^(A)γ-珠蛋白基因启动子区域-114~-102缺失突变导致非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征的研究

目的:研究^(A)γ-珠蛋白基因启动子区域-114~-102缺失突变病例的基因突变特点、血液学表型及临床表型。方法:选取2022年3月至2023年12月在广西医科大学第一附属医院检查地中海贫血的病例4例。血红蛋白(Hb)分析仪和血细胞分析仪检测全血样本,分析Hb和血常规。Sanger测序法与荧光PCR熔解曲线法检测γ-珠蛋白基因启动子区突变和β-珠蛋白基因突变。结果:共检出^(A)γ-114~-102缺失杂合子4例,Hb分析显示血红蛋白F(Hb F)水平为11.2%~37.8%,血红蛋白A2(Hb A2)水平为2.0%~3.3%,血常规分析显示Hb水平为67~114 g/L,红细胞计数(RBC)为(2.33~4.1)×10^(12)/L,平均红细胞体积(MCV)为84.02~91.9 fL,平均红细胞血红蛋白(MCH)为27.8~29.7 pg。γ-珠蛋白基因及β-珠蛋白基因突变检测结果表明:4例病例含有^(A)γ-114~-102缺失杂合子,其中2例合并有^(G)γ-158C>T突变杂合子;4例病例均合并有β-珠蛋白基因突变,基因型分别为Codon 41-42(-TTCT)杂合子突变、Codon 41-42(-TTCT)纯合子突变、IVS-Ⅱ-654(C>T)复合Codon 41-42(-TTCT)突变和Codon17(A>T)复合Codon 71-72(+A)突变。结论:首次在中国人群中发现^(A)γ-114~-102缺失杂合子,且复合β-地中海贫血的病例,临床表现为轻度或中度贫血。^(A)γ-114~-102缺失突变导致非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征(nd-HPFH),能够减轻β-地中海贫血患者的贫血程度。

溶血三项试验及碳氧血红蛋白在胎儿新生儿溶血病诊断中的价值

目的 探讨溶血三项试验及碳氧血红蛋白(COHb)在胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn, HDFN)诊断中的价值。方法 选取2019年1月1日—2022年12月31日于本院新生儿科住院、疑似溶血病并送血清学检查的患儿,其中临床诊断为HDFN的患儿作为溶血组,排除HDFN的患儿作为对照组,对患儿临床及实验室资料进行回顾性收集及分析。COHb水平通过血气分析仪检测获得。结果 溶血组共纳入378例,对照组纳入217例,其中溶血组以足月儿为主(348/378, 92.1%),胎龄39.1(38.3, 40.0)周,354例(354/378,93.7%)为ABO-HDFN,其余为Rh-HDFN;溶血组与对照组间在入院时血清总胆红素、血红蛋白水平、COHb、网织红细胞百分比方面差异有统计学意义(P<0.05)。溶血组溶血三项试验阳性率随日龄增大而降低,2 d内阳性检出率高达80%以上,日龄与COHb之间存在负相关(rs=-0.434,P<0.001)。溶血组释放试验(69.0%)阳性率高于游离试验(55.6%)和直接抗人球蛋白试验(DAT)(36.0%)。建立受试者工作(ROC)曲线,取COHb≥1.15%为最佳截断值,灵敏度51.8%,与溶血三项试验联合并不能显著增加后者对HDFN的诊断效能(Z=-0.727,P>0.05),但其灵敏度高于单项DAT(36.0%)。结论 溶血三项试验对HDFN的诊断有重要价值,释放试验灵敏度最高。COHb对HDFN有一定诊断价值,但联合检测并不能显著增加溶血三项诊断效能。对于存在溶血风险的患儿,生后应尽早送检溶血试验及/或COHb检测。

