电刺激对背根节神经元/Schwann细胞联合培养体系髓鞘蛋白P0表达的影响

目的:建立体外背根节神经元与Schwann细胞联合培养模型,观察短时低频电刺激对Schwann细胞髓鞘蛋白表达的影响。方法:培养和纯化背根节神经元与Schwann细胞,制成背根节神经元/Schwann细胞联合培养体系。于L-ascorbic acid诱导的同时,施予低频电刺激(20Hz,100μs,3V),持续作用1h,分别于L-ascorbicacid诱导后第0,2,4,8和10d取各组培养基上清以ELISA测定其中脑衍生物神经生长因子(BDNF)的水平。另外,于诱导后第7d和14d检测培养体系中髓鞘蛋白P0的表达。结果:电刺激组各时间点BDNF的浓度较对照组显著升高(P<0.01)。经电刺激作用后,联合培养体系中P0表达上调(P<0.05)。然而,电刺激结束后在培养液中加入TrkB-Fc,P0的表达水平则显著降低(P<0.05)。结论:在神经元存在的条件下,短时低频电刺激可促进离体Schwann细胞合成P0,初步认为该作用通过刺激神经元分泌BDNF增多所致。

针刺对备用背根节神经元表皮生长因子表达的影响

成年哺乳动物的脊髓具有可塑性,且针刺可促进脊髓可塑性,但其机制尚不清楚.有实验表明针刺可促进NGF、NT-3在部分去背根动物背根节的表达,表明了针刺可能通过改变背根节部分神经营养因子的表达进而在脊髓可塑性中发挥作用.表皮生长因子（EGF）与神经系统发育及损伤修复有关,但EGF与成体动物脊髓可塑性及针刺促进脊髓可塑性的关系报道不多.本实验拟通过成体猫备用背根模型来初步探讨EGF与脊髓可塑性及针刺促进脊髓可塑性的关系.

大麻素抑制背根节神经元ATP诱发的[Ca^(2+)]i升高

目的:观察大麻素对背根节神经元ATP诱发的[Ca^(2+)]i升高的影响及机制。方法:培养SD大鼠背根节神经元,采用激光共聚焦技术检测培养神经元[Ca^(2+)]i的变化。结果:ATP(100μmol/L)经P2X受体介导可导致培养的背根节神经元[Ca^(2+)]i增高(P<0.05);大麻素受体激动剂CP55940预孵育10 min可剂量依赖性地抑制背根节神经元ATP所致的[Ca^(2+)]i升高(P<0.05);CB1受体(cannabinoid receptor 1,B1R)的拮抗剂AM251(10μmol/L)、CB2受体(Cannabinoid receptor 2,CB2R)的拮抗剂AM630(10μmol/L)均可显著降低CP55940(1μmol/L)的抑制效应(P<0.05);腺苷酸环化酶激动剂Forskolin(10μmol/L)可逆转CP55940对ATP的抑制作用(P<0.05)。结论:CP55940可显著抑制背根节神经元ATP诱发的[Ca^(2+)]i升高,CP55940的抑制效应可能是由CB1、CB2受体介导抑制背根节神经元PKA活性所致。

大鼠腰后段背根节神经元周围突的分支分布——荧光素双标记法研究

本研究应用2组荧光素配伍(FB-NY,PI-Bb)的双标记技术,进行了下列3组实验:1.将各配伍组的2种荧光素分别注入大鼠一侧胫神经干和腓神经干;2.分别注入一侧的腓肠皮神经和小腿三头肌神经:3.分别注入胫神经和同侧膀胱壁内。前两组在注入侧 L_(4～8)背根节内用荧光显微镜观察到的标记细胞中约12%为双标记细胞;而第3组仅在注入侧 L_6背根节中见到少量双标记细胞。双标记细胞的大多数为小型(33.1%)和中小型(40.9%)细胞。本文结果表明:背根节细胞周围突有相当一部分是分叉的,它们的2个分支或分布于2条躯体神经,或分别分布于皮肤和肌肉,甚至可分别分布于躯体和内脏的不同感受野。这一结果为阐明牵涉痛和针刺对内脏活动调控的神经机制,提供了一定的形态学基础。

