脊髓背根神经节ZXDC介导CCL2对慢性压迫性 神经损伤小鼠神经性疼痛的作用

目的探讨脊髓背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中转录因子锌指X连锁复制C(zinc finger X-linked duplicated C,ZXDC)介导CCL2/CCR2信号通路对慢性压迫性神经损伤(chronic construction injury model,CCI)诱导神经性疼痛的作用及机制。方法构建小鼠坐骨神经慢性压迫性损伤模型,免疫荧光染色、Western blot法和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测正常情况和CCI造模后DRG中ZXDC及CCL2表达变化;将实验动物分为假手术(Sham)组、CCI+AAV-NC组和CCI+AAV-ZXDC siRNA组;Western blot法和免疫荧光染色检测各组小鼠CCI造模后各时间点DRG中ZXDC、CCL2和CCR2表达,RT-qPCR检测DRG中促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达,机械性缩足反射测试检测神经性疼痛行为改变。结果ZXDC表达定位在DRG大、中、小神经元。CCI损伤后1~3天DRG中ZXDC和CCL2蛋白和mRNA表达显著增高,CCI后7天二者表达显著降低,ZXDC和CCL2mRNA表达量呈正相关(P均<0.05)。CCI后3天,与Sham组比较,CCI+AAV-NC组和CCI+AAV-ZXDC siRNA组ZXDC、CCL2、CCR2蛋白表达、TNF-α和IL-1βmRNA表达显著增高,其中CCI+AAV-ZXDC siRNA组较CCI+AAV-NC组ZXDC、CCL2、CCR2蛋白表达、TNF-α和IL-1βmRNA显著降低(P均<0.05)。与Sham组比较,CCI+AAV-ZXDC siRNA组和CCI+AAV-NC组CCI后各时间点机械缩足阈值均显著降低,其中CCI后7天,CCI+AAV-ZXDC siRNA组机械缩足阈值显著高于CCI+AAV-NC组(P均<0.05)。结论脊髓背根神经节ZXDC基因敲减通过抑制CCL2/CCR2信号通路介导CCI诱导的神经性疼痛。

大黄素抑制背根神经节压迫小鼠模型STAT3、VEGFA、p-ERK蛋白表达及其镇痛作用研究

目的 研究大黄素(Emodin,ED)对背根节压迫小鼠模型的镇痛作用以及对STAT3/VEGFA/p-ERK信号通路的影响。方法 建立背根神经节慢性压迫(chronic compression damage,CCD)小鼠疼痛模型,随机分为空白组、模型组、普瑞巴林组及ED低、中、高剂量组。通过检测动物机械痛敏和热辐射痛敏阈值、醋酸扭体实验评价镇痛效果;ELISA检测小鼠L4-L5节段脊髓组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和CD18等炎症因子含量;Western blot和免疫荧光检测脊髓组织信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinases 1/2,p-ERK1/2)蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组的机械痛敏、热辐射痛敏阈值显著降低(P<0.05),脊髓背角炎症因子表达显著增高(P<0.05),脊髓中VEGFA、STAT3、p-ERK的表达显著上调(P<0.05)。与模型组比,ED低、中、高剂量组CCD小鼠模型的机械痛敏、热辐射痛敏阈值升高(P<0.05);脊髓背角炎症因子表达降低(P<0.05);脊髓背角小胶质细胞STAT3、VEGFA、p-ERK的表达降低(P<0.05),醋酸诱导的小鼠急性疼痛中扭体次数减少(P<0.05)。结论 ED对背根节压迫小鼠模型有良好的镇痛作用,其机制可能与抑制脊髓背角炎症因子表达和STAT3/VEGFA/p-ERK介导的脊髓小胶质细胞活化有关。