血液中胎儿血红蛋白水平与早产儿视网膜病发病的关系

目的探讨出生时胎龄<32周早产儿生后早期动脉血胎儿血红蛋白(HbF)水平与早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity,ROP)发病的关系。方法选择2019年3月—2022年2月我院新生儿科收治的出生时胎龄<32周的早产儿99例,根据是否诊断为ROP,分为ROP组(34例)和非ROP组(65例)。比较两组患儿的临床资料,采用Logistic回归法分析患儿生后2周动脉血HbF水平与ROP的相关性。结果ROP组患儿出生时胎龄以及出生体质量均显著低于非ROP组(t=3.371、3.218,P<0.05),出生时胎龄<28周患儿构成比、出生体质量<1000 g患儿构成比、顺产患儿构成比、生后2周内输血患儿构成比,以及用氧时间与住院时间均显著高于或长于非ROP组(χ^(2)=4.390~11.579,Z=3.283、5.207,P<0.05)。ROP组患儿生后2周动脉血血红蛋白(Hb)水平及HbF比例均显著低于非ROP组(t=-2.791、-3.599,P<0.05)。Logistic回归法分析显示,动脉血HbF比例降低是ROP发生的危险因素(OR=0.915,95%CI=0.849~0.987,P<0.05)。结论出生时胎龄<32周早产儿生后2周动脉血HbF比例降低是ROP发生的危险因素,维持较高的动脉血HbF水平可能对临床ROP的发生具有预防作用。

妊娠期糖尿病病人血清胱抑素C、糖化血红蛋白水平与胎儿心功能的关系

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)病人血清胱抑素C(Cys-C)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平与胎儿心功能的关系,以期为临床及早判断GDM病人胎儿心功能异常提供参考。方法选取2018年12月至2020年1月河北省秦皇岛市妇幼保健院诊治的GDM孕妇75例为GDM组,并纳入同期体检健康孕妇75例为对照组。比较两组一般资料及血清Cys-C、HbA1c水平;测定胎儿(孕24~28周)心功能参数等容舒张时间(IRT)、射血时间(ET)、等容收缩时间(ICT),计算心肌做功指数(MPI);Pearson法分析GDM病人血清Cys-C、HbA1c水平与ICT、ET、IRT、MPI,及血清Cys-C水平与HbA1c的相关性。结果GDM组病人血清Cys-C[(1.71±0.57)mg/L比(0.53±0.18)mg/L]、HbA1c水平[(9.73±3.24)%比(5.47±1.82)%]及胎儿ICT[(43.14±9.53)ms比(39.72±8.75)ms]、IRT[(44.82±6.62)ms比(41.13±6.09)ms]、MPI水平(0.55±0.11比0.50±0.10)均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);GDM病人血清Cys-C、HbA1c水平与MPI均呈正相关(r=0.49、0.54,P<0.05),血清Cys-C水平与HbA1c呈正相关(r=0.58,P<0.05)。结论CysC、HbA1c在GDM病人血清中呈高水平,二者均与MPI呈正相关,临床及时监测GDM病人血清Cys-C、HbA1c水平,有助于预防GDM病人胎儿的心功能异常。

妊娠期阴道出血时血红蛋白F(HbF)对鉴别母体血与胎儿血的作用研究

目的通过检测孕妇阴道血中含血红蛋白F的红细胞,诊断孕妇阴道血中是否含有胎儿血,为临床医生正确处理妊娠期孕妇阴道出血,降低胎儿和孕妇的死亡率提供帮助。方法应用洗脱和染色方法可使HbF呈鲜红色,含其它血红蛋白的红细胞只留下淡影的细胞膜,利用此方法能区别含HbF的红细胞。结果孕妇妊娠期出现阴道出血,如果血来自胎儿血则血红蛋白F酸洗脱试验呈阳性,HbF红细胞含量>17%,如果出血来自孕妇本身,则血红蛋白F酸洗脱试验呈阴性或有少量HbF红细胞(<6%)。结论妊娠期阴道出血时检测出含胎儿血(血红蛋白F的红细胞),说明胎儿在宫内有出血现象,结合B超诊断,如果提示胎儿还活着,立即行剖宫产以结束妊娠,挽救孕妇和胎儿的生命是主要方法和有力措施。HbF红细胞的检测对鉴别胎儿血与母体起着决定性的作用。

