透射电镜及激光共聚焦技术观察体外丙型肝炎病毒感染的人胎盘滋养层细胞

目的:探讨体外分离培养的人体胎盘滋养层细胞感染丙型肝炎病毒(HCV)的可能性,以及滋养层细胞感染HCV后的超微结构改变.方法:采用胰蛋白酶消化法及Percoll密度梯度分离法分离培养人胎盘组织中滋养层细胞后,以HCVRNA阳性血清对滋养层细胞进行体外感染试验,应用RT-PCR法定性及定量检测感染后细胞培养上清中HCVRNA,透射电镜观察HCV感染后滋养层细胞的超微结构改变,并用激光共聚焦技术观察免疫荧光染色后HCVNS5在滋养层细胞中的定位.结果:HCV感染后的细胞培养上清中可间断检测到HCVRNA,而对照组始终未检出;激光共聚焦观察显示HCVNS5主要定位于细胞核周;HCV感染后滋养层细胞超微结构发生了明显改变,主要表现为溶酶体大量增生,粗面内质网增生,脂滴减少,出现空泡状结构,并可观察到病毒样颗粒.结论:HCV可以感染滋养层细胞,并导致滋养层细胞的超微结构发生类似黄病毒科病毒感染后的改变.

人胎盘滋养层细胞雌激素α,β受体免疫细胞化学研究

目的:探讨雌激素-α,β型受体（estrogen recoptor α,β）在人胎盘滋养层细胞的表达和定位。方法:采用细胞培养结合免疫细胞化学ABC法。结果:人胎盘及培养的人胎盘绒毛合体、细胞滋养层细胞均呈雌激素α,β受体免疫反应性,雌激素受体免疫反应阳性物质定位于胞核内,细胞质为阴性。结论:人胎盘滋养层细胞存在雌激素α,β受体,这为研究雌激素对人胎盘滋养层细胞的功能调控提供了形态学依据。

亮氨酸对猪胎盘滋养层细胞增殖和周期的影响

为了研究亮氨酸（Leu）对猪胎盘滋养层细胞（p Tr）增殖数目和增殖周期的影响,本试验分别利用MTT法和流式细胞仪检测不同Leu浓度（0、0.01、0.05、0.1、0.25、0.5、1、5、10 mmol/L）处理p Tr不同时间（24 h、48 h、72 h）后,其增殖活力和细胞周期分布。结果显示,Leu处理p Tr细胞24 h后,0.01 mmol/L组和0.05 mmol/L组细胞数目极显著降低（P〈0.01）;Leu处理p Tr细胞48 h后,细胞数目极显著降低（P〈0.01）;1～10 mmol/L Leu处理p Tr细胞72 h后,细胞数目极显著降低（P〈0.01）。不同浓度Leu处理p Tr 24 h和48 h后,各试验组G0～G1期细胞数目逐渐增多,S期细胞数目逐渐减少,并有时间和剂量依赖性。高浓度的Leu会阻碍正常细胞周期,从而抑制p Tr的增殖活力。

芳香烃受体(AhR)内源性配体ITE对胎盘滋养层细胞的增殖抑制作用及其机制

目的研究芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)的内源性配体2-(1′H-吲哚-3′-羰基)噻唑-4-羧酸甲酯(ITE)对胎盘滋养层细胞增殖的影响及其机制。方法用免疫组织化学及Western blot检测AhR在早期绒毛和晚期胎盘组织中的表达,利用人胎盘滋养层细胞系JEG-3和JAR作为细胞模型研究ITE对胎盘滋养层细胞增殖的影响。结果 AhR主要分布于人胎盘合体滋养层细胞的胞质中,并且晚期胎盘组织中AhR蛋白的表达水平高于早期绒毛组织(P<0.05)。AhR蛋白质在JEG-3中表达较高,而在JAR中几乎检测不到。ITE可诱导JEG-3细胞中AhR下游靶基因细胞色素P4501A1(CYP1A1)mRNA的表达,该诱导作用具有剂量和时间依赖性。同时,ITE使JEG-3细胞滞留于细胞周期的S期,进而抑制细胞的增殖。结论 ITE通过激活AhR信号通路抑制胎盘滋养层细胞的增殖,该抑制作用主要通过调节细胞周期的改变来实现。