电针对慢性坐骨神经压迫性损伤大鼠神经病理学及背根神经节P2X_3受体表达的影响

目的:观察EA对CCI大鼠坐骨神经组织病理学及DRG P2X3受体表达的影响,探讨电针对神经组织学的影响及P2X3受体在电针镇痛效应中的作用。方法:将32只成年雄性SD大鼠,分为假模组、模型对照组、健侧EA组、患侧EA组,每组8只,模型对照组及EA组结扎坐骨神经造成CCI疼痛模型。各组于术前(0天)及术后3、57、1、01、2、14天分别测量大鼠患侧足MWT和TWL,EA组于术后第8天电针"足三里"-"阳陵泉"连续7天,每天1次。术后14天对坐骨神经标本行组织学观察,采用Estebe评分方法行组织学评分,免疫荧光组织化学检测患侧L5背根神经节中P2X3受体的表达情况。结果:与术前比较,CCI各组大鼠痛阈明显降低,出现痛觉过敏(P<0.01),而电针干预后EA组较CCI模型组痛阈明显增加(P<0.05)但仍低于假模组。各组大鼠坐骨神经组织学观察无明显差异,各组评分差异无统计学意义(P>0.05)。术后14天EA组较模型对照组患侧DRG L5中P2X3受体表达显著减少(P<0.05),并且患侧EA组较健侧EA组减少明显。结论:电针对坐骨神经压迫性损伤的镇痛效果可能是通过抑制大鼠DRG中P2X3受体的表达产生作用;患侧电针较健侧电针镇痛效果明显;电针后坐骨神经未见明显的病理组织学改变。

延胡索乙素对大鼠慢性压迫背根节神经元自发放电的影响

目的观察延胡索乙素(l-THP)对大鼠慢性压迫背根节神经元A类纤维自发放电的影响。方法采用单纤维记录大鼠慢性压迫背根节神经元自发放电的方法,观察l-THP对自发放电的影响,以及浓度-效应关系。结果实验中记录到单纤维A类神经元自发放电84根。在A类神经元自发放电中有25根自发放电为周期节律,59根为非周期节律。l-THP(100μmol/L)分别引起16.0%(4/25)的周期节律放电神经元和67.8%(40/59)非周期节律放电神经元放电减少(P<0.01,l-THP干预前后配对t检验)。l-THP对受损背根节(DRG)神经元自发放电的抑制作用具有剂量依赖关系,随着浓度的增大抑制神经元自发放电的时间越快,自发放电恢复所需的时间也越长。其中有57.1%(24/42)的DRG神经元自发放电在洗脱后20 min内可以恢复,42.8%(18/42)的DRG神经元自发放电在洗脱后经过3 h始终没有恢复。结论l-THP对大鼠慢性压迫背根节神经元A类纤维的自发放电有抑制作用。

交感神经传出兴奋对大鼠慢性压迫背根节神经元放电的调节作用

目的 研究大鼠慢性压迫背根节 (dorsal root gan-glion,DRG)的交感 -感觉耦联现象 .方法 采用单纤维记录神经元自发放电的方法 ,在 DRG慢性压迫模型上 ,电刺激腰交感神经干 ,观察交感神经传出兴奋对受损 DRG神经元自发放电的调节作用 .结果 5 7%有自发放电的受损 DRG神经元对交感神经刺激有反应 ,其中反应类型有单纯兴奋、先兴奋后抑制和单纯抑制三种形式 ,反应的幅度随交感刺激持续时间的延长而逐渐增大 ,受损 DRG神经元对交感刺激的这种反应可被静脉注射 α受体阻断剂 -酚妥拉明所阻断 . 5 3%的受损DRG神经元对外源性去甲肾上腺素有元反应 ,其反应形式与交感刺激引起的反应类似 .结论 在慢性压迫 DRG神经元上存在交感 -感觉耦联现象 ,交感神经节后纤维末梢通过释放去甲肾上腺素 ,作用于受损 DRG神经元的

蛇床子素对慢性坐骨神经压迫模型大鼠背根神经节中MyD88、p-ERK表达的影响

目的建立大鼠慢性坐骨神经压迫(CCI)模型,探讨蛇床子素对CCI大鼠背根神经节(DRG)中髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达的影响。方法24只SD大鼠随机分为3组:假手术(sham)组,CCI组,治疗组,每组8只。治疗组分别于术前1 d、术后1、7 d鞘内注射蛇床子素(1 mg/50μL),sham组、CCI组在相同给药时间注射相同体积生理盐水。各组大鼠分别在术后1、3、5、7、14 d检测后足机械缩足阈值(PMWT)和后足热缩足反射潜伏期(PTWL)。使用Western blotting检测大鼠DRG中MyD88和p-ERK表达。结果与sham组大鼠比较,CCI组大鼠的PMWT明显降低(P<0.01)。与CCI组比较,治疗组大鼠术后1、3、5 d PMWT没有统计学差异(P>0.05),而术后7、14 d PMWT明显升高(P<0.05)。与sham组比较,CCI组的大鼠PTWL明显缩短(P<0.01);与CCI组比较,治疗组PTWL明显增加(P<0.01)。与sham组比较,CCI组术后14 d DRG中My D88、p-ERK表达明显增加(P<0.05);与CCI组比较,治疗组术后14 d DRG中MyD88、p-ERK表达量明显减少(P<0.05)。结论蛇床子素可下调CCI大鼠DRG中MyD88的表达,减轻神经病理性疼痛。