血红蛋白H病复合非缺失型遗传性胎儿血红蛋白持续存在综合征44例临床分析

目的:探讨复合非缺失型遗传性胎儿血红蛋白持续存在综合征(nd-HPFH)对血红蛋白H病(Hb H病)的影响。方法:收集2022年1—12月在广西医科大学第一附属医院进行地中海贫血筛查诊断为Hb H病的患者148例,对研究对象进行血常规检查,采用高效液相色谱法进行血红蛋白(Hb)分析;DNA测序方法检测γ-珠蛋白基因突变;荧光PCR熔解曲线法和Gap-PCR法检测α-和β-地中海贫血基因突变。结果:148例Hb H病患者中,检出44例复合nd-HPFH,检出率为29.7%,基因突变类型为^(G)γ-158C>T突变杂合子27例,^(A)γ-225~-222缺失杂合子13例,^(G)γ-158C>T突变纯合子2例,^(G)γ-158C>T突变杂合子复合^(A)γ-225~-222缺失纯合子1例,^(G)γ-158C>T突变杂合子复合^(A)γ-225~-222缺失杂合子1例。Hb分析结果显示,1例胎儿血红蛋白(Hb F)升高,为5.3%;血常规检查结果:轻度贫血19例,中度贫血24例,重度贫血1例。地中海贫血基因检测结果:--^(SEA)/α^(CS)α20例、--^(SEA)/-α^(3.7)13例、--^(SEA)/-α^(4.2)9例、--^(SEA)/α^(QS)α1例和--THAI/-α^(3.7)1例。结论:nd-HPFH基因突变在Hb H病患者中有较高的检出率,nd-HPFH复合Hb H病临床贫血表现存在差异;此类患者大多数Hb F正常,临床上容易漏诊。

基于GBDT算法的胎儿血红蛋白含量的预测

本文旨在使用BCL11A、Xmm1-HBG2、HBS1L-MYB三个基因以及镰刀型细胞贫血症类型等特征值建立一个模型来预测病患体内HbF的百分比含量。最后本文创建了一个以GBDT算法为基础的模型,并与多种算法进行了对比。

药物诱导胎儿血红蛋白(HbF)治疗β地中海贫血研究进展

地中海贫血是β珠蛋白基因缺陷所致的遗传性血红蛋白病,近年的研究重新提及了药物诱导胎儿血红蛋白(HbF)的治疗意义,主要通过增加γ链的表达,减轻α、β链的不平衡,从而改善贫血严重程度。药物试验,如羟基脲、沙利度胺和地西他滨,均显示治疗后血红蛋白升高,输血依赖降低,贫血以外的症状减轻。另外,体外实验则提示,其他药物亦具有诱导HbF的潜能,这为安全有效的HbF诱导剂提供了重要线索。本文就目前的研究进展作一综述,以期有助于临床治疗。

羟基脲诱导胚胎样血红蛋白表达对小鼠缺氧的改善作用

目的 探讨羟基脲(hydroxyurea,HU)对密闭缺氧小鼠的保护作用及机制。方法 将60只6~8周龄、体质量18~22g的雄性C57BL/6J小鼠随机分成常氧对照组(NC组,n=10)、常氧HU组(NHU组,n=10)、缺氧对照组(HC组,n=20)、缺氧HU组(HHU组,n=20)。HU组每天腹腔注射HU100mg/kg;对照组每天注射等量生理盐水。4周后取NHU组和NC组小鼠的骨髓进行转录组测序;再将HHU组和HC组置于密封瓶,进行密闭缺氧,记录其生存时间;在缺氧15min时,取脑、肾组织进行免疫组化,同时取未缺氧的NHU组和NC组脑、肾组织进行对照;并对骨髓进行RT-qPCR验证,外周血进行Westernblot验证。结果 HHU组小鼠密闭缺氧的生存时间显著延长(P<0.05);脑和肾脏缺氧程度显著降低(P<0.05)。外周血氧亲和力显著提高,且P50与小鼠生存时间存在显著的负相关关系(Pearson=-0.738,P<0.01)。转录组共检测到65389个基因,其中NHU组上调基因50个,下调基因272个(|log2FC|≥1,Q<0.05),对差异显著的基因进行功能富集,结果发现在分子组成上,血红蛋白复合体居于首位;分子功能上,主要富集到影响血红蛋白各亚基结合的分子;生物学功能上主要富集到红细胞发育相关的生物学过程。差异分子中,Erfe、Hbb-y、Hbb-bh1、Hba-x>1.5倍以上,而下调基因有红系发育相关基因Klf1、Sox6、Gata1等;经验证,NHU组Hbb-y、Hbb-bh1、Hba-x的mRNA显著升高,外周血HbE(ε-globin)蛋白表达增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 HU对密闭缺氧小鼠具有明显的保护作用,可能与HU诱导高氧亲和力的胚胎样血红蛋白表达,从而促进携氧的作用有关。

