终止剂法测定胆红素氧化酶活性

以L-抗坏血酸(Vc)为终止剂改进的经典胆红素氧化酶(BOD)酶活测定方法.反应体系:0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液,含50 mmol/L甘露醇,pH 8.1,总体积3 mL,30μL胆红素贮存液,10μL酶液.25℃反应3 min,加入50μL 50 g/L的Vc,终止酶催化反应,440 nm测定光吸收.同时加入空白对照组.终止剂法只需一般的分光光度计,操作方便,数据重复性更高,可以同时测定多个样品.

胆红素氧化酶产酶菌株的分离及最佳产酶条件的研究

胆红素是铁卟啉化合物在人体内的代谢产物之一,主要来源于衰老红细胞崩解后的血红蛋白,随胆汁排泄。凡能引起胆红素的生成过多或使肝细胞对胆红紊的摄取、结合、排泄过程发生障碍的因素,都可使血中胆红素浓度增高,出现高胆红素血症。因此,测定血中胆红素水平对临床诊断肝胆疾病,溶血等有着重要的意义。

露湿漆斑菌胆红素氧化酶的分离纯化及其性质

露湿漆斑菌产生的胆红素氧化酶粗酶液通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-100纯化,得到纯化152.54倍胆红素氧化酶,得率19.14%;用PAGE检测为单一条带,活性电泳证实该单一蛋白质组分为胆红素氧化酶,SDS-PAGE证明该酶的相对分子质量为64000。该酶最适反应温度为55℃,以胆红素为底物时最适pH值为7.5,而以ABTS为底物时最适pH值为4,该酶在pH 3-8之间都能够检测到酶活。以胆红素为底物,胆红素氧化酶的Km值和Vmax分别为552.06μmol/L和38.91μmol/（L.min）;而以ABTSA为底物,胆红素氧化酶的Km值和Vmax分别为631.84μmol/L和12.79μmol/（L.min）。

各种胆红素对氧化酶法测定血清尿酸浓度的影响

目的 通过分析不同胆红素对尿酸(UA)氧化酶方法的干扰,探讨各种胆红素对过氧化物酶偶联Trinder反应的UA氧化酶测定方法的影响。方法 我们制备了24种含有不同浓度UA的血清,每种血清含有不同浓度的未结合胆红素(Bu)、结合胆红素(Bc)、δ胆红素(δBil),使用美国EKTACHE750XRCanalyzer生化分析仪测定各种胆红素浓度,使用日本7170全自动生化分析仪测定血清中的UA浓度。结果 来自Bc的干扰最大,当浓度为400μmol/L时,回收率只有56.4%;Bu的干扰较小,当浓度400μmol/L时,回收率仍达87.4%;δBil的干扰最小,随着血清中δBil浓度的提高,对UA测定基本无影响,回收率保持在93.4%以上。结论 Bu、Bc、δBil对UA氧化酶测定方法影响程度不同,在实际工作中应予以重视。

产胆红素氧化酶菌种筛选

选出一株产胆红素氧化酶的菌种露湿漆斑菌—Myrotheciumr oriclum,简称MTR89—403。此菌产酶最适培养基:40—80％的马铃薯浸出液100ml、葡萄糖1g,pH6.0。培养条件:500ml三角瓶装100ml培养基,在27℃、200rpm旋转摇床培养84h,得到的最高酶活为1300u/L,比活为12.3u/mg蛋白。

用胆红素氧化酶消除胆红素对肌酐动力学法测定的影响

用胆红素氧化酶消除胆红素对肌酐动力学法测定的影响王忠诚（重庆市急救医疗中心检验科，四川重庆６３００１４）曾祝伦（重庆医科大学附二院检验科）碱性苦味酸动力学法测定肌酐时，高胆红素会导致结果明显偏低，甚至出现＂负值＂。目前，关于排除干扰的方法有ＳＤＳ、Ｔ...

