LncRNA SOX2OT靶向SIRT1/自噬通路增强胆管癌细胞5-FU耐药

目的探讨LncRNASOX2OT靶向SIRT1/自噬通路调节胆管癌细胞5-FU耐药的机制。方法将未用5-FU处理HCCC-9810细胞和不同浓度(50、100、150、200μg/mL)5-FU处理的HCCC-9810细胞分为对照组和模型组,qRT-PCR检测LncRNA SOX2OT、SIRT1 mRNA表达水平,Western blot检测SIRT1、Beclin1、LC3和p62蛋白表达。pcDNA3.1-SOX2OT和pcDNA3.1-NC转染HCCC-9810/5-FU耐药细胞,CCK-8检测细胞耐药性,划痕实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR检测LncRNASOX2OT、SIRT1 mRNA表达水平,Western blot检测SIRT1、Beclin1、LC3和p62表达。在以上基础上做了Rescue实验,将OV-SOX2OT(2μg/孔)和si-NC(75pmol/孔)、OV-SOX2OT(2μg/孔)和si-SIRT1(75pmol/孔)分别共转染HCCC-9810/5-FU耐药细胞,分组为OV-SOX2OT+si-NC组和OV-SOX2OT+si-SIRT1组,以证明LncRNASOX2OT通过SIRT1影响自噬,并由此影响胆管癌细胞对5-FU的耐药性。RNAPulldown验证SOX2OT与SIRT1的靶向结合关系。结果不同浓度的5-FU均能抑制HCCC-9810细胞增殖(P<0.05)。与对照组相比,模型组SIRT1、Beclin1(P<0.001)和p62(P<0.01)蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值(P<0.001)、SIRT1和LncRNA SOX2OT mRNA水平(P<0.05)均明显增加。与OV-NC组相比,OV-SOX2OT组细胞迁移能力、SIRT1、Beclin1(P<0.001)和p62(P<0.05)蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值(P<0.001)、SIRT1和LncRNASOX2OTmRNA(P<0.05)水平均明显增加。沉默SIRT1表达导致LncRNASOX2OT过表达的HCCC-9810细胞对5-FU的耐药性显著降低。与OV-SOX2OT+si-NC组相比,OV-SOX2OT+si-SIRT1组SIRT1(P<0.001)、p62和Beclin1(P<0.01)蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值(P<0.01)、SIRT1 mRNA(P<0.05)水平均明显降低。RNA Pulldown检测结果显示SOX2OT能够直接与SIRT1结合。结论LncRNA SOX2OT通过上调SIRT1表达促进自噬来增强胆管癌HCCC-9810细胞5-FU耐药性。

沉默SIRT1降低胆管癌细胞对5-氟尿嘧啶的耐药:基于抑制FOXO1/Rab7自噬通路

目的探讨SIRT1靶向FOXO1/Rab7自噬通路调节胆管癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的机制。方法不同浓度(50、100、150、200μg/mL)的5-FU处理HCCC-9810细胞构建HCCC-9810/5-FU耐药细胞模型,免疫荧光检测细胞中SIRT1表达情况,Western blot和q-PCR检测SIRT1、FOXO1、Rab7表达水平,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62表达水平。SIRT1 siRNA和NC siRNA转染HCCC-9810/5-FU耐药细胞,CCK-8检测细胞耐药性,划痕实验检测细胞迁移能力,RT-qPCR检测FOXO1、Rab7 mRNA水平,Western blot检测SIRT1、FOXO1、Rab7、Beclin1、LC3、p62蛋白表达水平。结果不同浓度(50、100、150、200μg/mL)的5-FU均能抑制HCCC-9810细胞增殖。与对照组相比,HCCC-9810/5-FU耐药细胞中SIRT1荧光强度略有增强;SIRT1、Rab7、p62、FOXO1和Beclin 1蛋白表达上调(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增加(P<0.001);SIRT1、Rab7和FOXO1 mRNA水平上调(P<0.05)。沉默SIRT1表达后,HCCC-9810细胞的5-FU耐药性降低,细胞迁移能力降低,SIRT1(P<0.01)、Rab7(P<0.05)、p62(P<0.05)、FOXO1(P<0.01)和Beclin1(P<0.001)蛋白表达降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.001);FOXO1和Rab7 mRNA水平降低(P<0.05)。结论沉默SIRT1的表达抑制FOXO1/Rab7自噬通路激活。