2例遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症患者糖化血红蛋白测定的分析

地中海贫血基因检测发现两姐妹均患有遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症（HPFH），对其进行糖化血红蛋白检测，姐姐糖化血红蛋白Alc（HbAlc）未检出，妹妹HbAlc为5．9％，现报道如下。

外周血胎儿血红蛋白、胎盘生长因子及子宫动脉搏动指数对早发型子痫前期病史患者再次妊娠发病的预测价值

目的探讨外周血胎儿血红蛋白(HbF)、胎盘生长因子(PLGF)及子宫动脉搏动指数(PI)联合检测对有早发型子痫前期病史患者再次妊娠发生早发型子痫前期的预测价值。方法选择2010年1月~2017年8月在唐山市妇幼保健院就诊的有早发型子痫前期病史再次妊娠的患者94例作为研究对象。观察患者血清胎盘生长因子、外周血HbF水平和子宫动脉搏动指数对早发型子痫前期的预测价值。结果94例患者发生早发型子痫21例,发生率为22.34%。早发型子痫前期患者PLGF水平低于非早发型子痫前期患者(P<0.05),HbF和PI水平高于非早发型子痫前期患者(P<0.05)。PLGF阳性或HbF阳性或PI阳性预测子痫前期的敏感度高于单纯PLGF、HbF和PI阳性(P<0.05);PLGF阳性和HbF阳性和PI阳性预测子痫前期的特异性高于单纯PGIF、HbF、PI阳性(P<0.05)。结论PLGF、HbF和PI均阳性作为预测标准有助于降低误诊率,有利于早发型子痫前期的诊断,PLGF、HbF或PI阳性作为预测标准可降低漏诊率,有利于早发型子痫前期的排除。

利用胎儿血红蛋白表型分选、检测母血中胎儿有核红细胞

目的:建立高纯度、高得率、高特异性的分选技术,富集纯化母血中胎儿有核红细胞(FNRBC).方法:70例孕妇外周血,经密度梯度离心初步富集后行血红蛋白γ链免疫组化染色,以显微操作术挑取阳性细胞.采用单细胞PEP-PCR技术检测SRY基因,并进行荧光原位杂交分析.结果:胎儿NRBC具有鲜明的形态学、免疫学特征.每例母血FNRBC数5～27个,平均0.82±0.37/ml.PEP-PCR检测的灵敏度、特异度分别为95.35%、100%.4例FISH结果均与实际核型相符.结论:以γ-血红蛋白为分选标志,结合显微操作技术,可以有效地获取高纯度、高浓度研究模板,保证后继分析的准确性,为无创性产前诊断发展奠定基础.

孕妇外周血胎儿ε血红蛋白基因mRNA的表达及与孕龄的相关性

目的 探讨孕妇外周血中胎儿ε血红蛋白基因mRNA的表达水平及其与孕龄的相关性.方法 选择2008年10月—2009年11月在潍坊市人民医院行产前检查的7～16周正常单胎妊娠孕妇30例,常规方法提取全血总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法扩增胎儿ε血红蛋白基因片段,琼脂糖凝胶电泳,并扫描成像,用ImageJ软件对电泳条带进行图像分析,测定电泳条带的灰度值,计算孕妇外周血中胎儿ε血红蛋白基因mRNA的浓度,并分析其与孕龄之间的相关性.结果 30例样品RNA质量浓度值为0.98～3.19 g/L,平均（1.87±0.76） g/L;光密度平均比值为1.79,7例阳性,23例阴性.孕妇外周血中胎儿ε血红蛋白基因mRNA浓度为0.537～1.790 μg/ml,中位数为1.241 μg/ml.孕妇外周血中胎儿ε血红蛋白基因mRNA的浓度与孕龄呈负相关（r=-0.750,P=0.026）.结论 孕妇外周血中存在胎儿ε血红蛋白基因mRNA且其含量在7～16周与孕龄呈负相关,利用孕妇外周血中胎儿RNA进行无创性产前诊断具有可行性.