胎盘滋养层细胞的功能

胎盘滋养层细胞对妊娠与胚胎发育具有非常重要的作用,侵袭功能和内分泌功能是滋养层细胞的两大主要功能。侵袭性迁移行为是胎盘形成、胚胎发育、妊娠顺利完成的基本要素,滋养层细胞在侵袭血管方面上与癌细胞非常相似。同时滋养层细胞也发挥着极其复杂的内分泌功能,能分泌甾体类激素、神经肽类激素、生长因子、细胞因子等多种生物活性物质,构成了复杂的脐血造血微环境。滋养层细胞所分泌的激素、神经肽等活性物质对母婴之间能量代谢转运、维持早孕、营养黄体等方面起到重要的作用。同时,滋养层细胞是胎盘屏障的重要组成部分和母血进入胎儿的第一道屏障,所分泌的各种细胞因子发挥了极其重要的免疫功能。在本文中作者旨在微环境的层面上阐述胎盘滋养层细胞的功能。

激光共聚焦技术证实HCV NS5在人胎盘滋养层细胞的定位表达

目的胎盘屏障是营养物质以及某些药物、病原体、激素等从母体进入胎儿的必经之路。体外分离培养滋养层细胞是研究其功能及母体与胎儿之间物质交换的具体分子机制的细胞学基础。本研究的目的是探讨体外分离培养的人体胎盘滋养层细胞感染丙型肝炎病毒(HCV)后HCV NS5在滋养层细胞中的定位表达。方法采用胰蛋白酶消化法及Percoll密度梯度分离法分离培养人胎盘组织中滋养层细胞,以HCV RNA阳性血清对滋养层细胞进行体外感染试验,应用RT-PCR法定性及定量检测感染后细胞培养上清中HCV RNA,用激光共聚焦技术观察免疫荧光染色后HCV NS5在滋养层细胞中的定位。结果HCV感染后的细胞培养上清中可间断检测到HCV RNA,而对照组始终未检出;激光共聚焦观察显示HCV NS5主要定位于细胞核周围。结论感染HCV的人滋养层细胞中存在HCV NS5表达。此研究为进一步深入研究HCV的母婴传播分子机制奠定了实验基础。

5-羟色胺受体和P物质受体在培养的人胎盘滋养层细胞的定位研究

目的 :探讨培养的人胎盘绒毛滋养层细胞是否存在 5 羟色胺受体 (5 HTR)和P物质受体 (SPR)。方法 :采用细胞培养法和免疫细胞化学技术。结果 :培养的滋养层细胞为 5 HTR与SPR免疫阳性反应 ,免疫阳性物质位于胞浆内 ,胞核为阴性。结论 :人胎盘滋养层细胞自身含有 5 HTR和SPR ,为在离体培养条件下研究 5 HT和SP对胎盘激素的合成与分泌的调控作用提供了形态学依据。

人原代胎盘滋养层细胞摄取转运模型的建立及氟西汀对胎盘P-gp转运蛋白功能的影响

目的:建立人胎盘滋养层细胞(以下简称"滋养层细胞")转运模型,应用该模型考察氟西汀(fluoxetine,FXT)暴露下外排转运蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的功能变化,探讨FXT对胎盘转运能力的影响。方法:从足月胎盘中分离、消化、培养得到合胞体滋养层细胞,并从形态学和免疫组织化学等方面对细胞进行鉴定,应用P-gp蛋白的特异性底物罗丹明123及抑制剂维拉帕米对其功能进行评估,确定最适底物浓度及抑制剂浓度,随后采用低、中、高浓度的FXT分别干预滋养层细胞0.5 h、48 h和72 h,应用特异性底物开展细胞摄取实验,考查FXT对P-gp功能、蛋白表达、转录水平的影响。结果:基于人胎盘滋养层摄取转运模型,P-gp底物罗丹明123的最适浓度为1μmol/L,抑制剂维拉帕米的最适浓度为10μmol/L;低、中、高浓度FXT分别干预滋养层细胞0.5 h、48 h和72 h后,P-gp的底物罗丹明123在细胞内蓄积水平升高(P<0.05)。FXT可显著性下调P-gp蛋白表达(P<0.05),但对P-gp mRNA水平无显著影响(P>0.05)。结论:FXT可能通过下调P-gp的蛋白表达而抑制其外排转运功能。

