关键词 胆固醇 胆管成纤维细胞增生 影响 胆系疾病
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二甲双胍抑制大鼠胆管成纤维细胞胶原生成的分子信号机制 被引量:2
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作者 卢家美 张晶晶 +3 位作者 吕毅 王博 贾丽娜 师建华 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期640-646,共7页
目的探讨二甲双胍是否通过活化腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的大鼠胆管成纤维细胞胶原生成并揭示其分子信号机制。方法取雌雄各半的SD大鼠共50只(体质量150~200 g),CO2窒息法处死后,无菌条件下分离并培... 目的探讨二甲双胍是否通过活化腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的大鼠胆管成纤维细胞胶原生成并揭示其分子信号机制。方法取雌雄各半的SD大鼠共50只(体质量150~200 g),CO2窒息法处死后,无菌条件下分离并培养大鼠胆管成纤维细胞,倒置显微镜观察所培养的细胞,发现不同体质量及性别的大鼠所获取的细胞形态及活性无差异。采用随机数字表法进行随机分组,分别设置对照组、TGF-β1组、Smad3 siRNA干预组、结缔组织生长因子(CTGF)siRNA干预组、二甲双胍干预组、Compound C干预组,每组3个样本。设置对照组:大鼠胆管成纤维细胞正常培养;TGF-β1组:10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;Smad3 siRNA干预组:Smad3 siRNA转染24 h后+10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;CTGF siRNA干预组:CTGF siRNA转染24 h后+10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;二甲双胍干预组:10 mmol/L二甲双胍+10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;Compound C干预组:10μmol/L Compound C+10 mmol/L二甲双胍+10 ng/mL TGF-β1孵育细胞。以TGF-β1刺激大鼠胆管成纤维细胞分泌胶原,以Smad3 siRNA或CTGF siRNA转染细胞以抑制Smad3或CTGF蛋白的表达,以二甲双胍孵育细胞以激活AMPK,以Compound C预处理细胞以抑制AMPK的活性。采用ELISA或Western-blot的方法检测CTGF、胶原I(Col I)蛋白水平;Western-blot的方法检测p-Smad3/t-Smad3、p-AMPK/t-AMPK、CTGF水平。结果TGF-β1以时间和剂量依赖的方式刺激胆管成纤维细胞胶原I生成,二甲双胍激活的AMPK也剂量依赖性抑制TGF-β1诱导的胶原I生成;AMPK抑制剂Compound C预孵育细胞,可显著逆转二甲双胍激活的AMPK抑制胶原I生成的作用(P<0.01)。进一步发现,二甲双胍激活的AMPK对TGF-β1刺激的Smad3磷酸化无抑制作用,却可抑制其下游的CTGF蛋白表达(P<0.01)及胶原I生成(P<0.01),而AMPK抑制剂可逆转二甲双胍对CTGF及胶原I的上述作用。结论二甲双胍通过激活AMPK抑制TGF-β1/Smad3信号通路诱导的CTGF蛋白表达,进而抑制胆管成纤维细胞胶原I生成。 展开更多
关键词 转化生长因子-Β1 腺苷酸激活蛋白激酶 TGF-β1/Smad3信号通路 胆管成纤维细胞 胶原
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罗格列酮抑制PDGF诱导的胆管成纤维细胞增殖的分子机制
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作者 师建华 吕毅 +2 位作者 王博 贾丽娜 于良 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期356-361,共6页
目的探讨罗格列酮是否通过活化过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferators activated receptor-γ,PPAR-γ),抑制血小板衍生因子(platelet-derived growth factor,PDGF)刺激的胆管成纤维细胞增殖,并揭示其发挥作用的分子... 目的探讨罗格列酮是否通过活化过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferators activated receptor-γ,PPAR-γ),抑制血小板衍生因子(platelet-derived growth factor,PDGF)刺激的胆管成纤维细胞增殖,并揭示其发挥作用的分子信号机制。方法以PDGF-AA刺激原代分离并培养的大鼠胆管成纤维细胞增殖,罗格列酮干预并检测PPAR-γ活性。于PDGF-AA刺激细胞前2 h予以LY294002、GW9662抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶-B(phosphoinositide 3-kinase/protein kenase-B,PI3K/AKT)、PPAR-γ信号通路活性。采用Brdu-掺入法检测胆管成纤维细胞增殖;免疫印迹法检测S-期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,skp2)及磷酸化-AKT(p-AKT)的表达;PPAR-γ活性ELISA试剂盒检测PPAR-γ活性。结果PDGF-AA呈剂量依赖性刺激大鼠胆管原代成纤维细胞增殖;罗格列酮显著激活PPAR-γ并抑制PDGF诱导的细胞增殖;采用PPAR-γ抑制剂GW9662预刺激细胞,可逆转罗格列酮对细胞增殖的抑制作用。罗格列酮激活的PPAR-γ通过抑制PDGF刺激的AKT磷酸化、skp2表达而抑制细胞增殖,通过抑制PPAR-γ活性(GW9662刺激细胞)可显著逆转罗格列酮的上述作用。结论罗格列酮通过激活PPAR-γ,抑制PDGF诱导的AKT磷酸化及skp2表达,从而抑制胆管成纤维细胞增殖。 展开更多
