胆道闭锁患儿肝组织中GPC3和α-SMA表达与肝功能指标的相关性分析

目的:探讨胆道闭锁(BA)患儿磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并阐明其与肝功能指标的相关性。方法:选择26例BA患儿作为研究对象(BA组),所有患儿均行Kasai术,选择20例胆总管囊肿患儿为对照组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫组织化学法检测2组患儿肝组织中GPC3和α-SMAmRNA和蛋白表达水平;采用Pearson相关分析法分析BA组患儿肝组织中GPC3和α-SMA蛋白表达水平与患儿肝功能指标[白蛋白(ALB)、总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和γ-谷氨酰转氨酶(γ-GGT)]的相关性。术后随访6个月后根据肝功能水平分为预后良好组18例和预后不良组8例,比较不同预后组患儿GPC3和α-SMA蛋白表达水平,采用Metavir评分比较不同预后组患儿肝纤维化程度。结果:与对照组比较,BA组患儿肝组织中GPC3和α-SMAmRNA表达水平明显升高(P<0.05),BA患儿肝组织中GPC3与α-SMAmRNA表达水平呈正相关关系(r=0.537,P=0.005)。BA患儿中,21例(80.8%)BA患儿GPC3蛋白表达阳性,20例(76.9%)BA患儿α-SMA蛋白表达阳性,与对照组比较,BA组患儿肝组织中GPC3和α-SMA蛋白表达水平升高(P<0.05)。Pearson相关分析,BA患儿肝组织中GPC3蛋白表达水平与ALP水平(r=0.582,P=0.008)、Metavir评分(r=0.468,P=0.016)呈正相关关系,与年龄(r=-0.384,P=0.026)、ALB水平(r=-0.514,P=0.005)和AST水平(r=-0.327,P=0.035)呈负相关关系;α-SMA蛋白表达水平与ALP水平(r=0.465,P=0.016)和Metavir评分(r=0.422,P=0.010)呈正相关关系。与预后良好组比较,预后不良组患儿肝组织中GPC3和α-SMA蛋白表达水平及Metavir评分明显升高(P<0.05)。结论:肝组织中GPC3和α-SMA的高水平表达可能与BA患儿肝功能障碍和肝纤维化程度呈正相关关系,多提示预后不良。

胆道闭锁肝纤维化病变中平滑肌肌动蛋白表达的研究

目的本研究通过检测平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在胆道闭锁（BA）肝组织和肝外胆系的表达，探讨肝纤维化过程与临床预后的关系。方法采用免疫组化染色方法对2005年7月至2006年5月本院21例BA肝组织、肝门纤维块进行CD68和α-SMA染色；对照组为5例胆汁淤积和10例胆总管囊肿。选用LEICA-DM研究级生物显微镜，QWIN软件环境下测量抗体阳性细胞面积百分比和平均光密度，随访19例BA术后3个月直接胆红素下降比率。同时对21例BA肝组织纤维化分级，并与α-SMA表达量进行相关分析。结果α-SMA在BA肝纤维块高度表达于胆管上皮、胆管周围的胶原纤维；α-SMA阳性表达量和表达强度明显高于对照组，其表达量与表达强度呈线性正相关（r=0．549，P=0．022）；CD68在BA肝组织表达较对照组明显增强，但肝门纤维块鲜有表达。α-SMA表达量与肝脏纤维化分级呈正相关（P=0．02）；α-SMA阳性表达面积百分比与术后3个月直接胆红素下降率呈负相关（r=-0．653，P=0．029），但肝组织CD68表达与α-SMA阳性表达相关性不明显（r=0．444，P=0．057）。结论α-SMA的表达可能是肝脏纤维化的早期标志，SMA的阳性表达量与术后3个月胆红素消退呈显著负相关，预示BA肝内外胆管系统纤维化，乃至肝硬化，提示可能临床预后不佳。

胆管疤痕相关因子在梗阻型胆管损伤后不同时间段的表达

目的:探讨手术时机的选择对胆道修复后吻合口狭窄的影响.方法:运用家犬制作梗阻型胆管损伤的动物模型,通过HE染色及Masson特染分析损伤后胆管壁的结构改变及胶原增生情况,免疫组织化学法测定胆管梗阻损伤后不同时间段巨噬细胞MΦ、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达情况.结果:胆管损伤后早期(BDL5)出现黏膜水肿,部分弹力纤维断裂,随着梗阻时间延长,黏膜层变薄,成纤维母细胞及胶原组织不断增生,纤维呈无规则排列,随着损伤时间的延长,胶原纤维增生不断增强[28.47±4.06(BDL5)vs59.92±9.13(BDL30)],但是疤痕相关因子MΦ、α-SMA及TGF-β1在损伤后5d即出现高表达[MΦ:0.262±0.031(BDL0)vs0.409±0.034(BDL5),α-SMA:0.239±0.035(BDL0)vs0.387±0.018(BDL5),TGF-β1:0.245±0.033(BDL0)vs0.386±0.029(BDL5),P>0.05],而后随着损伤时间的延长,其表达并未出现增高[MΦ:0.409±0.034(BDL5)vs0.422±0.023(BDL30),α-SMA:0.387±0.018(BDL5)vs0.358±0.029(BDL30),TGF-β1:0.386±0.029(BDL5)vs0.389±0.056(BDL30),P<0.05],两者无时效关系.结论:胆管损伤后时间的长短与管壁疤痕是否过度形成无关,故胆管修复时间不是术后吻合口狭窄的主要因素.

曲安奈德药物涂层可降解支架在兔胆管损伤动物模型的研究

目的观察胆管内放置曲安奈德可降解胆道支架后胆管ɑ平滑肌肌动蛋白(ɑ-SMA)及转化因子β_1(TGF-β_1)在兔胆管损伤动物模型修复期间的表达情况,研究应用曲安奈德药物覆膜的可降解胆道支架在兔胆管损伤动物模型中抑制胆管炎性狭窄的机制。方法通过兔胆管损伤动物模型将应用曲安奈德药物涂层的可降解胆道支架和无曲安奈德涂层可降解胆道支架分别放置兔肝外胆管60只,平均随机分成6组,选取放置胆道支架后第30天、60天、90天分别处死1组兔动物模型,取材兔损伤修复模型的胆管并且应用免疫组织化学的方法分别检测ɑ-SMA和TGF-β_1蛋白的表达水平。结果曲安奈德可降解胆道支架组兔胆管SMA-ɑ和TGF-β_1与无曲安奈德涂层可降解胆道支架组相比表达减弱,曲安奈德可降解胆道支架组兔胆管狭窄,发生比无曲安奈德涂层可降解胆道支架组低。曲安奈德可降解胆道支架组第30天与第90天二组有差异性统计学意义(P<0.05),无曲安奈德涂层可降解胆道支架组第60天与第90天组二组有差异性统计学意义(P<0.05)。结论曲安奈德药物覆膜可降解支架在兔胆管损伤动物模型修复期间胆管组织中ɑ-SMA和TGF-β_1两种蛋白表达量降低,提示曲安奈德药物覆膜可降解支架在抑制兔胆管损伤动物模型的炎性狭窄起到一定作用。