全氟辛烷磺酸对人胎盘合体滋养细胞影响的研究

目的研究全氟辛烷磺酸(perfluorooctane sulfonate,PFOS)对人胎盘合体滋养细胞中糖皮质激素代谢酶11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅱ型(11β-HSD2)和胎盘合体滋养细胞凋亡的影响,探讨PFOS对胎儿的影响。方法利用改良的Kliman法分离提纯原代人胎盘滋养层细胞,体外培养3 d,待滋养层细胞完全合体化为合体滋养细胞后,使用不同浓度的PFOS(0、0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L)处理细胞,利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫印迹等方法检测PFOS对胎盘合体滋养细胞11β-HSD2的mRNA和蛋白质表达水平,以及酶活性的影响,检测PFOS对天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase3)蛋白质表达水平和酶活性的影响。结果体外培养第1、2、3天,胎盘滋养层细胞中11β-HSD2的mRNA和蛋白质相对表达量逐渐升高,与未处理时(即第0天)比较的差异具有统计学意义(P值均<0.01)。0.01μmol/L PFOS处理的人胎盘合体滋养细胞11β-HSD2的mRNA和蛋白质相对表达量较未处理时显著降低,且11β-HSD2的mRNA和蛋白质相对表达量随着PFOS剂量的增加(0.1、1、10μmol/L)显著降低(P值均<0.01)。0.01μmol/L PFOS处理的人胎盘合体滋养细胞11β-HSD2酶活性较未处理时显著降低,并随着PFOS剂量的增加,活性抑制程度显著增强(P值均<0.01)。0.01μmol/L PFOS处理的人胎盘合体滋养细胞pro-caspase3蛋白质相对表达量较未处理时显著降低,且蛋白质相对表达量随着PFOS剂量的增加(0.1、1、10μmol/L)显著降低(P值均<0.01)。同时,0.01μmol/L PFOS处理的人胎盘合体滋养细胞cleaved-caspase3的蛋白质相对表达量较未处理时显著升高,并随着PFOS剂量的增加显著升高(P值均<0.01)。进一步实验结果显示,0.01μmol/L PFOS处理的人胎盘合体滋养细胞caspase3的酶活性较未处理时显著增强,并随着PFOS剂量的增加活性显著增强(P值均<0.05)。结论PFOS能够呈浓度依赖性地抑制人胎盘合体滋养细胞中11β-HSD2的表达和酶活性,促进胎盘合体滋养细胞凋亡,这可能是PFOS导致病理妊娠,对胎儿产生不良影响的重要机制之一。

胎盘合体滋养细胞中硫化氢对激活素A影响的研究

目的:探讨胎盘合体滋养层细胞中硫化氢(H2S)对激活素A(Activin A)的调控作用。方法:利用改良的Klim法原代培养正常胎盘合体滋养层细胞,并给予不同浓度的H2S供体NaHS、前体L-半胱氨酸,H2S合成酶[胱硫醚-β-合成酶(CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)]抑制剂(AOAA、PAG)和D-半胱氨酸处理细胞,同时利用RNA干扰技术,将CBS和CSE的表达干扰后,再给予L-半胱氨酸处理细胞。ELISA方法检测细胞上清中Activin A的浓度。结果:给予胎盘合体滋养细胞NaSH、L-半胱氨酸处理后,随NaSH、L-半胱氨酸浓度的增加Activin A浓度明显减少(P<0.01),且这种作用被H2S合成酶抑制剂AOAA所阻断(P<0.01)。转染干扰CBS表达的小干扰RNA片段-siCBS后,可逆转L-半胱氨酸对Activin A的下调作用(P<0.01);而加入D-半胱氨酸后,Activin A表达变化无明显差异(P>0.05)。结论:在人胎盘合体滋养细胞中,H2S可能主要在H2S合成酶之一CBS的作用下产生,并发挥对Activin A的下调作用,进而可能在预防妊娠期高血压疾病的发生中发挥作用。