抗胎儿血红蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的制备和鉴定抗胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin,HbF)单克隆抗体(mAb),为相关疾病的研究提供支持与工具。方法用脐带血红细胞裂解物免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(NS-1)融合制备杂交瘤,经筛选和三次克隆化,从制备的腹水中纯化单克隆抗体。用ELISA以及western blot等方法鉴定单克隆抗体的特性(效价、Ig亚类、特异性以及亲和力)。结果筛选到3株可稳定分泌抗HbF单克隆抗体的杂交瘤细胞6A5、5C8、2C8,腹水效价分别为1×10-6、2×10-6和4×10-6。单抗亚类均为IgG1,抗体亲和力分别为7.8×109、2.2×108和8.6×109。ELISA和western blot结果显示,6A5、5C8、2C8 mAb只与HbF的二聚体特异性结合,与其他类型血红蛋白不发生交叉反应。结论获得3株能特异性识别HbF的高亲和力mAb,可结合二聚体与单体HbF,为临床检测HbF水平及相关研究提供了有效的工具。

孕妇外周血中胎儿γ血红蛋白基因的检测

目的 探索检测孕妇外周血中胎儿γ血红蛋白基因表达的方法。方法 提取孕妇全血mRNA ,经体外逆转录后 ,用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法 ,应用ε/γ特异引物引导扩增胎儿ε/γ血红蛋白基因 ,以NdeⅡ酶切后 ,经琼脂糖凝胶电泳 ,在凝胶成像系统下观察。结果 成功自孕妇外周血中扩增出胎儿ε/γ血红蛋白基因 ,ε/γ基因被NdeⅡ酶切成三个γ基因片断 ,大小分别为 191、5 7和 2 6bp。结论 孕妇全血中微量的胎儿mRNA已基本满足体外逆转录及扩增的要求 ,胎儿γ血红蛋白基因的检测可为无创伤性产前诊断的发展奠定基础。

MicroRNAs对胎儿血红蛋白表达的调控作用

微小RNA（microRNAs,miRNAs,miRs）是指一群小于22个核苷酸的非编码单链RNA分子,它们可以在转录后水平调节靶基因、染色体构象改变、细胞增殖、分化以及凋亡。这些单链RNA分子在细胞质中与其它蛋白结合形成miRNA诱导沉默复合物（miRNA-induced silencing complex,miRISC）,再结合到靶基因mRNA的3’-UTR抑制其翻译,通过这种方式miRs对细胞功能产生巨大影响,参与调节了血液疾病、感染、子宫内膜病变及多种癌症等疾病稳态和病态之间的平衡.

KLF1基因对非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征的修饰作用

目的:探讨KLF1基因对非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征(HPFH)的修饰作用。方法:选择2017年6月1日至2018年4月30日广西医科大学第一附属医院门诊进行地中海贫血筛查且年龄大于2岁的患者,经血红蛋白(Hb)分析提示胎儿血红蛋白(HbF)升高,且β-地中海贫血基因检测无突变、β珠蛋白基因启动子测序有突变的73例患者进行KLF1基因测序,同时分析其血常规、Hb电泳等表型特征。结果:73例患者中52例有KLF1基因变异,共筛查出8种基因位点突变。有KLF1突变(52例)和无KLF1突变(21例)患者平均红细胞体积(MCV)、HbF、成人血红蛋白A2(HbA2)水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);KLF1基因-251C>G,c.304T>C纯合子(18例)较-251C/G,c.304T/C杂合子(24例)有更高的HbF水平(P<0.05)。结论:KLF1基因与非缺失型HPFH对升高HbF有协同作用;KLF1不同基因型对HbF升高作用不同。

胎儿血红蛋白数量性状相关基因的研究进展

胎儿血红蛋白(HbF)是一种主要在胎儿期间大量存在的血红蛋白,但成年后含量极少,然而少量人群及部分镰刀型贫血和地中海贫血患者体内仍保留一定量的HbF,其存在对缓解贫血临床并发症具有重要益处。以往研究已经确定影响HbF数量性状的基因座定位于6q23和2p15,而最新的一系列研究表明,定位于6q23的HBS1L-MYB和2p15的BCL11A与HbF含量关联最高。这些研究一方面有助于理解HbF表达机理,另一方面也为镰刀型贫血的治疗提供了潜在的药物靶点。文章对HbF表达的数量性状相关基因的研究现状及潜在应用进行了综述。