胆红素氧化酶产酶菌株的分离及最佳产酶条件的研究

胆红素是铁卟啉化合物在人体内的代谢产物之一,主要来源于衰老红细胞崩解后的血红蛋白,随胆汁排泄。凡能引起胆红素的生成过多或使肝细胞对胆红紊的摄取、结合、排泄过程发生障碍的因素,都可使血中胆红素浓度增高,出现高胆红素血症。因此,测定血中胆红素水平对临床诊断肝胆疾病,溶血等有着重要的意义。

露湿漆斑菌胆红素氧化酶的分离纯化及其性质

露湿漆斑菌产生的胆红素氧化酶粗酶液通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-100纯化,得到纯化152.54倍胆红素氧化酶,得率19.14%;用PAGE检测为单一条带,活性电泳证实该单一蛋白质组分为胆红素氧化酶,SDS-PAGE证明该酶的相对分子质量为64000。该酶最适反应温度为55℃,以胆红素为底物时最适pH值为7.5,而以ABTS为底物时最适pH值为4,该酶在pH 3-8之间都能够检测到酶活。以胆红素为底物,胆红素氧化酶的Km值和Vmax分别为552.06μmol/L和38.91μmol/（L.min）;而以ABTSA为底物,胆红素氧化酶的Km值和Vmax分别为631.84μmol/L和12.79μmol/（L.min）。

终止剂法测定胆红素氧化酶活性

以L-抗坏血酸(Vc)为终止剂改进的经典胆红素氧化酶(BOD)酶活测定方法.反应体系:0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液,含50 mmol/L甘露醇,pH 8.1,总体积3 mL,30μL胆红素贮存液,10μL酶液.25℃反应3 min,加入50μL 50 g/L的Vc,终止酶催化反应,440 nm测定光吸收.同时加入空白对照组.终止剂法只需一般的分光光度计,操作方便,数据重复性更高,可以同时测定多个样品.

产胆红素氧化酶菌种筛选

选出一株产胆红素氧化酶的菌种露湿漆斑菌—Myrotheciumr oriclum,简称MTR89—403。此菌产酶最适培养基:40—80％的马铃薯浸出液100ml、葡萄糖1g,pH6.0。培养条件:500ml三角瓶装100ml培养基,在27℃、200rpm旋转摇床培养84h,得到的最高酶活为1300u/L,比活为12.3u/mg蛋白。

用胆红素氧化酶消除胆红素对肌酐动力学法测定的影响

用胆红素氧化酶消除胆红素对肌酐动力学法测定的影响王忠诚（重庆市急救医疗中心检验科，四川重庆６３００１４）曾祝伦（重庆医科大学附二院检验科）碱性苦味酸动力学法测定肌酐时，高胆红素会导致结果明显偏低，甚至出现＂负值＂。目前，关于排除干扰的方法有ＳＤＳ、Ｔ...

胆红素氧化酶产生菌的选育及发酵工艺条件的研究

对胆红素氧化酶产生菌的菌和选育进行了研究。以科研室保藏菌种Mv9201为出发菌株，通过紫外线、硫酸二乙酯单独处理和复合诱变，从353株突变株中筛选出一株高产菌株MyrotheciumverrucariaMv9352，并对其产酶条件进行了研究。以20％的土豆汁（含0．25％的葡萄糖和蛋白胨）为发酵培养基，初始pH6～7，摇床转速为140～160r／min，24～26℃培养96h，酶活力可达4．0～4．5u／ml，比出发株的产酶能力提高近4．5倍。

1株产胆红素氧化酶新菌株的分离与鉴定研究

[目的]分离与鉴定1株产胆红素氧化酶的新菌株。[方法]利用常规的微生物分离培养技术,从玉米叶片的病斑中分离出一株产胆红素氧化酶(bilirubin oxidase,BOD)的丝状真菌。[结果]通过形态学、生理学和rDNA-ITS(登录号为JN251106)序列分析,该菌株被鉴定为Bipolaris australiensis,命名为B.australiensis HD-1,属子囊菌门格孢腔菌目格孢腔菌科平脐蠕孢属澳大利亚平脐蠕孢霉(B.australiensis),亦称澳洲双孢霉,是1株没有被报道过的具有产BOD的新产生菌;在不含任何诱导剂的发酵液中28℃,150 r/min,培养6 d,其酶活可达为1 000 U/L。[结论]该方法成功分离出1株产胆红素氧化酶的新菌株,为BOD的产生菌提供了新的微生物来源。