人胎盘滋养层细胞的超微结构及凋亡

目的 :观察不同孕期胎盘滋养层细胞的超微结构和凋亡现象。方法 :取早、中、晚各期胎盘组织 ,制备成透射电镜标本并观察。结果 :细胞滋养层细胞 (CT)在各妊娠时期形态结构相似 ,呈低分化细胞的特点。细胞核常染色质丰富 ,细胞质中有大量散在游离核糖体 ,内质网较少 ,高尔基复合体不发达。合体滋养层细胞 (ST)为分化良好的细胞。细胞质内含丰富的扩张内质网 ,高尔基复合体发达。CT核数 /ST核数随妊娠时间增加而减少。中、晚期有些ST核染色质呈边集、固缩等凋亡表现 ,且多发生在合体结 ,足月胎盘ST的凋亡指数AI大于中期 (P <0 .0 1)。结论

人重组γ－干扰素（hrIFN－γ）对人胎盘滋养层hCG分泌和蜕膜蛋白质合成的影响

研究证明人重组γ－干扰素（ｈｒＩＦＮ－γ）对人胎盘滋养层组织绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）和蜕膜组织蛋白质合成在体外实验中均有抑制作用。结果指出ｈｒＩＦＮ－γ在剂量为２５０Ｕ／ｍｌ培液和２５００Ｕ／ｍｌ培液时明显地抑制滋养层组织ｈＣＧ分泌，与对照组比较Ｐ值分别为０．０５和０．０１，并呈剂量相关反应，同时ｈｒＩＦＮ－γ在剂量范围为１０Ｕ～１０００Ｕ／ｍｌ培液时，明显抑制蜕膜蛋白质合成３Ｈ亮氨酸掺入的ｃｐｍ值，在对照组和实验组之间无论是细胞内或是分泌蛋白都有明显差别（Ｐ＜０．０５），而且抑制作用呈剂量相关反应，ＩＦＮ－γ抗血清能阻断其抑制作用，但ＩＦＮ－α对蜕膜组织蛋白质合成无作用。

IFNγ/IL-4对人胎盘滋养层功能的影响

【目的】研究γ干扰素 (IFNγ) /白细胞介素 4 (IL 4 )对人孕早期胎盘滋养层细胞活性及人绒毛膜促性腺激素 (hCG)分泌的影响。【方法】胎盘滋养层细胞活性采用MTT法进行检测 ,胎盘滋养层组织分泌的hCG采用放免法进行分析测定。结果 :IFNγ在一定浓度范围内 (10～ 10 0 0ng/ml)对胎盘滋养层细胞活性及其hCG分泌有明显的抑制作用 (P <0 0 1) ;而IL 4 (1～ 10ng/ml)则有明显的促进作用 (P <0 0 1)。 【结论】IFNγ/IL

基于NLRP3通路探讨山药多糖对妊娠糖尿病大鼠胎盘滋养层细胞自噬侵袭的影响

目的:基于NLRP3通路研究山药多糖对妊娠糖尿病(GDM)大鼠胎盘滋养层细胞自噬和侵袭的影响,并探讨可能作用机制。方法:取50只大鼠复制GDM模型,按随机数字表法将造模成功40只大鼠分为模型组、山药多糖低剂量组、山药多糖高剂量组、阳性药物组,每组10只。另取10只大鼠作为正常组。各组大鼠给予相应药物灌胃,1次/d,连续给药6周。给药结束后,Transwell法观察大鼠胎盘滋养层细胞侵袭能力;比较大鼠血清空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINs)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-6(IL-6)水平及胎盘组织自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、NLRP3的mRNA和蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清FBG、FINs、HOMA-IR、IL-1β、IL-18、IL-6水平,胎盘组织Beclin1、TXNIP、NLRP3的mRNA和蛋白相对表达量,胎盘组织LC3II/LC3I均明显升高(P<0.05),胎盘滋养层细胞侵袭数目减少(P<0.05);与模型组比较,山药多糖低、高剂量组和阳性药物组大鼠胎盘滋养层细胞侵袭数目均明显增加(P<0.05),血清FBG、FINs、HOMA-IR、IL-1β、IL-18、IL-6水平,胎盘组织Beclin1、TXNIP、NLRP3的mRNA和蛋白相对表达量,胎盘组织LC3II/LC3均明显降低(P<0.05);与山药多糖低剂量组比较,山药多糖高剂量组、阳性药物组胎盘滋养层细胞侵袭数目均明显增加(P<0.05),其他诸项指标均明显降低(P<0.05);与山药多糖高剂量组比较,阳性药物组胎盘滋养层细胞侵袭数目明显增加(P<0.05),其他诸项指标均明显降低(P<0.05)。结论:山药多糖能有效改善GDM大鼠炎症反应,抑制胎盘滋养层细胞自噬,增强细胞侵袭能力;山药多糖可能通过调控NLRP3通路发挥上述作用。