康莱特注射液对人胆管癌细胞RBE和HCCC9810生长、凋亡、迁移的影响

目的:探讨康莱特注射液对人胆管癌细胞RBE和HCCC9810生长、凋亡、迁移的影响。方法:使用康莱特注射液处理人胆管癌细胞RBE和HCCC9810,运用CCK-8法检测康莱特注射液对人胆管癌细胞RBE和HCCC9810的增殖情况,流式细胞仪检测两者的凋亡率,Transwell实验检测两者的迁移能力,通过Western Blot检测两者信号通路中关键蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达情况。结果:较之空白对照组,随着康莱特药物作用时间的延长,两者细胞的生长增殖程度逐渐受到抑制(P<0.05),在作用96 h时达到较好抑制状态;Transwell实验结果显示,人胆管癌细胞RBE和HCCC9810经康莱特处理后迁移数量减少(P<0.05);实验组人胆管癌细胞RBE和HCCC9810凋亡率明显增加(P<0.05),两者信号通路中关键蛋白Caspase-3、Bax蛋白表达明显上调(P<0.05),Bcl-2蛋白表达下调(P<0.05)。结论:康莱特注射液可以抑制人胆管癌细胞RBE和HCCC9810的生长和迁移能力,促进其凋亡,机制可能与其能上调凋亡信号通路关键蛋白Caspase-3、Bax和下调Bcl-2蛋白表达有关。

STAT3对人肝内胆管癌细胞系增殖与凋亡的影响

目的探讨STAT3在人肝内胆管癌细胞系增殖与凋亡中的作用及其机制。方法采用Western blot法和Real-time PCR法检测人肝内胆管癌细胞系RBE、9810(肝内组)、人肝外胆管癌细胞系QBC939、SSP-25、KMBC(肝外组)STAT3蛋白和STAT3 mRNA表达水平;将肝内组细胞分为干扰组和对照1组,细胞内分别瞬时转染干扰STAT3表达的腺病毒和对照腺病毒各5μL,干预48 h;另将肝内组细胞分为过表达组和对照2组,细胞内分别瞬时转染过表达STAT3的腺病毒及对照腺病毒5μL,干预48 h。分别采用CCK8法检测各组细胞增殖情况,采用PIAnnexin V法检测细胞的凋亡情况。结果肝内组STAT3蛋白及STAT3 mRNA表达水平均高于肝外组,P均<0.05。干扰组RBE、9810细胞增殖能力均低于对照1组,细胞凋亡率均明显高于对照1组,P均<0.05。过表达组RBE、9810细胞增殖能力高于对照2组,细胞凋亡率明显低于对照2组,P均<0.05。结论 STAT3在促进肝内胆管癌细胞增殖、抵抗细胞凋亡中发挥重要作用。

蟾蜍灵对人胆管癌细胞QBC939增殖及cyclin E和P27蛋白表达影响的研究

目的已有诸多研究显示中药蟾蜍灵具有明显抑制肿瘤增殖的作用,观察蟾蜍灵对人胆管癌细胞QBC939的cyclin E和P27表达的影响,探讨其调控胆管癌细胞增殖的途径和机制。方法 MTT比色法观察不同浓度蟾蜍灵(0.1、1、10μmol/L)对人胆管癌细胞QBC939增殖的影响;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)实验检测蟾蜍灵毒性;流式细胞术检测人胆管癌细胞QBC939细胞周期的变化;Western blot法测定cyclin E、P27蛋白水平变化。结果 MTT比色法结果表明蟾蜍灵对人胆管癌细胞QBC939生长具有较强的抑制作用,并在一定范围内具有时间和浓度依赖性,流式细胞仪检测细胞周期阻滞在G0/G1期,具有良好的量效关系。Western blot测定cyclin E蛋白表达量下降,P27蛋白表达量升高。结论蟾蜍灵可能是通过阻滞细胞周期,减少cyclinE蛋白表达,增加P27蛋白表达,来达到抗肿瘤作用。