NGF,BDNF和NT-3在培养鸡胚背根节神经元的表达

目的 探讨NGF ,BDNF ,NT - 3在体外培养鸡胚背根节神经元中的表达变化。方法 采用NGF ,BDNF ,NT - 3的兔抗血清分别对培养前后的鸡胚背根节神经元以免疫组化ABC法染色。观察NGF、BDNF和NT - 3在培养前、后鸡胚背根节神经元的表达情况 ,计数并比较培养前、后三种因子免疫阳性神经元百分数。结果 未培养的神经元 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :10 %± 3%,2 7%± 5 %,2 9%± 7%。培养 48小时后 ,NGF ,BDNF ,NT - 3的阳性神经元百分数分别是 :77%± 6 %,6 4%± 7%,2 4%± 7%。结论 培养后NGF ,BDNF的表达较未培养者增加 (P <0 0 1) ,而NT - 3者则有减少 (P <0 0 5 )。提示在体外培养的鸡胚背根节神经元NT - 3的表达有不同于NGF和BDNF的调节方式。

焦亚硫酸钠对大鼠背根节神经元钾电流的影响

应用全细胞膜片钳技术,研究SO2体内衍生物和食品添加剂———焦亚硫酸钠(sodiummetabisulfite,SMB)对大鼠背根节(DRG)神经元瞬间外向钾电流(TOCs)和延迟整流钾电流(IK)的影响.结果表明,SMB可增大TOCs和IK,且具剂量依赖性和电压依赖性.10μmolL-1的SMB不影响TOCs的激活过程,给药前后TOCs的半数激活电压为(3.15±2.29)mV和(4.72±1.92)mV(N=8,P>0.05),不改变其斜率;但10μmolL-1的SMB却非常显著地影响TOCs的失活过程,给药前后其半数失活电压分别为(-53.6±0.45)mV和(-38.85±0.68)mV(N=8,P<0.01),也不改变其斜率.10μmolL-1的SMB显著提前IK的激活过程,给药前后IK的半数激活电压为(-11.98±3.50)mV和(-33.21±5.67)mV(N=8,P<0.01),不改变其斜率.SMB显著增大TOCs和IK,使IK的激活过程提前,抑制TOCs的失活过程,从而导致细胞内K+通过K+通道外流增加,进而可能对DRG神经元功能产生不利影响.

缓激肽对背根节神经元钠通道电流的作用

目的 :观察缓激肽 (bradykinin ,BK)对大鼠背根节神经元电压依赖性钠通道电流的作用。 方法 :采用全细胞膜片钳技术 ,记录钠通道电流。结果 :缓激肽剂量依赖性 (0 .0 1～ 10 μmol/L)增高小细胞背根节神经元诱发放电频率 ;缓激肽剂量依赖性 (0 .0 1～ 10 μoml/L)增加小细胞背根节神经元的河豚毒素不敏感 (TTX resistant,TTX -R)钠电流 ,对TTX敏感 (TTX sensitive ,TTX S)钠电流无明显影响。结论 :缓激肽引起炎性痛的机制可能与TTX R钠通道电流有关。

利鲁唑对大鼠背根节神经元诱发簇放电的抑制作用及电流机制

目的 探讨利鲁唑（riluzole）对慢性背根节压迫（chronic compression of dorsal root ganglion,CCD）模型大鼠背根节（dorsal root ganglion,DRG）神经元诱发簇放电（evoked-bursting,EB）的抑制作用及电流机制.方法 33只健康SD大鼠,随机分为正常对照组（n=13）及CCD模型组（n=20）,进行离体膜片钳全细胞记录.结果 CCD术后DRG神经元EB发生率增高,达53%（44/83）,与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;DRG局部给予利鲁唑（1、10、100 μmol/L）浓度依赖性抑制持续性钠电流（persistent sodium current,INaP）,100 μmol/L利鲁唑可抑制阈下膜电位振荡幅度及EB放电.结论 利鲁唑通过阻断INaP抑制EB放电而发挥外周镇痛作用.

