小鼠背根神经节慢性压迫引起的痛敏化机制

目的探讨背根神经节慢性压迫(CCD)引起的低剂量辣椒素诱发痛敏化机制。方法将光滑L型钢柱插入小鼠的L4椎间孔,对背根神经节(DRG)造成持续压迫,建立小鼠CCD模型。于CCD术前1 d及术后第1、3、5、7 d向小鼠胫骨前区皮下注射不同浓度的辣椒素(0. 01、0. 1、1 g/L) 10μl后采用行为学检测动物的痛行为学表现并录像,以寻找CCD术后辣椒素诱发痛行为差异最显著的浓度。利用Pirt-GCaMP3转基因小鼠,胫骨前区皮下注射最佳浓度辣椒素,利用激光扫描共焦显微镜在体记录DRG神经元对外周体表感受野辣椒素刺激的反应。利用免疫荧光染色技术观察正常及CCD模型压迫5 d后DRG内辣椒素受体(TRPV1)的表达变化。结果行为学检测结果显示,与正常小鼠相比,低浓度(0. 1 g/L)辣椒素在CCD模型小鼠上引起的诱发痛显著提升(n=8;术后1d,P<0. 01;术后5 d,P<0. 05;术后7 d,P<0. 05;术后3 d,P> 0. 05)。在体激光扫描共焦成像结果表明,在记录的398(n=4)个正常小鼠L4DRG神经元中,对皮下注射0. 1 g/L辣椒素有反应的神经元为75个,在382(n=6)个CCD术后5 d的小鼠L4DRG神经元中,对皮下注射0. 1 g/L辣椒素有反应的神经元为169个,差异有显著性(P<0. 01)。免疫荧光染色结果显示,在653(n=10)个正常神经元中,TRPV1阳性的细胞数为148,在611(n=6)个CCD神经元中,TRPV1阳性的细胞数为237,差异有显著性(P<0. 01)。结论在小鼠CCD模型中,受到压迫DRG神经元TRPV1表达上调,导致相应的体表感受区域对辣椒素诱发痛敏化。

背根节压迫大鼠脊髓背角广动力神经元电生理学特性研究

目的探讨大鼠腰4、5背根神经节慢性压迫（chronic compression of dorsal root ganglion，CCD）损伤后，脊髓背角广动力（widedynamicrange，WDR）神经元电生理学特性的改变。方法健康SD大鼠随机分为正常组和CCD组（每组12只），分别检测机械痛敏和热痛敏行为，并利用在体细胞外电生理学方法记录脊髓背角WDR神经元放电。结果CCD术后大鼠出现了机械痛敏和热痛敏行为。与正常组大鼠相比，CCD组大鼠脊髓背角WDR神经元兴奋性增高，表现为有自发放电的神经元比例增加、放电频率增加，对外周感受野轻刷、钳夹等刺激的反应性增强。36．36％（12／33）的CCD组大鼠WDR神经元对Aβ纤维刺激出现后放电现象。结论大鼠腰4、5背根节慢性压迫后引起WDR神经元的兴奋性增加，其可能参与神经病理性疼痛的发生。

TNF-α在CCD模型大鼠背根神经节中的表达及机制

目的：探讨TNF-α和NF-κB在背根神经节慢性压迫（CCD）模型大鼠背根神经节（DRG）中的表达变化及其对疼痛学行为的影响。方法：建立CCD大鼠模型,采用von Frey纤维丝监测机械痛阈的改变;通过Western blotting检测TNF-α和NF-κB在DRG中的表达变化趋势,分析其与疼痛行为之间的相关性;并采用免疫荧光双染技术研究TNF-α在DRG中的表达位置。结果：CCD组的50%机械缩足阈值在术后1 d即开始明显下降（P〈0.01）,7~14 d达到高峰,其后逐渐上升,直至术后35 d仍明显低于术前及sham组（P〈0.01）。而DRG上的TNF-α及NF-κB于造模后各时点均显著增多（P〈0.01）,且TNF-α的表达趋势与50%机械缩足阈值显著相关（P〈0.05）。结论：DRG慢性压迫可促进其上的TNF-α和NF-κB的合成和分泌,进而诱发机械痛觉过敏。因此,TNF-α/NF-κB信号通路可能是CCD模型疼痛形成的重要通路之一。

慢性压迫背根神经节大鼠模型背根神经节Wnt5a的表达变化

目的观察Wnt5a在慢性压迫背根神经节(chronic compression of dorsal root ganglia,CCD)大鼠模型背根神经节的表达变化,探索Wnt5a在神经根病中的作用及神经根病中TNF-α与Wnt5a的关系。方法取192只成年雄性SD大鼠随机分为4组,每组48只,分别为假手术组(A组)、CCD组(B组)、CCD+生理盐水组(C组)、CCD+依那西普组(D组)。B、C、D组按照Hu等方法制备CCD模型后,C、D组分别腹腔注射生理盐水(5.5 mg/?kg)和依那西普(5.5 mg/kg);A组仅暴露椎间孔。各组于术后1、3、5、7 d利用von Frey纤维细丝检测大鼠后足机械痛阈值;术后3、7 d分别采用免疫组织化学染色和RT-PCR法检测背根神经节中Wnt5a蛋白和基因表达。结果术后各时间点B、C组机械痛阈值均显著低于A、D组,D组低于A组,差异均有统计学意义(P<0.05);B、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学染色示各组大鼠背根神经节的大、中、小神经元均有Wnt5a表达。除A组外,术后7 d B、C、D组Wnt5a阳性细胞数和Wnt5a mRNA相对表达量均明显高于术后3 d(P<0.05)。术后3、7 d,B、C组Wnt5a阳性细胞数和Wnt5a mRNA相对表达量显著高于A、D组,D组高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05);B、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CCD大鼠模型背根神经节中Wnt5a表达增加,阻断TNF-α后背根神经节Wnt5a表达减少。