5-氮-2′-脱氧胞苷对胆管癌细胞株生长周期及凋亡的影响

目的 研究甲基化抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷对胆管癌细胞株生长周期及凋亡的影响,初步探讨其应用于临床治疗的可能性。方法 应用MTT法检测不同浓度的5-氮-2’-脱氧胞苷对胆管癌细胞株QBC939存活率的影响,应用流式细胞术检测5-氮-2’-脱氧胞苷对QBC939细胞生长周期及凋亡率的影响。结果 5-氮-2’-脱氧胞苷在浓度为0.5μmol/L时即可以抑制胆管癌细胞QBC939的增殖,24 h半数致死量为5.0 μmol/L,细胞周期中处于G0/G1期的细胞比例增多,凋亡的发生率增高,而且以上作用与药物浓度及作用时间在一定范围内呈正相关。结论 5-氮-2’-脱氧胞苷可能通过消除某些抑癌基因的启动子甲基化状态,使其重新表达而抑制胆管癌细胞的生长,并促进其凋亡。

丙型肝炎病毒核心蛋白对胆管癌细胞NFAT1基因表达的影响

目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV C)是否通过调控转录因子NFAT1的表达参与肝内胆管癌的发展及恶性生物学行为。方法构建表达HCV C核心蛋白的真核表达质粒pEGFP-N3-HCV C,通过瞬时转染pEGFP-N3-HCV C质粒,RT-PCR检测肝内胆管癌RBE细胞中NFAT1 mRNA的表达情况,Western blot检测NFAT1蛋白的表达情况,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期变化情况。结果转染HCV C后胆管癌细胞NFAT1基因的mRNA及蛋白表达明显上升,差异具有显著性(P<0.05);HCV C能够促进细胞向G2/M期进展及使细胞增殖能力增加。结论 HCV C可上调胆管癌细胞中NFAT1基因的表达,促进细胞周期进展及胆管癌细胞增殖,可能与肝内胆管癌的发展有关。

LPS通过p38/MAPK调控胆管癌细胞系ICBD的上皮间质转化

目的:探讨脂多糖(lipopolysacoharides,LPS)对胆管癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)的影响和可能机制.方法:将胆管癌ICBD细胞分为4组:正常对照组、LPS诱导实验组(终浓度10g/mL)、LPS+siRNA转染组和LPS+SB-203580诱导实验组.应用Real-time RT-PCR与Westernb l o t法检测上皮细胞表面标志E-钙黏蛋白(E-cadherin)和间质细胞表面标志波形蛋白(Vimentin)的表达变化以及Toll样受体4(Toll-like receptors4,TLR4)和p38的表达变化.结果:LPS促进胆管癌细胞系ICBD的EMT发生;ICBD细胞的EMT过程伴随TLR4、p38表达增加;应用siRNA阻断TLR4后,ICBD细胞的EMT消失,LPS导致p38的上调表达作用也消失;应用SB-203580阻断p38后,与正常对照组相比,TLR4的表达增加,与LPS诱导实验组相比无明显变化,但ICBD细胞的EMT消失.结论:LPS可以激活TLR4,并通过p38/MAPK促进胆管癌细胞ICBD的上皮间质转化.

平消胶囊对胆管癌细胞生长及CD44v6蛋白表达的影响

目的通过观察平消胶囊(郁金、马钱子粉、仙鹤草、五灵脂、白矾、硝石、干漆、枳壳)血清作用于人肝外胆管癌细胞QBC939后,对癌细胞的生长和转移的影响,探讨其抗癌及转移机制。方法将平消胶囊灌喂大鼠,制备含药血清,血清培养胆管癌细胞,MTT法检测不同剂量含药血清对人胆管癌细胞QBC939的生长抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期、细胞膜上黏附分子CD44v6表达的变化。结果平消胶囊血清能明显抑制人肝外胆管癌细胞QBC939的增殖,具有时间、剂量依赖关系。药物作用后,QBC939细胞生长受阻于G0/G1期,并且黏附分子CD44v6在细胞膜上表达下调,剂量越大,CD44v6下调越明显。结论平消胶囊能有效地抑制QBC939细胞增殖,通过影响细胞生长、诱导细胞膜上黏附分子CD44v6表达下调,导致细胞凋亡,防止癌细胞转移。

