胎儿骨髓和肝脏间充质干细胞的表型和生物学性状研究

为研究胎儿骨髓和肝脏间充质干细胞的表型和生物学性状 ,取胎龄为 4 - 5个月水囊引产胎儿 ,将骨髓和肝脏细胞在SF(含 2 %FCS)培养基中培养 ,进行电镜观察 ,测定生长曲线 ,用流式细胞术对培养细胞进行表型测定 ,细胞周期分析 ,用SA方法测定Ⅰ ,Ⅲ型胶原和vWF因子表达。结果表明 :从胎儿骨髓和肝脏培养出的间充质干细胞 ,两者在形态学、生长特性、免疫表型上是相似的 ,肝脏间充质干细胞有更好的支持造血的功能。结论提示 ,从胎儿骨髓和肝脏可分离培养出间充质干细胞 ,在体外有效扩增且保持其低分化状态。

胎儿骨髓基质细胞与细胞因子支持人脐血单个核细胞体外扩增的研究

为了探讨胎儿骨髓基质细胞(FBMSC)联合细胞因子对脐血单个核细胞(MNC)体外扩增作用的影响及比较扩增前后脐血(CB)CD34+细胞上细胞表面趋化因子受体CXCR4和黏附分子CD49d+(VLA4)的表达情况,将从新鲜CB标本中分离出的MNC分别接种于已建立的无血清培养体系,该体系分4组:A组为培养过程中不加细胞因子和基质细胞;B组为单用胚胎骨髓基质细胞支持;C组为单用细胞因子支持;D组为细胞因子和胚胎骨髓基质细胞联合支持。在0、6、10及14天检测细胞总数、CD34+细胞数及集落形成单位(CFU)数,同时检测CD34+细胞上CD49d+及CXCR4的表达数。结果表明:在体外14天培养过程中,各时间点D组CD34+细胞、CFU数及CD34+CXCR4+细胞和CD34+CD49d+细胞扩增数均高于A、B、C组(P<0.05);B、C和D组在各时间点各测量指标与A组比较具显著性差异(P<0.05);6天后,B组各测量指标与C组比较具显著性差异(P<0.05)。结论:胚胎骨髓基质细胞联合外源性细胞因子不仅可以支持脐血MNC的有效扩增,而且扩增后与趋化作用和与粘附作用相关的造血细胞亦较扩增前明显增加。单用细胞因子扩增会造成造血细胞的耗竭,单用基质细胞支持可扩增或维持造血细胞的量,但难以实现造血细胞的大量扩增,FBMSC联合外源性细胞因子可能是扩增造血干祖细胞的较理想方案。

胎儿骨髓基质细胞培养上清对造血祖细胞集落生长的影响

成人骨髓基质细胞(ABMSC)成分及其功能的研究已有报道,但有关人胎儿骨髓基质细胞(FBMSC)功能的研究尚未见报道。本研究通过比较胎儿与成人的骨髓基质细胞无血清培养上清刺激体外造血祖细胞集落生长作用的差异,以探讨胎儿骨髓基质细胞分泌造血生长因子的特性。

慢病毒转染胶质细胞源性神经营养因子基因的胎儿骨髓间充质干细胞的研究

目的探讨胎儿骨髓间充质干细胞(fBMMSCs)经慢病毒转染胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因后GDNF的表达情况。方法利用贴壁培养法,从流产胎儿的股骨骨髓中分离培养fBMMSCs,并进行扩增。取第5代fBMMSCs,用慢病毒载体转染GDNF基因。应用免疫组化法及ELISA法检测被转染的fBMMSCs GDNF的表达情况。结果被转染GDNF基因的fBMMSCs GDNF表达阳性,且培养液中GDNF含量随培养时间延长而增高。结论被慢病毒转染GDNF基因的fBMMSCs能表达GDNF。

胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用

目的 :探讨胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用。方法 :联合应用胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子如重组人干细胞因子 (rh SCF)、IL - 3、IL - 6、粒巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)、粒细胞集落刺激因子 (G- CSF)、促红细胞生成素 (EPO)等先后对成人骨髓单个核细胞及 CD34 + 富集细胞培养 5 d至 2周。结果 :胎儿骨髓基质细胞与上述细胞因子具有良好的协同作用 ,CD34 +富集细胞以胎儿骨髓基质细胞 +SCF+IL- 3+IL- 6 +G- CSF+EPO培养 2周 ,可使细胞总数、粒 -单系造血祖细胞 (CFU- GM)、早期红系造血祖细胞 (BFU- E)及 CD34 +细胞分别扩增 (119.6± 30 .9)倍、(5 4.6± 17.4)倍、(2 5 .2± 4.4)倍、(11.1± 4.2 )倍。结论