金属离子对漆斑菌产胆红素氧化酶的影响

比较了漆斑菌在8种液体培养基中胆红素氧化酶(BOX)产量,发现马铃薯液体培养基(PDB)是最适宜漆斑菌产BOX的培养基。研究了8种常见金属离子对漆斑菌产酶的影响,结果表明钠离子、铜离子可以明显促进BOX产量提高,铜离子效果最强,随着铜离子浓度增加,BOX酶产量可进一步提高,但高浓度的铜离子(1mmol.L-1)会抑制酶产量增加。

露湿漆斑菌胆红素氧化酶的鉴定

通过胆红素平板溶圈活性实验和聚丙烯酰胺活性电泳鉴定出露湿漆斑菌(MTR)为产胆红素氧化酶的菌株,通过活化菌种、摸索最佳发酵条件和加入诱导剂等方法来提高酶活,通过回收电泳、SDS-PAGE和等电聚焦初步分析得知酶的相对分子质量和等电点,为进一步的分离纯化奠定基础.

胆红素氧化酶的特性及应用研究综述

胆红素氧化酶(bilirubin oxidase,BOD)是多铜氧化酶家族的1个成员,因能催化胆红素为胆绿素而得名。随着对该酶研究的深入,发现它具有漆酶无法比拟的优点。本文从BOD的生物化学特性、酶的产生来源、在污染物降解、染料脱色等环境治理、生物燃料电池制备或胆红素传感器制备等领域中的应用作了较为详尽的综述。

耐高温重组CotA蛋白的胆红素氧化酶反应动力学及活性鉴定（英文）

已知源于枯草芽孢杆菌内生孢子的Cot A蛋白具有漆酶和胆红素氧化酶活性。然而,其分离纯化极为困难。本研究对表达与纯化的重组Cot A蛋白的胆红素氧化酶特性及氧化还原功能进行鉴定。基因转染及筛选获得了表达Cot A的P.pastoris菌株;继而,表达的重组Cot A蛋白经DEAESepharose FF及Sephadex G-75层析分离与纯化,产物得率为25%,纯化产物的酶比活性为4 U/mg。经SDS-PAGE和MALDI-TOF MS分析显示,其分子质量为65 k D。纯化的Cot A蛋白能够催化胆红素氧化,生成胆绿素,且催化反应速率受反应溶液中溶解氧含量的影响,提示纯化的重组CotA具有胆红素氧化酶活性。酶反应进一步证明,Cot A的胆红素氧化酶反应最适p H值为p H 8.0,最适温度为60℃。该酶在90℃条件下的半衰期为7 h,提示Cot A胆红素氧化酶具有高度的热稳定性。Cot A修饰的摄谱仪石墨电极可直接电催化分子氧(O2)还原,具有很好的电流响应。我们的结果表明,重组的Cot A蛋白具有耐高温胆红素氧化酶活性。更重要的是,我们的结果还提示重组的Cot A蛋白在酶生物燃料电池阴极的制备上具有较好的应用潜能。

胆红素氧化酶及血清胆红素的酶法测定

血清胆红素的测定法很多,现应用的胆红素氧化酶法能简便、特异地测定血清中四种胆红素,为研究胆色素代谢异常提供有力的工具。此外Box 还可应用于生化自动分析中以消除胆红素的干扰而有很好的发展前景。为此,本文重点介绍Box 的提纯及其临床应用,作为开展此方面工作的参考。一、胆红素氧化酶1.Box 的性质1981年Muzao 首先以Myrothecium Veru-caria MT-1微生物中分离并提纯Box(Bilir-ubin Oxidase,EC.1、3、3、5),用交联葡聚糖G-100凝胶过滤法测得其分子量约为52000。