切割bcl-2mRNA核酶诱导人胆管癌细胞凋亡的形态学改变

目的 研究切割 bcl- 2 m RNA核酶诱导人胆管癌细胞凋亡的形态学改变 .方法 将合成的切割 bcl- 2 m RNA核酶基因与真核细胞表达载体重组 ,并用重组后的载体转染人胆管癌细胞 ,通过光镜及扫描和透射电镜手段 ,观察转染后的胆管癌细胞凋亡的形态学改变 .结果 转染切割 bcl- 2 m R-NA核酶基因的胆管癌细胞出现较典型的凋亡形态学改变 .结论 该切割 bcl- 2 m RNA核酶能明显降低胆管癌细胞内bcl-

反义调控DNA甲基转移酶3b基因对人胆管癌细胞QBC939生长的影响

目的观察转染反义DNMT3 b基因真核表达质粒对人胆管癌细胞QBC 9 3 9生长的影响,初步探讨DNMT3 b基因在胆管癌发生中的作用。方法构建反义DNMT3 b基因真核表达质粒,用脂质体介导法将其转入人胆管癌细胞株QBC 9 3 9;W estern blot检测转染前后DNMT3 b蛋白表达的变化;MTT法和软琼脂克隆形成试验观察细胞的生长增殖能力;流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化。结果转染反义基因能使DNMT3 b蛋白表达水平降低;转染反义DNMT3 b基因不能抑制QBC939的生长曲线,对其软琼脂克隆形成率亦无影响(P=0.7 1 7);转染反义DNMT3 b基因不能改变QBC 9 3 9的细胞周期和促进细胞凋亡(P=0.0 8 9)。结论转染反义DNMT3 b基因真核表达质粒可下调DNMT3 b在QBC 9 3 9细胞中的表达水平,但对QBC 9 3 9的生长和增殖无影响,也不能改变QBC 9 3 9的细胞周期和促进细胞凋亡的发生。

siRNA对胆管癌细胞自分泌运动因子表达的影响

目的研究针对自分泌运动因子(autotaxin,ATX)的小干扰RNA(siRNA)对人胆管癌细胞ATX基因表达的影响,探讨RNA干扰技术治疗胆管癌的前景。方法参考人黑色素瘤ENPP2基因序列,设计合成ATX-siRNA及随机阴性对照。在阳离子脂质体的介导下转染人胆管癌细胞HCCC-9810。分别于转染后24,48,72h收集细胞,用半定量RT-PCR方法检测转染后ATXmRNA表达的变化,并与对照组及ATX表达抑制剂IL-1β的作用进行比较。结果体外合成的siRNA在转染胆管癌细胞24h后ATXmRNA的表达降低,48h抑制作用最为明显,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01),并明显强于IL-1β(P<0.01)。结论siRNA可有效地抑制胆管癌细胞ATX的表达,从而有可能阻断ATX对肿瘤细胞运动的促进作用。

丹参酮ⅡA对人胆管癌细胞Survivin表达的影响及意义

目的体外实验研究丹参酮ⅡA对人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810 Survivin基因的影响并探讨其与胆管癌细胞凋亡之间的关系。方法分别采用(0～10μg/ml)的丹参酮ⅡA作用人肝内胆管癌细胞72h后,通过反转录聚合酶链反应(reverse transcript polymerase chain reaction,PT-PCR)检测Survivin mRNA水平,采用蛋白质免疫印记法测定Survivin蛋白表达变化,通过MTT比色法观察其对细胞抑制影响,流式细胞仪行胆管癌凋亡测定。结果与对照组相比,丹参酮ⅡA以剂量依赖的方式抑制胆管癌细胞的生长,1～10μg/ml丹参酮ⅡA作用72h后,Survivin mRNA水平均受到显著抑制(P<0.05),5μg/ml以上剂量组抑制具有显著统计学差异(P<0.01)。结论在体外丹参酮ⅡA能够抑制人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810 Survivin的表达,这可能是丹参酮ⅡA抑制其生长的机制之一。