转hTERT基因牛胎盘滋养层细胞生长及分泌特性研究

本研究旨在培养符合实验要求的牛胎盘滋养层细胞,并探究外源hTERT基因对细胞生长及功能特性的影响。利用联合组织块培养法、胰蛋白酶消化法获得原代牛胎盘滋养层细胞,利用脂质体转染pc1-neohTERT质粒,通过WesternBlot检测细胞角蛋白7(Cytokeratin7,CK7)和波形蛋白(Vimentin)的表达,又通过免疫组化检测胎盘催乳素(Placental Prolactin,PL)和绒毛膜促性腺激素(Chorionic Gonadotropin,CG)等的表达。结果表明:研究中培养获取的原代牛胎盘滋养层细胞90%以上可表达特异性角蛋白CK7,转染质粒后细胞可连续稳定传代15代以上,且CG和PL的分泌量与原代细胞相比无显著差异,证明转染质粒对细胞主要功能及生长特性没有明显影响,细胞可用于后续实验。

TXNIP/NLRP3通路在妊娠期糖尿病胎盘滋养层细胞迁移侵袭中的作用研究体会

研究TXNIP/NLRP3通路在妊娠期糖尿病胎盘滋养层细胞迁移侵袭中的作用。方法 择选2020年7月~2021年7月收治的60例孕妇,将其中30例合并妊娠糖尿病(GDM)的产妇作为观察组,将其中30例正常孕妇作为对照组,对两组孕妇进行孕期产检,记录孕期产检数据,包括血脂、血糖、IL-β水平、IL-6水平、 Homaβ、HomaIR水平等。结果 FBG、2hPG、HbA1c水平高于对照组,P<0.05;观察组TC、TG、LDL-C水平高于对照组,HDL-C水平低于对照组,P<0.05;观察组的Homaβ低于对照组,HomaIR、IL-1β水平高于对照组,P<0.05;观察组TXNIP、NLRP3水平高于对照组,P<0.05。结论 GDM患者不但存在糖代谢,还会对血脂水平造成影响,机体炎症小体水平高于正常孕妇,TXNIP/NLRP3炎症小体/IL-1β途径与GDM胎盘组织胰岛素抵抗有一定的相关性,可通过检测孕妇体内IL-1β水平,来预测GDM的发生。

N-氨甲酰谷氨酸对猪胎盘滋养层细胞增殖及基因表达的影响

N-氨甲酰谷氨酸(NCG)对母猪胎盘发育和功能存在积极地调控作用。为研究NCG对母猪胎盘调控的作用机理,使用猪胎盘滋养层细胞(pTr)作为模型,用NCG体外处理猪pTr,研究NCG对细胞增殖和胎盘功能相关基因表达的影响。结果显示:1~25 mmol/L的NCG可以促进猪pTr细胞增殖1.2~1.5倍(P<0.05),10 mmol/L的NCG处理猪pTr后可显著上调CDK4、CCND1、SLC2A1和CAT基因的表达水平(P<0.05)。可见,NCG通过调控细胞周期、葡萄糖转运和抗氧化应激促进猪pTr细胞增殖。

人胎盘滋养层细胞表达白细胞介素-3

目的 :确定脐血中高含量白细胞介素 3(IL 3)的主要来源 ,进一步了解脐血造血微环境。方法 :应用抗IL 3多克隆抗体对 7例人工流产的绒毛标本和 1 0例健康产妇足月分娩的胎盘组织及脐带标本进行免疫组织化学染色。结果 :足月胎盘的滋养层细胞呈现阳性表达 ,绒毛标本的滋养层细胞未见阳性表达 ,在其他细胞和脐血管内皮细胞上未见阳性表达。结论 :胎盘滋养层细胞是脐血和胎盘表面的IL 3的主要来源。