胎儿骨髓间充质干细胞中SSEA-4阳性表达细胞的分离和检测

为了验证成体干细胞中全能性干细胞存在的可能性,以SSEA-4抗原为筛选标志,利用免疫磁珠筛选技术从胎儿来源的骨髓间充质干细胞(fetal mesenchymal stem cells,fMSCs)中筛选并培养得到SSEA-4表达阳性的fMSC-SSEA-4细胞,从形态学、生长曲线、表面标志及细胞周期、核型分析等方面检测其生物学性状,并通过Oct-4及SSEA-4抗体的表达及致瘤性等方面分析其全能性状．同时观察了fMSC-SSEA-4细胞的诱导分化能力．结果发现,fMSC-SSEA-4细胞的形态学表现、细胞周期和生长曲线检测与fMSCs无明显差异;fMSC-SSEA-4细胞Oct-4和SSEA-4抗体表达阳性,并且表现为正常的二倍体核型,无明显的致瘤性状．在不同的诱导条件下,fMSC-SSEA-4细胞可向成骨细胞、脂肪细胞和神经元样细胞分化．实验结果提示,fMSCs中存在有全能干细胞性状的一群细胞,从而为进一步深入研究和更好地应用fMSCs提供了理论依据．

胎儿骨髓间充质干细胞对成人外周血淋巴细胞体外增殖及免疫相关因子表达的影响

目的 观察胎儿骨髓间充质干细胞（FBM-MSC）对成人外周血淋巴细胞的免疫调控作用及机制.方法 取妊娠14～ 22周龄胎儿骨髓,分离、培养FBM-MSC,通过观察细胞形态、细胞表面分子标志及成骨、成脂分化潜能等进行鉴定;将FBM-MSC与用荧光染料CFSE标记的成人外周血单个核细胞,在PHA刺激条件下共培养5d后,用流式细胞术分析刺激活化后的淋巴细胞增殖情况;用ELISA法检测共培养上清中IFN-γ和TNF-α等炎性因子水平;用荧光实时定量RT-PCR法检测IDO、TSG-6和TGF-β等免疫抑制性因子表达水平.结果 分离的FBM-MSC表面高表达CD29、CD44、CD49e、CD73、CD90、CD105;低表达CD31、CD34、CD45、HLA-DR,具有分化为脂肪和成骨细胞的能力;与单纯PHA刺激后的淋巴细胞相比较,与FBM-MSC共培养抑制淋巴细胞活化增殖,抑制率可高达96％; FBI-MSC共培养还可抑制淋巴细胞分泌炎性因子,对IFN-γ和TNF-α因子分泌的抑制率分别达90.9％和58.4％;与单独培养的FBM-MSC相比较,共培养后的FBM-MSC中重要的免疫调节因子如IDO、TSG-6和TGF-β的表达水平显著上调.结论 胎儿骨髓来源的FBM-MSC对外周血淋巴细胞体外增殖具有明显抑制作用;由MSC分泌的抑制性细胞因子如IDO、TSG-6和TGF-β等在FBM-MSC介导的免疫抑制中可能起重要调节作用.

胎儿和成人骨髓间充质干细胞体外造血支持能力的比较(英文)

胎儿出生以后,造血干细胞(HSC)才从胎儿的肝脏和脾脏转移到骨髓,这一过程可能由不同的造血微环境中的信号分子所介导。间充质干细胞(MSC)是骨髓微环境中间质细胞如成骨细胞、内皮细胞的前体祖细胞。研究者推测,胎儿出生前的骨髓可能并不特别适合HSC生长。然而,该假说尚缺乏直接的证据支持。本研究通过对胎儿和成人骨髓MSC的造血支持能力进行比较,拟为此提供证据。成人骨髓MSC来源于3位健康供者,胎儿骨髓MSC来源于孕19-20周流产的胎儿。MSC辐照后与CD34+一起进行长期培养启动细胞分析,计数克隆形成细胞的数量,流式分析培养后CD34+的表型变化。RT-PCR分析两种MSC中细胞因子的表达。结果显示,成人骨髓MSC比胎儿骨髓MSC具有更强的造血支持能力,两者都促进CD34+向髓系细胞分化,两者之间细胞因子的表达存在差异。结论:与胎儿骨髓MSC相比,成人骨髓MSC在某些治疗,尤其是促进造血恢复方面具有更广泛的应用前景。