5-羟色胺在小鼠慢性背根神经节压迫模型中的作用机制

目的探讨5-羟色胺(5-HT)在小鼠慢性背根神经节压迫(CCD)模型中的作用机制。方法将L型不锈钢棍插入小鼠右侧L3和L4椎间孔,持续压迫背根神经节(DRG)建立小鼠CCD模型。在CCD手术前1 d及手术后1、3、5、7 d向小鼠胫骨前区皮内注射10μL 5-HT(低剂量浓度为0.003 g/L,高剂量浓度为0.3 g/L)后,录像分析小鼠对注射5-HT后所产生的痒与痛行为学;免疫荧光实验检测小鼠DRG中H4蛋白的表达;实时PCR检测CCD模型小鼠压迫5 d后双侧L3和L4 DRG内5-HTr1a和5-HTr2a的表达。结果与手术前1 d比较,低浓度5-HT在CCD手术后3 d可以明显增加痒行为;高浓度5-HT在CCD手术后1 d可以明显增加痒行为(P<0.05)。与手术前1 d比较,低浓度5-HT在小鼠CCD手术后1 d和3 d可以明显增加痛行为(P<0.05);高浓度5-HT在小鼠CCD手术后1 d可以明显增加痛行为(P<0.05)。与对侧DRG比较,压迫5 d的DRG中H4蛋白,5-HTr1a、5-HTr2a mRNA表达均显著升高(均P<0.05)。结论受压迫DRG神经元H4、5-HTr1a和5-HTr2a表达上调,引起感受野对5-HT诱发痛与痒的敏化。

氧自由基清除剂对背根神经节慢性压迫模型大鼠机械痛阈值的影响

目的观察腹腔内注射活性氧(ROS)清除剂苯亚甲基叔丁基氮氧化物(PBN)对背根神经节慢性压迫(CCD)模型大鼠手术侧足底疼痛的影响,以阐明ROS在CCD大鼠疼痛中的作用。方法将33只成年雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组(6只)、假手术组(6只)和CCD模型组(21只);术后第7天,再将CCD模型组大鼠随机分为CCD+PBN100亚组(9只)、CCD+PBN30亚组(6只)和CCD+0.9%氯化钠溶液亚组(CCD+N亚组,6只)。应用vonFrey纤维丝分别检测术前机械刺激缩足反应阈值(PWMT)基础值(0d)和术后第1、3、5、7天大鼠损伤侧后足的PWMT。术后第7天,分别在CCD+PBN100亚组、CCD+PBN30亚组和CCD+N亚组大鼠腹腔内注射PBN100mg/kg或PBN30mg/kg或等体积0.9%氯化钠溶液,并于注射后0.5、1、2、4、6、8、24h检测大鼠损伤侧后足的PWMT。结果假手术组大鼠术后第1天和CCD模型组大鼠术后第1、3、5、7天的PWMT均较同组术前基础值和正常对照组同时间点显著降低(P值均<0.05),CCD模型组大鼠术后第1、3、5、7天的PWMT均较假手术组同时间点显著降低(P值均<0.05)。CCD+PBN100亚组和CCD+PBN30亚组大鼠注射药物后0.5、1、2h的PWMT均较CCD+N亚组同时间点显著升高(P值均<0.05),CCD+PBN100亚组大鼠注射药物后0.5、1h的PWMT均较CCD+PBN30亚组同时间点显著升高(P值均<0.05)。结论腹腔内注射ROS清除剂PBN可显著缓解CCD模型大鼠痛觉过敏,高剂量PBN(100mg/kg)缓解疼痛的效果更佳,表明ROS可能参与CCD模型大鼠疼痛信息的调节。