关键词 PDGF PPAR-Γ PI3K/AKT信号通路 胆管成纤维细胞 细胞增殖
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紫杉醇-壳聚糖缓释膜对胆管成纤维细胞增殖的抑制作用
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作者 宋飞 向盈盈 张小文 《中国生化药物杂志》 CAS 北大核心 2014年第2期3-6,9,共4页
目的探讨紫杉醇-壳聚糖缓释膜(PTX-Chitosan Sustain film,PTX-CSF)对胆管成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法采用组织块法进行成纤维细胞的原代单细胞培养。将实验分为5组:未处理组,单纯PTX处理组(250nM)和低、中、高壳聚糖PTX缓释膜处... 目的探讨紫杉醇-壳聚糖缓释膜(PTX-Chitosan Sustain film,PTX-CSF)对胆管成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法采用组织块法进行成纤维细胞的原代单细胞培养。将实验分为5组:未处理组,单纯PTX处理组(250nM)和低、中、高壳聚糖PTX缓释膜处理组(100nM、250nM、500nM)。使用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测细胞的增殖情况,划痕实验检测紫杉醇对TGF-β1诱导细胞迁移的抑制作用,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞的凋亡及细胞周期。结果紫杉醇-壳聚糖缓释膜能有效抑制胆管成纤维细胞的增殖,具有剂量和时间依赖性。其抑制作明显强于单纯的紫杉醇用药,且随着时间的延长,优势逐渐体现。紫杉醇-壳聚糖缓释膜能有效抑制TGF-β1对胆管成纤维细胞的促迁移作用,较单纯PTX组具有更长的时间效应。72h时,紫杉醇-壳聚糖缓释膜组成纤维细胞的凋亡率显著高于单纯PTX组和对照组(P<0.05),后2者之间无统计学差异。72h时,紫杉醇-缓释膜组和单纯PTX组的G2/M期细胞比例均较未处理组显著增加,2者相比,前者也明显高于后者,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论紫杉醇-壳聚糖缓释膜具有较强的细胞毒性作用及明显的缓释效果,可以维持较长时间的有效浓度,从而较单纯紫杉醇用药更能持续地抑制胆管成纤维的增殖。 展开更多
关键词 紫杉醇-壳聚糖缓释膜 胆管成纤维细胞 增殖 细胞凋亡
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5-FU对人良性胆管瘢痕成纤维细胞作用的实验研究 被引量:2
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作者 贺伟 张小文 +3 位作者 邹浩 高瑞刚 李奎 刘飞 《中国现代普通外科进展》 CAS 2016年第2期85-89,共5页
目的:研究5-FU对体外培养的人良性胆管瘢痕成纤维细胞的作用及其机制。方法:MTT法根据半数抑制浓度(IC50)确定5-FU作用人良性胆管瘢痕成纤维细胞的最适干预浓度,流式细胞仪(AnnexinⅤ-PI)测定其诱导该细胞的凋亡情况,免疫荧光细胞化学... 目的:研究5-FU对体外培养的人良性胆管瘢痕成纤维细胞的作用及其机制。方法:MTT法根据半数抑制浓度(IC50)确定5-FU作用人良性胆管瘢痕成纤维细胞的最适干预浓度,流式细胞仪(AnnexinⅤ-PI)测定其诱导该细胞的凋亡情况,免疫荧光细胞化学法测定其作用该细胞后TGF-β1、a-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达的情况。结果:5-FU作用人良性胆管瘢痕成纤维细胞72 h后,其抑制率为50%的浓度为6.25g/L;干预后,该细胞生长受到抑制并出现凋亡明显增加(P<0.05);免疫荧光化学法测定成纤维细胞TGF-β1、a-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达均低于空白对照组(P<0.05)。结论:5-FU可抑制人胆管瘢痕成纤维细胞的生长并促进其凋亡;下调该细胞中TGF-β1、a-SMA、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达而控制胆管组织纤维化。 展开更多
关键词 5-FU 胆管瘢痕纤维细胞 TGF-Β1 A-SMA Ⅰ型胶原蛋白 Ⅲ型胶原蛋白
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A study on the expressions and the correlation of TGF-β1 and α-SMA in healing process of bile duct trauma
