母血浆中胎儿游离核酸与无创性产前亲子鉴定

近年来,涉及胎儿亲权鉴定的案例逐渐增多。传统胎儿产前亲权鉴定常需有创性取样,故存在一定的风险。母血浆中胎儿游离核酸的发现,给无创性产前亲权鉴定带来了新的契机。本文主要就母血浆中胎儿游离核酸及其在无创性产前亲权鉴定中的应用价值和前景进行简要介绍。

基于母体血浆胎盘源及胚胎源核酸分子的早期妊娠诊断及早期胎儿性别鉴定技术

动物早期妊娠诊断及早期胎儿性别鉴定是繁殖技术中的关键技术。奶牛早期妊娠诊断可及时消除配种后假孕、妊娠后假发情等不利因素,胎儿性别早期鉴定可提高母牛犊的出生比例。近年来,随着孕妇血浆/血清中的胎儿源性游离DNA及胎盘源性游离RNA的发现,使人的早期性别鉴定技术及产前早期诊断技术的研究取得突破性进展;同时也使胎盘特异性表达基因的无创伤性研究成为可能。这些均为单胎动物,特别是奶牛的早期妊娠诊断及早期性别鉴定技术提供了理论依据及技术支持。

无创产前筛查中胎儿游离DNA比例的影响因素分析

目的分析无创产前筛查(NIPS)中影响胎儿游离DNA(cffDNA)比例的因素,探讨cffDNA比例偏低造成NIPS检测失败的原因,为不同孕妇制订个体化的产前遗传学检测方案提供参考。方法对4268例进行NIPS检测的孕妇跟踪随访至胎儿出生,并对孕妇的相关资料进行收集,分析孕妇孕周、体质量指数(BMI)、年龄、妊娠单双胎、标本运输时间与血浆cffDNA比例的相关性,并对cffDNA比例<3.5%的标本重新采血后进行检测,探讨标本重新采血的可行性。结果cffDNA比例与孕周呈正相关(r=0.113,P<0.05)。cffDNA比例与孕妇BMI和年龄呈负相关(r=-0.261、-0.088,P<0.05)。妊娠单双胎和标本运输时间与cffDNA比例无相关性(P>0.05)。cffDNA比例<3.5%的孕妇经重新采血后检测,50%的孕妇能够得到检测结果。结论cffDNA比例与孕周呈正相关,与孕妇BMI、年龄呈负相关。临床可根据筛查对象的BMI、年龄、孕周制订个体化的采血时间,对于肥胖、年龄较大的孕妇可适当将筛查孕周后移。

无创产前筛查中孕妇年龄对胎儿游离DNA的影响

目的探究孕妇年龄对无创产前筛查(NIPT)检测中胎儿游离DNA(cffDNA)浓度的影响,为NIPT技术在高龄孕产妇中的临床实施提供参考。方法收集2020年10月至2021月9月在岳阳市中心医院实施NIPT检测的884例孕妇的相关资料,筛选孕妇的年龄分布,采用Spearman相关性分析年龄与外周血cffDNA浓度的相关性。结果884例孕妇平均妊娠年龄(30.9±4.5)岁,外周血平均cffDNA浓度为(25.3±7.1)%,其中,21岁孕妇cffDNA的浓度最高,达(29.2±3.8)%,而36岁孕妇平均cffDNA浓度比例最低,仅为(21.6±6.9)%;经Spearman相关性分析结果显示,孕妇的年龄总体上与cffDNA浓度呈负相关(r=-0.105,P<0.05);此外,高龄组孕妇(≥35岁)的cffDNA浓度为(24.1±7.0)%,低于低龄组孕妇(<35岁)的(25.7±7.1)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论目前孕产妇呈高龄妊娠趋势,而孕妇年龄的增加会导致cffDNA浓度比例的降低。

羊水悬液中游离胎儿核酸在产前诊断中的作用

传统的产前诊断方法是在妊娠中期通过羊膜腔穿刺获取羊水,从羊水中分离胎儿细胞进行培养,对胎儿的染色体异常进行诊断。近年研究证实在羊水悬液中存在大量游离胎儿核酸,可利用从羊水悬液中提取的游离胎儿DNA和RNA,对胎儿的染色体异常和胎儿发育状况进行诊断和评估。这些发现使利用废弃的羊水悬液获取胎儿遗传物质进行产前诊断成为可能,为研究胎儿发育和病理状态开辟了一条新的途径。作者现将近年的相关研究进行综述如下。

应用胎儿细胞游离核酸物质诊断唐氏综合征研究进展

唐氏综合征（Downsyndrome，DS）是一种人类常见的染色体异常疾病，又名21-三体、先天愚型，主要表现为非进行性智力低下并伴有心脏和其他器官的先天畸形，活产儿发病率约为1／800。随人类产前保健意识及优生优育观念的增强，唐氏综合征患儿的出生率虽有所降低，但针对它的传统产前诊断方法（中孕期绒毛膜取样、羊膜腔或脐血穿刺）因有创操作等局限性的存在不能被孕妇普遍接受，