经皮电针对背根节慢性压迫模型大鼠相应腰髓节段GFAP和5-HT阳性神经元的影响和与疼痛的关系

目的研究经皮电针对背根节慢性压迫模型(CCD)大鼠相应腰髓节段神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和血清素(5-HT)的影响和与疼痛的关系。方法选用雄性Wistar大鼠42只,随机分为3组:A正常对照组(6只),B背根节慢性压迫模型组(18只),C经皮电针治疗背根节慢性压迫模型组(18只),其中从B、C组各挑选基础痛域基本相似的6只大鼠,隔日进行痛域的测定,并于2周同A组随机选出的2只大鼠共同进行免疫组织化学染色。其余28只分别于术后2 d,1周进行免疫组织化学染色。选取大鼠相应L4-L6脊髓阶段组织,进行GFAP和5-HT的特异性染色。结果①痛域变化:造模第2天开始出现痛敏,且痛域与术后时间呈负相关,C组经TENS治疗6 d后,痛域比B组有显著性的增加;②免疫组织化学染色结果:2 d时,B、C组GFAP和5-HT阳性神经元较A组显著性的增加;1和2周时,B组较A、C组GFAP和5-HT阳性神经元数均显著性的增加,C组较A组相比均无显著性的差异。结论GFAP和5-HT阳性神经元的活化率的减少可能是经皮神经电刺激(TENS)降低CCD模型疼痛的可能机制之一,且GFAP和5-HT阳性神经元之间可能存在相互激活作用。

大鼠慢性背根节压迫诱致DRG大神经元兴奋性增强和Ih电流显著上调

目的:探讨大鼠CCD模型模拟的腰背痛诱致的DRG大神经元兴奋性改变及其离子通道机制。方法:建立大鼠慢性压迫腰膨大L4/L5 DRG的CCD模型,模拟临床常见的腰背痛的触诱发痛表现。制备整节L4/L5 DRG标本,应用全细胞膜片钳技术记录去极化电流刺激诱致的DRG大型神经元的兴奋性改变及其离子通道机制。结果:对直径>50μm的健康的DRG大神经元进行全细胞膜片钳记录。结果显示:给予去极化方波电流刺激可以诱致CCD模型大鼠DRG大神经元呈现兴奋性增强的表现,具体表现为相同刺激强度的电流注射在CCD模型DRG大神经元上诱致的动作电位的频率显著高于对照组神经元。同样的细胞放电增强也见于给予细胞斜波电流刺激。进一步的机制研究分析显示CCD模型大鼠上DRG大神经元的I_h电流明显高于对照组大鼠。结论:CCD模型可以诱致DRG大神经元呈现超兴奋状态,该兴奋性增强的状态主要由I_h电流增强来介导,为认识神经损伤诱致的病理性痛觉敏化尤其是触诱发痛的神经机制提供了实验证据。

背根神经节慢性压迫大鼠行为及缰核内c-fos CGRP的变化

目的 建立有效的背根神经节压迫模型 ,并探讨缰核内c -fos和CGRP的变化。方法 采用铬制 1- 0肠线通过椎间孔压迫Wistar大鼠L4 、L5背根神经节制备背根神经节压迫模型 ;应用SP法检测缰核c -fos表达 ;放射免疫分析法测定缰核内CGRP含量。结果 术后 4周内受压侧后肢持续表现痛敏行为 ,制备了稳定的背根神经节压迫模型 ;外侧缰核检测到中等强度表达的核内fos蛋白免疫阳性细胞 ,其表达呈一过性 ;测得缰核内CGRP含量基础值为 (5 0 6 6± 0 4 34)ng/L ,并随压迫刺激时间的延长 ,CGRP呈逐渐增高趋势。结论 本实验建立了慢性背根神经节压迫的可靠模型。缰核内c -fos表达呈一过性增高 ,而CGRP呈持续增高 ,与痛敏行为呈负相关 。