氧化酶法和钒酸盐法测定血清胆红素的方法比较

目的通过对测定结果进行比对,研究胆红素钒酸盐氧化法和胆红素氧化酶法的反应方法原理,探讨两种方法之间异同点及结果是否具有可比性。方法以两种方法分别检测310例血清,计算回归方程,评估两种方法的相关性。对异常样本进一步实验以研究方法之间的异同。结果总胆红素测定结果的回归方程为Y=1.065 1X+1.197 2,相关系数r=0.997 0。成年人及>30天儿童直接胆红素测定结果回归方程为Y=0.945 9X+0.599 5,相关系数r=0.994 4;新生儿测定结果的回归方程为Y=0.410 4X+2.756 3,相关系数r=0.883 5;结果异常新生儿血清梯度稀释后钒酸盐氧化法结果不可接受。结论总胆红素和成人及>30天儿童的直接胆红素两种方法测定结果的相关性在可接受范围内;新生儿直接胆红素测定两种方法的相关性不可接受;钒酸盐氧化法不可用于新生儿直接胆红素测定。

胆红素及血红素氧化酶与缺血性卒中的关系

胆红素作为血红素的代谢产物，长期以来一直被用作肝胆疾病的诊断指标。但Schwertner等首次提出低浓度的血清胆红素是冠状动脉硬化性心肌病的独立危险因素。

露湿漆斑菌胆红素氧化酶的鉴定

通过胆红素平板溶圈活性实验和聚丙烯酰胺活性电泳鉴定出露湿漆斑菌(MTR)为产胆红素氧化酶的菌株,通过活化菌种、摸索最佳发酵条件和加入诱导剂等方法来提高酶活,通过回收电泳、SDS-PAGE和等电聚焦初步分析得知酶的相对分子质量和等电点,为进一步的分离纯化奠定基础.

胆红素氧化酶产生菌的选育及发酵工艺条件的研究

对胆红素氧化酶产生菌的菌和选育进行了研究。以科研室保藏菌种Mv9201为出发菌株，通过紫外线、硫酸二乙酯单独处理和复合诱变，从353株突变株中筛选出一株高产菌株MyrotheciumverrucariaMv9352，并对其产酶条件进行了研究。以20％的土豆汁（含0．25％的葡萄糖和蛋白胨）为发酵培养基，初始pH6～7，摇床转速为140～160r／min，24～26℃培养96h，酶活力可达4．0～4．5u／ml，比出发株的产酶能力提高近4．5倍。

评价胆红素对肌氨酸氧化酶法测定肌酐的干扰

目的评价胆红素对肌氨酸氧化酶法测定肌酐(Cr)的干扰。方法随机选择国内威高、长征、九强、生之源、基蛋、利德曼6种肌氨酸氧化酶法Cr试剂盒,按照美国临床实验室标准化协会EP 7-A2文件中"配对差异"和"剂量效应"方案,在正常和高值Cr血清中添加不同浓度结合胆红素(CBIL)和游离胆红素(FBIL)干扰物,进行干扰评价试验。结果 CBIL和FBIL对肌氨酸氧化酶法测定Cr存在不同程度的干扰。Cr正常水平,CBIL和FBIL≥120μmol/L时对威高、基蛋Cr试剂产生明显干扰,CBIL≥621μmol/L或FBIL≥481μmol/L时对九强、生之源、长征Cr试剂产生干扰;Cr高值水平,CBIL或FBIL≥120μmol/L时对威高Cr试剂产生干扰,CBIL≥962μmol/L或FBIL≥1083μmol/L时对长征Cr试剂产生干扰。干扰所产生的相对偏倚差异显著,CBIL较比FBIL干扰作用更加明显。"剂量效应"结果显示,胆红素对Cr测定产生负干扰并呈线性关系。结论国内肌氨酸氧化酶法测定Cr试剂抗胆红素干扰能力不同,胆红素对Cr测定产生负干扰并呈线性关系。临床实验室在应用肌氨酸氧化酶法测定Cr时应进行胆红素干扰试验验证。

总胆红素氧化酶法检测系统的性能评价

目的评价氧化酶法测定血清总胆红素(TBil)的性能。方法用氧化酶法测定血清TBil,探讨氧化酶法的精密度、线性、分析灵敏度、抗干扰性和回收率,并与改良J-G法进行比较。结果 TBil的高、低浓度样本批内CV分别为0.38%、0.78%,日间CV分别为1.78%、2.73%;平均回收率为101.2%;分析灵敏度为1.23μmol/L;线性范围为1.23～574.40μmol/L;2种方法相关性良好,直线回归方程为Y=1.105X-1.11,r=0.998。血红蛋白、维生素C和脂肪乳分别为4.8 g/L、500 mg/L和5%时对氧化酶法测定血清TBil不产生干扰。结论氧化酶法具有良好的精密度、线性范围和抗干扰能力,与改良J-G法具有很好的一致性,适用于临床常规检测。