凋亡素基因转染对人胆管癌细胞凋亡作用的研究

目的探讨凋亡素对人胆管癌细胞凋亡的影响。方法以PCR方法获得凋亡素基因,然后运用T4连接酶将凋亡素基因和含荧光蛋白基因的质粒pAdtrack-CMV连接,通过酶切和测序证实成功构建重组质粒。再以DOTAP脂质体介导凋亡素基因转染人胆管癌细胞株QBC939。通过TUNEL染色证实凋亡素能否导致人胆管癌细胞的凋亡。结果酶切和测序均证实了成功构建含凋亡素基因和荧光蛋白基因的重组质粒。TUNEL染色显示凋亡素基因的转染引发人胆管癌细胞株QBC939的凋亡率与对照组相比具有非常显著的差异(P<0.01)。结论凋亡素能诱导培养的人胆管癌细胞的凋亡,在胆管癌的基因治疗上有深入研究的价值。

丹参酮ⅡA抑制人胆管癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究

目的体外实验研究丹参酮ⅡA对人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810的生长抑制及诱导凋亡作用。方法分别采用(0～10μg/ml)的丹参酮ⅡA作用人肝内胆管癌细胞72h后,通过MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、投射电镜检测细胞凋亡;流式细胞术(FCM)定量检测5μg/ml丹参酮ⅡA作用不同时间后的细胞凋亡率。结果丹参酮ⅡA以剂量依赖的方式抑制胆管癌细胞的生长。1～10μg/ml丹参酮ⅡA作用72h后,胆管癌细胞出现细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂以及凋亡小体出现等特征性的形态学改变。5μg/ml浓度作用12、24、36、48、72h后的细胞凋亡率分别为(2.31±0.15)%、(3.02±0.36)%、(3.86±0.44)%,(6.75±0.60)%和(20.62±1.76)%与对照组(1.08±0.14)%比较均具有显著差异。结论在体外丹参酮ⅡA能够诱导人肝内胆管癌细胞株HCCC-9810凋亡,这可能是丹参酮ⅡA抑制其生长的机制。

PTEN基因转染联合奥沙利对胆管癌细胞生长的影响

目的：观察脂质体介导PTEN基因转染人胆管癌细胞（QBC939），联合化疗药物奥沙利铂（L—OHP）对胆管癌细胞生长的影响，探索人类胆管癌的生物治疗方法。方法：将携带PTEN基因的真核表达载体pBP-PTEN和不含该基因的空载体转染胆管癌QBC939细胞，嘌呤霉素抗性筛选克隆、扩增培养，S-P免疫组化法检测转染前后PTEN阳性表达率。实验分组为QBC939、QBC＋L-OHP、PTEN-QBC和PTEN＋L-OHP 4组，以MTT法检测癌细胞生长活性，透射电镜扫描观察转染前后及联合奥沙利铂后细胞的超微结构变化，流式细胞仪分析转染前后细胞周期变化和凋亡情况，体外细胞侵袭力抑制试验观察转染及用药前后细胞侵袭力的变化。结果：PTEN基因转染后QBC939细胞稳定表达、PTEN阳性表达率升高（P＜0．05）；基因转染后肿瘤细胞活性下降（P＜0．05）；细胞周期G1～S期抑制、细胞凋亡率增加（P＜0．01）；透射电镜下显示细胞较成熟、分化好、线粒体增多；细胞侵袭力明显抑制（P＜0．05），其中以PTEN＋L-OHP抑制作用最强，L-OHP抑制作用次之。结论：PTEN基因转染生物治疗联合奥沙利铂化疗对人胆管癌细胞生长具有显著的抑制作用。