氧自由基清除剂对大鼠背根神经节慢性压迫致镜像痛的行为学影响

目的研究氧化应激在背根神经节慢性压迫(CCD)模型致大鼠镜像痛中的作用。方法选取雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠建立L4、L5两节段CCD模型(CCD模型组),并设立假手术对照组(10只),应用von Frey纤维丝测定双侧后足机械痛缩足阈值(PWMT)。术后第7天,筛选出CCD模型组发生镜像痛大鼠30只,按照5mL/kg标准分别予腹腔内注射氧自由基清除剂N-叔丁基-α-苯基硝酮(PBN)100mg/kg(CCD+PBN100亚组,10只)、PBN 30mg/kg(CCD+PBN30亚组,10只)和0.9%氯化钠溶液(CCD+NS亚组,10只)。记录并比较各组大鼠双侧后足在给药前0.5h和给药后0.5、1、2、4、6、8、24h时的PWMT值和镇静评分。结果CCD模型组术后第1、3、5、7天压迫侧和损伤对侧的PWMT值均显著低于同组同侧术前(P值均<0.05),假手术组术后第1天压迫侧和损伤对侧的PWMT值均显著低于同组同侧术前(P值均<0.05)。CCD模型组术后第1、3、5、7天压迫侧和术后第3、5、7天损伤对侧的PWMT值均显著低于假手术组同侧同时间(P值均<0.05)。CCD模型组术后1、3、5、7天损伤对侧的PWMT值均显著高于同组压迫侧同时间(P值均<0.05)。CCD+PBN100亚组注射后0.5、1、2h压迫侧和损伤对侧的PWMT值均显著高于同亚组同侧注射前和CCD+PBN30亚组同侧同时间(P值均<0.05),CCD+PBN30亚组注射后0.5、1、2h压迫侧和注射后0.5、1h损伤对侧的PWMT值均显著高于同亚组同侧注射前和CCD+NS亚组同侧同时间(P值均<0.05)。CCD模型组3个亚组的镇静评分均为0分,3组间差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论腹腔注射氧自由基清除剂PBN可以缓解大鼠CCD引发的镜像痛行为。

去甲肾上腺素对慢性压迫背根节神经元的兴奋作用

目的观察去甲肾上腺素对大鼠正常及慢性压迫背根节中具有后去极化的神经元的兴奋性作用。方法急性离散大鼠背根节(dorsalrootganglion,DRG)神经元后,以全细胞膜片钳技术记录了正常DRG神经元及慢性压迫DRG神经元的膜电位及放电数目在施加去甲肾上腺素(NE)前后的改变。结果在NE的作用下,受损DRG内具有后去极化(afterdepolarizepotential,ADP)的30个神经元中有13.3%出现自发放电,20%出现兴奋性增强;而检测的正常DRG内具有ADP的20个神经元在NE的作用下未出现自发放电,也无兴奋性增强。结论受损DRG的ADP神经元对NE的反应显著增强,ADP可能参与交感神经维持痛的形成。

脊髓p38MAPK在大鼠背根节慢性压迫神经病理性疼痛中的作用

目的观察背根节慢性压迫(chronic compression of dorsal root ganglion,CCD)痛大鼠脊髓p-p38MAPK表达的变化,探讨p38MAPK与慢性神经病理性痛的相关性。方法♂SD大鼠36只,随机分为正常组(Naive组,n=4)、假手术组(Sham组,n=16)和背根节慢性压迫组(CCD组,n=16),Sham组和CCD组又分别分为5,7,14d和21d4个亚组(n=4),分别用免疫印迹法(Westernblot)检测各组大鼠脊髓磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)表达的变化。结果3组大鼠脊髓均见p-p38MAPK蛋白表达。Naive组和Sham组间比较差异无统计学意义。CCD组大鼠脊髓p-p38MAPK蛋白表达较Naive组和Sham组明显增多;与Sham组相比,CCD后5,7,14,21d各组大鼠脊髓背角神经元胞质p-p38MAPK蛋白分别增加了138·1%(P<0·01)、184·3%(P<0·01)、247·4%(P<0·01)和90·4%(P<0·05)。胞核p-p38MAPK蛋白分别增加了167·3%(P<0·01)、177·8%(P<0·01)、262·7%(P<0·01)和72·7%(P<0·05)。结论在CCD大鼠模型中,脊髓p38MAPK的活化与背根节慢性压迫致神经病理性痛的形成和发展存在密切联系。