蛋白激酶A参与介导大鼠受损背根节神经元的自发放电

目的 :在背根节 (DRG)慢性压迫模型上 ,采用单纤维记录神经元自发放电和生化检测受损组织中蛋白激酶A(proteinkinase ,PKA)活性的方法 ,研究PKA在DRG压迫损伤后感觉神经元中自发放电的作用。结果 :压迫损伤侧DRG组织中的PKA磷酸化PepTag肽百分数为 2 5 .5 1± 2 .6 2 % ,较未受压迫侧和正常组DRG组织明显增加 (P <0 .0 5 )。PKA催化亚单位抑制剂H 89(1 0 μM )可以明显抑制受损DRG神经元的自发放电 ,抑制百分数为 76 .91± 1 3.79%。结论 :受损DRG组织中PKA活性上调 ,高活性的PKA参与介导受损DRG神经元的自发放电。

CCK－8可对抗μ－阿片受体介导的对大鼠背根节神经元钙通道的抑制效应

ＣＣＫ－８在脊髓水平可对抗μ－阿片受体介导的抗伤害性作用，但其作用位，点及机制尚不清楚。本实验以急性分离的大鼠背根节（ＤＲＧ）神经元为标本，用全细胞膜片钳（ｗｈｏｌｅ－ｃｅｌｌｐａｔｃｈ－ｃｌａｍｐ）方法记录钙通道电流，观察分析特异性μ－受体激动剂羟甲芬太尼（ＯＭＦ）对电压依赖性钙通道电流的作用，以及在同一细胞上ＣＣＫ－８对此作用的影响。结果显示ＯＭＦ可明显抑制钙通道电流，其抑制作用可被μ－受体拮抗剂纳络酮或ＣＣＫ－８所翻转，而ＣＣＫ－８的作用又可被ＣＣＫ－Ｂ受体拮抗剂Ｌ３６５，２６０所对抗。结果提示：ＣＣＫ－８可在同一细胞上经ＣＣＫ－Ｂ受体对抗阿片效应。ＣＣＫ－８本身对钙通道电流并无增强效应，相反它可引起抑制作用。关于ＣＣＫ－８如何对抗μ－受体介导的机制有待进一步研究。

坐骨神经源性因子对培养中成年青蛙背根节神经元的作用

【目的】探讨离断的坐骨神经 (sciaticnerve,SN)分泌的可溶性因子对培养中的成年青蛙背根神经节 (dorsalrootganglion ,DRG)神经突起生长及形态学的影响。【方法】分离成年青蛙DRG神经元培养于含有离断的SN条件性培养基(SNCM)中 ,检测SNCM促进神经突起生长的量效和时效作用及对生长的神经突起形态学的影响。【结果】在 0 1～ 5mg/L蛋白质量浓度范围内 ,SNCM促进神经突起生长的作用有蛋白质量浓度依赖关系。在培养的第 1天 ,实验组平均神经突起长度是对照组的 3 9倍 ,培养 3d后实验组神经元突起平均长度已达对照组神经元的 9 2倍 ,实验组和对照组两者有显著的差异 (P <0 0 0 1)。且实验组神经元生长出的突起缺乏对照组神经元那种典型的片层状伪足。活性因子的分子质量介于 30～10 0ku之间。【结论】离断的外周神经可释放可溶性的因子促进离体培养的成年DRG神经元突起的生长并影响突起的形态。