KAI1基因外源性过表达对胆管癌细胞层黏素受体的影响

目的研究KAI1基因外源性过表达对胆管癌细胞层黏素受体(LNR)表达的影响。方法体外培养人胆管癌QBC939细胞,分为两组:转染空载体pIRES2-EGFP对照组和转染重组真核载体pIRES2-EGFP-KAI1实验组。采用脂质体转染法分别将空载体和重组真核载体转染到QBC939细胞,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株。通过RT-PCR、Western blotting和细胞免疫组化法,分别检测KAI1、LNR的mRNA及蛋白表达水平。结果实验组的KAI1 mRNA、蛋白表达量(分别为0.49±0.071、.06±0.05)均显著高于对照组(分别为0.22±0.02、0.59±0.02,P<0.01);实验组的LNR mRNA、蛋白表达量(分别为0.38±0.04、0.29±0.03)均显著低于对照组(分别为0.73±0.05、0.68±0.02,P<0.05)。与对照组比较,实验组KAI1蛋白在胞质的着色明显增强、LNR着色减弱。结论体外胆管癌QBC939细胞过表达KAI1可导致LNR mRNA和蛋白表达下调。

p16对人胆管癌细胞增殖影响及其机制的研究

目的:通过构建稳定高表达抑癌基因p16的人胆管癌细胞模型,研究p16对胆管癌细胞增殖的影响及其相关机制。方法:将抑癌基因p16的cDNA构建到高效真核表达的质粒载体pcDNA3-neo中的EcoRⅠ/XbaⅠ位点,构建成p16真核表达质粒pcDNA3p16;通过脂质体法将pcDNA3p16质粒转染人胆管癌细胞系QBC939,经G-418筛选,获得稳定高表达p16的人胆管癌细胞模型。用MTT法测定细胞生长曲线,并测定细胞克隆形成能力,用流式细胞光度术测定细胞周期。用Western分子杂交分析癌基因c-myc的蛋白表达水平。结果:与对照组相比,p16高表达的人胆管癌细胞QBC939的增殖受到明显抑制;流式细胞光度术表明p16的高表达导致了较为明显的G1期阻滞作用,但对细胞周期的其他时相并无影响;Western免疫印迹分析结果表明癌基因c-myc的蛋白水平表达下降。结论:抑癌基因p16下调癌基因c-myc的表达是p16抑制细胞增殖的分子机制之一。

腺病毒介导凋亡素基因转染对人胆管癌细胞Bcl-2蛋白表达的影响

目的:初步探讨在凋亡素基因转染引发人胆管癌细胞凋亡的同时对Bcl-2蛋白的影响。方法:采用含凋亡素基因的重组腺癌毒感染人胆管癌细胞株QBC939,通过光镜、荧光观察其凋亡情况,在感染后7d收集细胞,采用Western-blot检测其Bcl-2蛋白情况。结果:含凋亡素基因的重组腺病毒感染胆管癌细胞株QBC9397d后其Bcl-2蛋白的表达较空病毒组和空白对照组明显降低。结论:凋亡素基因在诱导人胆管癌细胞凋亡时会导致Bcl-2蛋白的降低,可能有助于凋亡素的作用。

真核表达载体pIRES2-EGFP-KAI1的构建及其在胆管癌细胞的表达

目的构建真核表达载体pIRES2-EGFP-KAI1,并在胆管癌细胞系QBC939中进行表达。方法采用RT-PCR法从人胆管组织中克隆KAI1基因,连接T载体并测序正确后与真核表达载体pIRES2-EGFP连接,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切鉴定后通过脂质体法转染QBC939细胞中,用荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,用免疫组化染色的方法检测细胞中KAI1的表达。结果成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-KAI1,用脂质体法转染胆管癌细胞QBC939后,经荧光显微镜和免疫组化染色法检测可见细胞内有EGFP及KAI1的表达。结论真核表达载体pIRES2-EGFP-KAI1构建成功并在胆管癌细胞QBC939中得到稳定表达,为研究KAI1对肿瘤的生物学作用以及KAI1在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。