母体血浆胎儿核酸分析应用于地中海贫血的无创性产前诊断

地中海贫血（地贫）是世界上最常见的单基因遗传病之一，通过产前诊断淘汰受累重型患儿是目前世界上公认的地贫首选预防措施。母血浆胎儿游离核酸的发现为地贫的无创性产前诊断提供了新的途径。近些年来，针对地贫遗传缺陷（特别是β地贫点突变）的母血浆胎儿游离DNA检测技术，如飞行时间质谱分析、分子大小分离法、肽核酸介导的突变序列富集方法和数字化PCR等技术的发展使开展地贫的无创性产前诊断成为现实，这些技术的进一步发展有望推动无创性产前诊断在其他人类单基因病上的应用。本文除重点阐述与地贫相关的研究外，也对该领域技术发展和应用的整体现状进行了综述。

全球无创产前检测专利现状及发展趋势

本文基于全球无创产前检测(NIPT)相关专利文献,对全球专利申请态势、专利布局、创新主体以及中国专利申请法律状态进行分析,详细介绍中国专利技术分支。分析表明,中国NIPT领域与全球领先技术还有一定差距,但差距不是很大,且在相关政策支持下正在蓬勃发展。华大基因的申请数量和质量均占据一定优势,走在中国甚至世界前列。中国本土主流测序公司均具有一定的专利储备,新兴检测公司发展势头迅猛。与此同时,中国NIPT专利获得有效保护的专利占比不高,申请和保护策略有待提高。

NIPT在不同预产年龄孕妇中筛查价值的比较研究

目的探讨无创产前基因检测(non-invasive prenatal testing,NIPT)在不同预产年龄孕妇中的筛查价值。方法收集2020年1月至2020年12月间于北京市贝瑞和康基因诊断实验室进行NIPT检测的牡丹江地区孕妇的临床资料,包括检测日期、检测孕周、预产期年龄、体重指数(BMI)、家族史、产前筛查模式等,对符合纳入及排除标准的1295例孕妇提供遗传咨询并继续随访,入组孕妇均完成妊娠结局和新生儿随访(至少至分娩后12周),对于NIPT筛查结果为阳性者建议行羊膜腔穿刺取羊水细胞培养完成染色体核型分析。将临床资料、产前筛查及诊断结果等进行统计分析,分别评估NIPT的筛查能力、讨论NIPT在高龄组和适龄组孕妇中的筛查价值。结果1295例孕妇经NIPT检测阳性者13例,核型分析提示异常者10例,随访结果与产前诊断结果相符,NIPT检测灵敏度100%、特异度99.77%、误诊率0.23%、漏诊率为0%,PPV为76.92%,NPV为99.76%。传统产前筛查阳性孕妇经NIPT后侵入性诊断率仅为1.39%(6/431),≥35岁经NIPT后侵入性诊断率仅为0.90%(2/221)。尚不能认为≥35岁与<35岁(χ^(2)=0,P=1)NIPT检测阳性率不同,NIPT在不同预产年龄孕妇中也可能取得相同的筛查效果。结论NIPT在单一高龄为高危因素的孕妇中可能仍具有较高的筛查价值。

运用巢式PCR方法进行无创性产前诊断的研究

目的探讨巢式PCR方法应用于胎儿无创性产前诊断的可行性。方法巢式PCR扩增SRY基因。结果实验共检查62例孕妇,阳性结果 29例,阴性结果 33例。与羊水细胞核型结果对照,特异度100%,灵敏度96.67%。结论运用巢式PCR方法进行无创性产前诊断准确度高,具有可行性,并能为产前无创伤性诊断胎儿常见非整倍体打下基础。

无创DNA检测在双胎唐氏综合征产前筛查中应用价值研究

目的探讨无创DNA检测在双胎唐氏综合征产前筛查和诊断中的临床应用价值。方法收集2015年6月至2016年6月在天津市妇女儿童保健中心门诊进行围产保健的双胎孕妇共445例,进行血清标志物(AFP+β-h CG)二联指标检测,同时运用Illumina Hiseq2000测序技术对孕妇外周血中的游离DNA片段(含胎儿游离DNA)进行高通量测序及统计分析,对筛查高风险者进一步通过羊水穿刺进行染色体核型分析,低风险者随访至产后。结果行唐氏综合征血清学筛查392例,高风险31例,阳性率和假阳性率分别为7.91%、7.14%,检出率75%,特异度93.27%;无创DNA检测442例,唐氏综合征阳性孕妇5例,阳性率和假阳性率分别为1.13%、0.23%,检出率100%,特异度99.77%。两种方法用于唐氏综合征产前筛查的差异有统计学意义(P<0.01)。结论无创DNA检测可应用于双胎孕妇唐氏综合征产前筛查,有效减少出生缺陷儿的出生。