神经营养因子4在成年大鼠背根节神经元的分布

目的 探讨神经营养因子 4(NT - 4)与成年大鼠背根节神经元的关系。方法 本文用特异的NT - 4抗血清以免疫组织化学方法观察了NT - 4在成年大鼠背根节L6节段神经元中的分布。结果 NT - 4的免疫阳性反应物分布背根节的各型神经元 ,胞浆染色。结论 NT - 4可能与成年大鼠背根节神经元的生理功能有关。

GDNF对缺气损伤的体外培养新生大鼠背根节神经元的作用

运用体外缺气损伤的细胞模型 ,研究GDNF对损伤的新生大鼠背根节神经元( DRG)是否有保护作用。采用原代培养的方法 ,用 N1无血清培养基分离培养 DRG神经元 2 4h后 ,加入含 2 0 μg/m L GDNF的无血清培养液 ,然后液体石蜡封闭培养液 ,继续培养 4,8,1 2 ,2 4h,分别做 MTT实验检测细胞活性 OD值 ,台盼蓝染色记数 ,细胞总蛋白测定以及形态学观察突起生长状况。结果表明 :1封闭 1 2 h后 ,GDNF组的 DRG细胞存活数同对照组相比有显著升高 ( * * P <0 .0 1 ) ,其余各时间点均无显著性差异。缺气损伤 8h和 1 2 h后 ,GDNF组的 DRG细胞总蛋白较对照组显著升高 ( * * P <0 .0 1 ,* P <0 .0 5) ,其余各时间点均无显著性差异 ;2各时间点 DRG细胞活性及突起长度的变化差异均不显著。缺气损伤一定时间后 ,GDNF对新生大鼠 DRG细胞的存活数及细胞总蛋白有明显的保护作用 ,而对细胞活性及突起的生长则没有明显的促进作用。

低剂量锰对背根节神经元自发放电的兴奋作用

目的探讨低剂量锰对周围神经系统的毒性作用。方法采用离体灌流背根节(DRG)和单纤维记录神经元自发放电的方法,观察不同剂量氯化锰对DRG神经元自发放电的影响。结果不同浓度氯化锰对有自发放电的神经纤维有兴奋作用,随着剂量增加,兴奋作用增强,呈现一定的剂量关系。但氯化锰对静息神经纤维无兴奋作用。不同剂量氯化锰对自发放电频率的兴奋作用呈现不同模式,1μmolLMnCl2作用后,放电频率持续增高。5μmolLMnCl2作用时,放电频率短时间增加后恢复到对照水平,50μmolLMnCl2作用则呈现放电频率先增高后降低的趋势。结论锰对DRG神经元自发放电有兴奋作用,这可能与轻度锰中毒时出现的感觉异常有关。

阿片肽对背根节神经元电活动的影响及八肽胆囊收缩素和血管紧张素Ⅱ的抗阿片作用

应用细胞内记录方法分别观察μ、δ和κ阿片受体激动剂DAMGO、DPDPE及U50488H对成年大鼠离体背根节神经元（dorsalrootganglion，DrG）动作电位和膜电位的作用．结果显示：DAMCO和U50488H能缩短DRG神经元动作电位的Ca2+成分电位的时程．在静息膜电位水平，DAMGO和DPDPE（100nmol～1μmol/L）能引起大部分DRG神经元（DAMGO：42．7％，DPDPE：36．45％）产生超极化和小部分神经元（DAMGO：7．29％，DPDPE：11．45％）产生去极化反应，这些反应能分别被μ-和δ-阿片受体的选择性桔抗剂β-FNA及Naltrindole阻断；同浓度的U50488H对DRG神经元膜电位没有明显影响．八肽胆囊收缩素（cholecystokininoctapetide，CCK－8）能完全翻转DAMGO的超极化作用．CCK－8的翻转作用能被CCKB受体桔抗剂L365260取消．血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AⅡ）翻转有些DRG神经元的DPDPE的超极化作用，而对一些神经元的DPDPE介导的超极化反应无效．AⅡ受体的选择性粘抗剂saralasin阻断AⅡ的翻转作用．结果揭示：μ-阿片受体能介导抑制动作电位中的Ca2+电流和降低细胞膜的兴奋性；δ-阿片受体主要介导对膜兴奋性的抑制；κ-阿片受体仅介导抑制动作电位中的Ca2+电流，CCK和AⅡ的抗阿片作用是通过细胞内机制起作用，而不是通过直接的通?