1株产胆红素氧化酶新菌株的分离与鉴定研究

[目的]分离与鉴定1株产胆红素氧化酶的新菌株。[方法]利用常规的微生物分离培养技术,从玉米叶片的病斑中分离出一株产胆红素氧化酶(bilirubin oxidase,BOD)的丝状真菌。[结果]通过形态学、生理学和rDNA-ITS(登录号为JN251106)序列分析,该菌株被鉴定为Bipolaris australiensis,命名为B.australiensis HD-1,属子囊菌门格孢腔菌目格孢腔菌科平脐蠕孢属澳大利亚平脐蠕孢霉(B.australiensis),亦称澳洲双孢霉,是1株没有被报道过的具有产BOD的新产生菌;在不含任何诱导剂的发酵液中28℃,150 r/min,培养6 d,其酶活可达为1 000 U/L。[结论]该方法成功分离出1株产胆红素氧化酶的新菌株,为BOD的产生菌提供了新的微生物来源。

金属离子对漆斑菌产胆红素氧化酶的影响

比较了漆斑菌在8种液体培养基中胆红素氧化酶(BOX)产量,发现马铃薯液体培养基(PDB)是最适宜漆斑菌产BOX的培养基。研究了8种常见金属离子对漆斑菌产酶的影响,结果表明钠离子、铜离子可以明显促进BOX产量提高,铜离子效果最强,随着铜离子浓度增加,BOX酶产量可进一步提高,但高浓度的铜离子(1mmol.L-1)会抑制酶产量增加。

血清直接、间接胆红素对氧化酶法测定甘油三脂浓度的影响分析

目的通过分析不同种类胆红素对甘油三脂(triglyceride,TG)氧化酶测定方法的干扰,探讨直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)、间接胆红素(indirect bilirubin IBIL)对过氧化氢酶(H2O2)偶联Trinder反应的TG氧化酶法测定结果影响程度的不同。方法我们制备系列不同浓度的DBIL、IBIL混合血清,且根据TG含量分为高、中、低三组,其中DBIL、IBIL均在日立7170A上检测;而每种血清标本中TG含量均经氧化酶(GPO-PAP)和甘油三脂乙酰丙酮显色法检测。结果DBIL对TG检测的干扰大,当其浓度达280μmol/L时高、中、低三组标本中TG回收率仅为62.8%、60.3%、58.8%;而IBIL对TG检测的干扰小,当浓度达240μmol/L时TG回收率仍达90%以上。结论DBIL、IBIL对TG氧化酶测定结果的影响程度不同在实际操作中应区别对待。尤其在DBIL含量较高的标本用氧化酶法测TG时产生的负干扰,在结果审核时应重视加以校正。

胆红素氧化酶的特性及应用研究综述

胆红素氧化酶(bilirubin oxidase,BOD)是多铜氧化酶家族的1个成员,因能催化胆红素为胆绿素而得名。随着对该酶研究的深入,发现它具有漆酶无法比拟的优点。本文从BOD的生物化学特性、酶的产生来源、在污染物降解、染料脱色等环境治理、生物燃料电池制备或胆红素传感器制备等领域中的应用作了较为详尽的综述。

胆红素氧化酶及血清胆红素的酶法测定

血清胆红素的测定法很多,现应用的胆红素氧化酶法能简便、特异地测定血清中四种胆红素,为研究胆色素代谢异常提供有力的工具。此外Box 还可应用于生化自动分析中以消除胆红素的干扰而有很好的发展前景。为此,本文重点介绍Box 的提纯及其临床应用,作为开展此方面工作的参考。一、胆红素氧化酶1.Box 的性质1981年Muzao 首先以Myrothecium Veru-caria MT-1微生物中分离并提纯Box(Bilir-ubin Oxidase,EC.1、3、3、5),用交联葡聚糖G-100凝胶过滤法测得其分子量约为52000。

新生儿高胆红素对葡萄糖氧化酶法测定血糖的影响

目的研究新生儿高胆红素血对血葡萄糖测定的影响。方法收集我院55例重度黄疸新生儿病例,进行去除胆红素前后,采用葡萄糖氧化酶法(GOD)测定血糖,同时以己糖激酶法(HK)作参考对照。结果重度黄疸新生儿组在去除血胆红素前后,葡萄糖氧化酶法测定血糖水平差别有显著性意义(P<0.01),而去除胆红素前后己糖激酶法测定血糖水平差别无显著性意义(P>0.05)。结论新生儿高胆红素血对葡萄糖氧化酶法测定血糖有负干扰影响,除去胆红素后可以较准确测定血糖。