小鼠背根神经节慢性压迫引起的痛敏化机制

目的探讨背根神经节慢性压迫(CCD)引起的低剂量辣椒素诱发痛敏化机制。方法将光滑L型钢柱插入小鼠的L4椎间孔,对背根神经节(DRG)造成持续压迫,建立小鼠CCD模型。于CCD术前1 d及术后第1、3、5、7 d向小鼠胫骨前区皮下注射不同浓度的辣椒素(0. 01、0. 1、1 g/L) 10μl后采用行为学检测动物的痛行为学表现并录像,以寻找CCD术后辣椒素诱发痛行为差异最显著的浓度。利用Pirt-GCaMP3转基因小鼠,胫骨前区皮下注射最佳浓度辣椒素,利用激光扫描共焦显微镜在体记录DRG神经元对外周体表感受野辣椒素刺激的反应。利用免疫荧光染色技术观察正常及CCD模型压迫5 d后DRG内辣椒素受体(TRPV1)的表达变化。结果行为学检测结果显示,与正常小鼠相比,低浓度(0. 1 g/L)辣椒素在CCD模型小鼠上引起的诱发痛显著提升(n=8;术后1d,P<0. 01;术后5 d,P<0. 05;术后7 d,P<0. 05;术后3 d,P> 0. 05)。在体激光扫描共焦成像结果表明,在记录的398(n=4)个正常小鼠L4DRG神经元中,对皮下注射0. 1 g/L辣椒素有反应的神经元为75个,在382(n=6)个CCD术后5 d的小鼠L4DRG神经元中,对皮下注射0. 1 g/L辣椒素有反应的神经元为169个,差异有显著性(P<0. 01)。免疫荧光染色结果显示,在653(n=10)个正常神经元中,TRPV1阳性的细胞数为148,在611(n=6)个CCD神经元中,TRPV1阳性的细胞数为237,差异有显著性(P<0. 01)。结论在小鼠CCD模型中,受到压迫DRG神经元TRPV1表达上调,导致相应的体表感受区域对辣椒素诱发痛敏化。

电针对慢性炎症疼痛大鼠背根神经节牛肾上腺髓质22肽及其受体基因表达的影响

[目的]观察电针对完全福氏佐剂(complete freund’s adjuvant,CFA)致慢性疼痛大鼠患侧腰背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)牛肾上腺髓质22肽(BAM22)与其感觉神经元特异性受体(SNSR)、MOR与DOR基因表达的影响。[方法]200±20g雄性SD大鼠30只,随机分成正常对照组、模型对照组、电针组,每组10只,模型对照组、电针组右足CFA造模。电针组从造模24h开始治疗,患侧"足三里"穴,2/100Hz,30min,1次/d,治疗10d,其余2组不予治疗。采用辐射热法检测大鼠缩爪潜伏期观察大鼠患侧热痛敏变化,免疫组化法检测患侧背根神经节BAM22多肽的含量,定量PCR(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)法检测患侧背根神经节SNSR、MOR与DOR mRNA的表达。[结果]经过10d的治疗,电针组的痛阈与模型对照组相比,有显著提高(P<0.05)。免疫组化结果显示,电针干预后,患侧背根神经节的BAM22阳性细胞率比模型对照组有显著的提高(P<0.01)。定量PCR结果显示,电针极大地促进了SNSR(P<0.01)、MOR(P<0.01)与DOR mRNA(P<0.01)在患侧DRG中的表达。[结论]电针对CFA大鼠慢性疼痛有良好的干预作用,推测该作用与电针增强患侧腰背根神经节BAM22多肽表达,增强其非阿片受体SNSR与其阿片受体MOR与DOR mRNA表达相关。

膜片钳技术在慢性痛大鼠背根神经节神经元电生理学特性改变中的应用

目的:以骨癌痛大鼠为例,探讨全细胞膜片钳技术在慢性痛研究中的应用。方法:急性分离背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元,利用全细胞膜片钳技术分别记录对照组和骨癌痛组大鼠小直径DRG神经元的动作电位及TRPV1(transient receptor potential vanilloid channel subfamily V member 1)的电流,分析大鼠小直径DRG神经元电活动的变化。结果:利用全细胞膜片钳技术可以记录到骨癌痛大鼠的小直径DRG神经元静息膜电位绝对值降低、动作电位发放频率增加、爆发动作电位的阈值降低、TRPV1通道的电流幅度增大。结论:全细胞膜片钳技术可以有效而直观的记录到单个神经元动作电位和电流的变化,并由此对神经元电生理学特性进行分析,从而进行慢性痛发病机制的研究。