焦亚硫酸钠对大鼠背根节神经元胞内钙离子浓度的影响

目的:探讨一种食品添加剂焦亚硫酸钠(SMB)对大鼠背根节神经元(DRG)的生理作用和毒性效应。方法:急性分离大鼠背根节神经元细胞后,应用Ca2+荧光指示剂Fura-2/AM标记细胞检测大鼠DRG神经元细胞内钙离子浓度的变化。结果:SMB可增大大鼠背根神经元胞内钙离子浓度。结论:SMB可以引起大鼠背根神经元胞内钙超载,进而可能导致一系列与钙离子浓度有关的中枢神经系统损伤。

坐骨神经损伤与再生过程中背根节神经元基因表达模式分析

目的:探讨坐骨神经损伤与再生过程中,背根节神经元轴突再生的分子调控模式和机理。方法:采用表达谱芯片分析坐骨神经离断后,L4-6背根节神经元基因表达的变化,并分析差异基因所反映的核心生物学过程的变化。结果:(1)坐骨神经离断后,近端坐骨神经差异基因的数量表现为先上升再下降的趋势,但背根节神经元呈现为波浪形的增加。(2)核心生物学过程的差异基因数量变化:刺激检测、G-蛋白偶联受体信号通路、细胞表面受体连接信号转导均呈波浪形变化。防御反应、炎症反应、免疫反应、轴突生成表现为持续性增加。(3)与轴突生成相关的差异基因表达变化结果显示:Lhx4、Nkx2-9、Efnb3、Titf1、Apoa4表现为波浪形增加。Mapk8ip3、Zfp312、Gap43在长时间点表达增加。Tnn、Efnb1一开始降低,Notch1、Nefl、Bmpr1b等基因表现为长时间点表达降低。结论:坐骨神经离断后,背根节神经元差异基因和核心生物学过程的变化趋势,反映了周围神经损伤与再生过程中轴突再生的分子调控模式。

嗅觉受体在背根节神经元和坐骨神经中的表达与鉴定

目的:探讨背根节神经元和坐骨神经中存在嗅觉受体基因的表达。方法:采用表达谱芯片检测坐骨神经离断后嗅觉受体在背根节神经元和近端坐骨神经中的表达变化,并用RT-PCR验证芯片结果。结果:背根节神经元和坐骨神经中存在嗅觉受体的表达,而且在坐骨神经离断后它们的表达发生显著改变。结论:首次报道了嗅觉受体在背根节神经元和坐骨神经中的表达,推测嗅觉受体可能在坐骨神经离断后与检测各种刺激信号相关。

利多卡因对背根节神经元诱发簇放电的影响及机制

目的探讨低浓度利多卡因对慢性背根节压迫(CCD)模型大鼠背根节(DRG)神经元诱发簇放电(EB)的影响及电流机制。方法 24只SD大鼠分为正常对照组和CCD组,每组12只。CCD组用小钢柱在左侧腰4、5背根节行慢性压迫,正常对照组未做任何处理。应用在体细胞内技术记录2组大鼠EB放电的发生率及利多卡因对阈下膜电位振荡的影响,用离体全细胞膜片钳技术记录不同浓度利多卡因对持续性钠电流(INa P)的影响。结果 CCD组EB发生率增高,达45.97%(57/124),和正常对照组相比差异有统计学意义(χ2=26.810,P<0.01);DRG局部给予低浓度(50μmol/L)利多卡因抑制INa P,致阈下膜电位振荡幅度抑制,进而影响EB发生。结论低浓度利多卡因通过阻断INa P抑制EB放电而发挥外周镇痛作用。