连续监测法测定胆红素氧化酶

为了建立连续监测法测定胆红素氧化酶（ＢＯＤ）活性的方法，该文以Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ为缓冲体系，酶促反应的最适ｐＨ为８．２，底物浓度为３４μｍｏｌ／Ｌ；胆红素的最大吸收波长在４４０ｎｍ，摩尔吸光系数为５．６３×１０￣４Ｌ·ｍｏｌ￣（－１）·ｃｍ￣（－１）；在最佳条件下测定ＢＯＤ的线性范围是０～８０Ｕ／Ｌ，批内ＣＶ＜３．８１％，批间ＣＶ＜４．６７％。在酶法测定血清胆红素（Ｂｉｌ）的反应体系中，当Ｂｉｌ的终浓度为１７．１μｍｏｌ／Ｌ时，ＢＯＤ的终浓度为１７５Ｕ／Ｌ。

胆红素氧化酶凝胶电泳活性染色法

胆红素氧化酶能够特异地将胆红素氧化成胆绿素,利用酶与底物的这种特殊关系可以在凝胶上进行底物染色来直接显示酶的活性区带,这种方法称为胆红素氧化酶的活性染色法.这种活性染色可以采用胆红素直接溶入分离胶后电泳(胆红素-PAGE),也可以在电泳后置于胆红素溶液中染色(PACE-胆红素).其中PAGE-胆红素方法在20 min后即在凝胶上出现深绿色的胆红素氧化酶条带,随着时间延长,凝胶上的绿色酶条带逐渐扩散,最终形成透明条带;而运用胆红素-PAGE的方法则在12 h后才能在凝胶上看见透明的胆红素氧化酶所在的条带.相比之下,前者更为简便、快速、灵敏.

胆红素氧化酶的生物电化学特性研究进展

从胆红素氧化酶的结构、来源、生物电催化的反应机制(铜离子活性中心的氧化还原电势、直接和介体参与的电子传递)、修饰电极的材料、固定化技术以及在生物燃料电池中的应用等方面介绍了胆红素氧化酶,提出了胆红素氧化酶的结构与来源、生物电催化,胆红素氧化酶燃料电池和胆红素氧化酶在电化学中的应用。

用胆红素氧化酶两点法测定血清直接胆红素

用胆红素氧化酶两点法测定血清直接胆红素瞿卫（南京市第一医院检验科，南京２１０００６）张瑞生，任宏英（南京市临床检验中心）在不同ｐＨ条件下，胆红素氧化酶（Ｂｉｌｉｒｕｂｉｎｏｘｉ－ｄａｓｅ，ＢＯＤ）催化各种胆红素的氧化反应不同。在ｐＨ８．０～８．２时，...

响应面法对漆斑菌液体发酵产胆红素氧化酶条件的优化

对漆斑菌(Myrothecium sp.IMER1)菌株液体发酵产胆红素氧化酶的条件进行了优化。采用单因素试验筛选出最适碳源为葡萄糖,氮源为硝酸铵,p H为7,温度为28℃和最有效促进产酶的金属离子为Cu2+。在此基础上,利用Plackett-Burman设计对影响产酶因素的效应进行评价,筛选出具有显著影响的3个因素葡萄糖、p H和温度。用最陡爬坡路径逼近最大产酶区域后,利用响应面中心组合设计对显著因素进行优化,得出p H、温度和葡萄糖分别为5.7、28℃、8 g/L时,优化后液体发酵液中胆红素氧化酶活力提高到0.627 U/m L,比未优化前的酶活力0.214 U/m L提高了近2倍,结果表明单因素与响应面结合法可优化菌株IMER1液体发酵产胆红素氧化酶的条件。

漆斑菌发酵产胆红素氧化酶及其对酸性靛蓝脱色的研究

[目的]提高漆斑菌（Myrothecium sp.IMER1）产胆红素氧化酶产量,并研究其酶液对酸性靛蓝脱色性能。[方法]筛选合适的产酶培养基,研究外加碳源、温度、pH值等条件对产酶量的影响。提取粗酶液并对酸性靛蓝进行了脱色研究,用紫外-可见分光光度计扫描其在200~800 nm波长的变化。[结果]漆斑菌在PDB培养基上生长良好且产酶量最大;当以PDB培养基为基本培养基时,葡萄糖是其产酶的最适外加碳源,该菌最适产酶的温度和pH值分别是28℃和7.0。该酶在2 h内对酸性靛蓝脱色率可达到82%,酸性靛蓝降解液的扫描光谱图证实了染料分子的结构受到了破坏。[结论]试验结果为提高胆红素氧化酶产量提供了试验依据,证实了该酶在印染废水的脱色净化处理中具有潜在的应用前景。