鞘内移植神经干细胞对慢性缩窄性损伤模型大鼠脊髓背角和背根神经节胶质细胞源性神经营养因子表达的影响

目的神经病理性疼痛在临床中很常见,但治疗效果欠佳。文中应用鞘内移植神经干细胞(neural stem cells,NSC)治疗坐骨神经慢性缩窄性损伤模型(chronic constriction injury,CCI)大鼠,并观察脊髓背角和背根神经节(dorsal root gan-glion,DRG)胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的变化。方法成年SD大鼠72只,随机均分为A组(假手术+细胞培养液)、B组(CCI+细胞培养液)和C组(CCI+NSC),然后各组再随机分为:A1、B1和C1组(CCI后3 d鞘内移植组)和A2、B2和C2组(CCI后10 d鞘内移植组),每组12只。分别于术前1 d和术后1、3、7、14、21 d测机械痛阈(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热痛阈(thermal withdrawal latency,TWL)。术后7 d、14 d和21 d采用免疫组织化学染色和Real-time PCR技术观察DRG、脊髓背角中GDNF的表达变化。结果①与A组相比,B1、B2、C1、C2组术前1 d、术后1 d和21d MWT和TWL差异无统计学意义(P>0.05);术后3d MWT和TWL逐渐降低,至术后7d降低至最低点,在此期间各时间点痛阈与A1组比较,B1、B2、C1、C2组数值均有显著降低(P<0.01),之后缓慢升高,于术后21 d恢复至术前水平;与B组比较,C组术后7d、14dMWT和TWL明显上升(P<0.01)。②与B组比较,A组术后7d、14d和21d各组大鼠GDNF的表达呈低水平(P<0.05);术后7 d,C1组GDNF的表达量较B1组明显升高(P<0.05);术后14 d和21 d,C1、C2组GDNF的表达量高于B1、B2组(P<0.05)。结论鞘内移植NSC可通过提高脊髓背角和DRG中的GDNF表达量,从而对CCI模型引起的神经病理性疼痛起预防和治疗作用。

芍药苷上调慢性压迫性损伤大鼠脊髓背角和背根节内Sirt1表达

目的:观察芍药苷对慢性压迫性损伤(CCI)大鼠的疼痛行为和Sirt1在脊髓背角及背根节的表达变化。方法:选择雄性SD大鼠48只,按照设计随机分为假手术组(Sham组)、阴性对照组(SC组)、CCI组和芍药苷组。每组在术前和术后3、7和14 d检测大鼠的后足热缩足反射潜伏期(TWL)和机械缩足反射阈值(MWT);选择在术后3、7和14 d的相同时间处死大鼠,取大鼠L4~5节段的脊髓和背根节组织备用,用realtime PCR检测Sirt1在组织内表达水平,采用Western blot法检测组织内Sirt1蛋白表达变化。结果:术后3、7和14 d,与Sham组比,CCI组TWL与MWT值均显著降低(P<0.05),并且在术后3 d达到最小值;real-time PCR结果显示,与Sham组相比,术后7 d和14 d,CCI组脊髓背角及背根节的Sirt1基因表达显著降低(P<0.05),与SC组对比,芍药苷组脊髓背角及背根节的Sirt1基因的表达上调(P<0.05);Western blot结果表明芍药苷组脊髓背角及背根节的Sirt1蛋白的表达随时间逐步升高,但在14 d时仍低于SC组(P<0.05)。结论:芍药苷能够缓解神经病理性疾病引发的疼痛,其中上调脊髓背角和背根节Sirt1的表达是其可能机制。

鞘内注射T型钙通道反义寡聚核苷酸对慢性背根节压迫大鼠痛阈的影响

目的观察鞘内注射T型钙通道(Cav3.0)反义寡聚核苷酸对慢性背根节压迫(chronic compression of dorsal root ganglion,CCD)大鼠痛阈的影响,初步探讨脊髓T型钙通道在神经病理性疼痛形成中的作用。方法鞘内置管♂SD大鼠32只,随机分为4组(n=8):CCD+NS组、CCD+Cav3.0反义寡聚核苷酸组(CCD+Cav3.0-AS)、CCD+Cav3.0错义寡聚核苷酸组(CCD+Cav3.0-MM)、假手术(sham)+NS组。各组大鼠在CCD或sham术后d1始连续4d每天2次鞘内分别注射12.5μg,容积均为10μl的Cav3.0-AS、Cav3.0-MM或NS10μl,分别观察手术后1～14d大鼠机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)。结果鞘内注射Cav3.0反义寡聚核苷酸能延缓CCD大鼠痛敏的形成,在CCD术后d8～9才形成与CCD+NS组类似的痛敏,而鞘内注射Cav3.0错义寡聚核苷酸则与CCD+NS组差异无统计学意义。结论脊髓T型钙通道参与神经病理性疼痛的形成,抑制脊髓T型钙通道基因的表达具有疼痛治疗作用。