人胎骨髓MSCs的分离鉴定及其向肝细胞样细胞的分化

目的:分离鉴定人胎骨髓中的间质干细胞(MSCs),探索其体外培养的生物学特性,并在化学因子作用下诱导其向肝细胞分化。方法:利用细胞差速贴壁生长特性分离纯化人胎骨髓MSCs;利用流式细胞仪检测其细胞周期和表面标志;添加常规诱导液诱导其向脂肪、成骨方向分化;采用DMSO、β-Me和5-aza联合预诱导24h,换用H-DMEM和rh-HGF正式诱导人胎骨髓MSCs向肝细胞分化,并从形态学和特异性细胞化学染色等方面加以鉴定。结果:从人胎骨髓中成功分离、纯化得到MSCs,P4代MSCs有92.3%的细胞处于G0/G1期;P5代MSCs有96.1%的细胞处于G0/G1期。流式细胞仪检测P3代MSCs结果显示:人胎骨髓MSCs表达CD29、CD44、CD105和CD106,不表达造血细胞标志CD34、CD45,不表达与GVHD相关的HLA-DR、CD80、CD86、CD40、CD40L。在经典的诱导条件下,人胎骨髓MSCs可快速向脂肪及成骨细胞分化;在上述诱导条件下,人胎肝MSCs可分化为类肝细胞,表达特异性抗原甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)。结论:人胎骨髓中含有丰富的MSCs,人胎骨髓来源的MSCs具有较强的多向分化潜能,经DMSO、β-Me和5-aza联合预诱导及rh-HGF、nictinion等化学因子的作用,易向肝细胞样细胞分化,且免疫原性弱,是组织工程(生物型人工肝)的较为理想的种子细胞。

人脐血、成人骨髓和小鼠骨髓成纤维细胞系祖细胞培养

自1989年美国Broxmeyer与法国医生合作首次开展脐血造血干细胞移植治疗Fanconis贫血获得成功之后,人们对以往常被丢弃的脐血的基础研究和临床应用研究的兴趣与日俱增。脐血中富含红系祖细胞BFU—E,粒单系祖细胞CFU—GM和巨核系祖细胞CFU-Meg并已基本被肯定,但是否存在成纤维细胞系祖细胞(CFU—F)

子宫内骨髓移植治疗免疫缺陷综合征

子宫内骨髓移植治疗免疫缺陷综合征严重的免疫缺陷综合征是一种遗传性免疫缺陷症。其特点是细胞及体液之免疫缺损。患儿极易发生感染，通常活不到两岁。由Ｘ染色体畸变所致。常规产后骨髓移植治疗，易受移植物排斥影响及供髓者的疾病传染。最近，美国费城儿童医院的Ａｌａ...

人间充质干细胞体外扩增及生物学特性的研究

目的 探讨成人骨髓、胎儿骨髓和人脐血 3种不同来源的人类间充质干细胞 (MSC)体外扩增及其生物学特性。方法 观察 3种来源的MSC的生长、增殖和表面标志的表达 ,从而评价MSC的纯化、增殖能力及其免疫学特性。结果 (1) 3种不同来源的人MSC的细胞形态、集落数、集落大小均无差异 ;但成人骨髓MSC在集落形成及集落交错融合时间上均早于胎儿骨髓和脐血MSC ;(2 )3种来源的人MSC传代培养增殖速度无差异 ,但脐血和胎儿MSC融合后无接触抑制 ,而成人骨髓MSC存在接触抑制 ;(3)来源于骨髓单个核细胞 (MNC) 8× 10 6或脐血MSC 2 5× 10 6的MSC ,经体外扩增 3代、5代和 10代后 ,细胞数分别为 10 7、10 8和 10 10 个 ;(4)MSC易纯化 ,P2代细胞均一性为 90 % ,P3代细胞均一性为 95 % ,P5代细胞均一性达到 99% ;(5 )不同来源的MSC表面重要标志 :CD2 9、CD44、CD59、CD90 、CD10 5、CD166表达均为阳性 ,其造血细胞表面标志 :CD11a、CD14 、CD3 3 、CD3 4 、CD2 8、CD45、CD117表达均为阴性 ,与移植免疫排斥发生密切相关的表面标志 :HLA DR、B7 1(CD80 )、B7 2 (CD86)、CD40 和CD40L均为阴性。 3种不同来源的人MSC表面标志 ,差异无显著性。 (6 )两种不同培养体系对人MSC的纯化扩增及生物学特性无影响。结论 (1)

端粒酶过表达使限制型神经元祖细胞永存

美国的一个研究小组通过用人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因转换胎儿骨髓细胞的方法，产生了祖细胞。它能扩大并使表型为限制型神经元的数目增加。