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作者 徐军 耿智敏 马清涌 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2003年第3期179-182,共4页
Objective: To explore the formation mechanism of benign biliary stricture. Methods: A model of trauma of common bile duct was established in 28 dogs and then repaired. The anasomosis tissues were taken on the 1st week... Objective: To explore the formation mechanism of benign biliary stricture. Methods: A model of trauma of common bile duct was established in 28 dogs and then repaired. The anasomosis tissues were taken on the 1st week, 3rd week and the 3rd month, 6th month respectively after operation and examined by using light microscopy and elec-tromicroscopy. Macrophage, TGF-p, and a-SMA were studied immunohistochemically. Results: The mucosal epithelium of common bile duct restored poorly, chronic inflammation lasted for a long time, fibroblasts proliferated actively, extracellular matrix overdeposited; and myofibroblasts functioned actively and existed during the whole healing process. Immunohistochemical test showed a high expression of macrophage, TGF-β1 and a-SMA during healing process lasting a long duration. Macrophages were found in the lamina propria under mucosa, TGF-β1 in the granulation tissue, fibroblasts and endothelial cells of blood vesssels, while a-SMA in the myofiroblasts and smooth muscle tissue. Conclusion: The healing of bile duct is in the mode of overhealing. Myofibroblast is the main cause for contracture of scar and stricture of bile duct. The high expression of macrophage, TGF-β1 and a-SMA is closely related to active proliferation of fibroblasts, extracelluar matrix overdeposition and scar contracture of bile duct. 展开更多
关键词 bile duct trauma STENOSIS wound healing MYOFIBROBLASTS TGF-β1 α-SMA
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核因子-κB在滇南小耳猪胆道损伤修复模型中表达的研究
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作者 胡平海 李立 《中国实用外科杂志》 CSCD 北大核心 2011年第S1期26-28,共3页
目的分析核因子-κB(nuclear factor,NF-κB)及其下游抗凋亡caspase-8同源结构FLICE抑制蛋白(cFLIP)在胆道瘢痕中的表达情况。方法建立滇南小耳猪胆道损伤修复模型并建立对照组。用免疫组化分析NF-κB及cFLIP的表达范围及强度。结果和... 目的分析核因子-κB(nuclear factor,NF-κB)及其下游抗凋亡caspase-8同源结构FLICE抑制蛋白(cFLIP)在胆道瘢痕中的表达情况。方法建立滇南小耳猪胆道损伤修复模型并建立对照组。用免疫组化分析NF-κB及cFLIP的表达范围及强度。结果和对照组相比,胆道瘢痕组织中NF-κB及cFLIP表达的范围更广,强度更强,更多的集中于成纤维细胞中,且两者表现出正相关关系。结论胆道损伤后NF-κB激活增加并导致cFLIP蛋白过表达,可能导致胆道成纤维细胞凋亡减少,从而导致胆道瘢痕的形成。 展开更多
关键词 细胞核因子(NF-κB) caspase-8同源结构FLICE抑制蛋白(cFLIP) 胆管成纤维细胞
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