miR-181a-5p调控IGF2BP2表达对胎盘滋养层细胞浸润、迁移能力的影响及机制

目的分析microRNA-181a-5p(miR-181a-5p)靶向调控胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白(IGF2BP2)的关系,以及对胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo浸润、迁移能力的影响和机制。方法采用Targetscan7.1预测软件及双荧光素酶报道基因试验,预测并验证miR-181a-5p对IGF2BP2基因的靶向调控作用。收集子痫前期(PE)和正常妊娠妇女胎盘组织各30例,以qRT-PCR法检测miR-181a-5p和IGF2BP2 mRNA,并分析二者表达的关系。将HTR-8/SVneo细胞分为NC组、miR-181a-5p过表达组和miR-181a-5p+IGF2BP2过表达组,用Lip2000分别转染无关序列、miR-181a-5p mimic、miR-181a-5p mimic+IGF2BP2过表达质粒12 h;qRT-PCR法检测细胞中的IGF2BP2 mRNA,Boyden实验观察细胞浸润能力,Transwell实验观察细胞迁移能力,Western blotting法检测细胞中的Wnt1和β-catenin蛋白。结果Targetscan7.1预测软件显示,miR-181a-5p与IGF2BP2 mRNA的3′UTR之间具有潜在的碱基互补结合位点;双荧光素酶报道基因试验显示,miR-181a-5p能降低野生型IGF2BP2 mRNA 3′UTR荧光素酶报告基因活性(P<0.05)。与正常妊娠妇女胎盘组织比较,PE胎盘组织中miR-181a-5p表达下降、IGF2BP2表达增加(P均<0.05),且两者表达呈负相关(r=-0.601,P<0.05)。与NC组比较,miR-181a-5p过表达组和miR-181a-5p+IGF2BP2过表达组细胞浸润和迁移的穿膜细胞数减少,细胞中IGF2BP2 mRNA、Wnt1和β-catenin蛋白表达减少(P均<0.05);与miR-181a-5p过表达组比较,miR-181a-5p+IGF2BP2过表达组细胞浸润和迁移的穿膜细胞数增多,细胞中IGF2BP2 mRNA、Wnt1和β-catenin蛋白表达增加(P均<0.05)。结论miR-181a-5p的靶基因为IGF2BP2,对其有负向调控作用;miR-181a-5p靶向调控IGF2BP2表达可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路降低胎盘滋养层细胞浸润和迁移能力。

体外感染巨细胞病毒的胎盘滋养层细胞超微结构的变化

目的:探讨巨细胞病毒(CMV)对胎盘滋养层细胞超微结构的影响。方法:取无菌胎盘组织分离提纯滋养层细胞,以含20%感染CMV患者血清的培养液感染滋养层细胞(实验组),同时用含20%正常人血清的培养液感染滋养层细胞作为阴性对照(对照组),以透射电子显微镜观察其超微结构变化。结果:实验组滋养层细胞肿胀,可见"猫头鹰眼细胞",细胞内观察到许多病毒颗粒样结构;溶酶体大量增生,可见到类似病毒核衣壳样小空泡;粗面内质网和高尔基复合体增生,线粒体增大。结论:CMV可通过感染胎盘滋养层细胞进而使胎儿发生宫内感染;CMV使胎盘滋养层细胞超微结构发生改变,影响其在母一胎界面的免疫调节,丧失了对胚胎的免疫保护。

亮氨酸对猪胎盘滋养层细胞增殖及氨基酸转运的影响

为研究亮氨酸(Leu)对猪胎盘滋养层细胞(pTr)增殖、凋亡以及氨基酸转运载体表达的影响及其机制,本试验用不同浓度Leu(0、1、10 mmol/L)分别处理pTr细胞24 h和48 h后,使用荧光定量PCR技术检测pTr细胞增殖和凋亡相关基因、氨基酸转运载体以及mTOR信号通路关键蛋白等的mRNA表达水平。结果表明:Leu处理pTr细胞24 h后,1 mmol/L试验组的SNAT1(P<0.01)、4E-BP1 (P<0.05)和eIF4G(P<0.05)的mRNA相对表达量低于对照组;Leu处理pTr细胞48 h后,1 mmol/L试验组LAT1(P<0.05)、4E-BP1(P<0.01)的mRNA相对表达量低于对照组,10 mmol/L试验组CDK4(P<0.05)、4E-BP1 (P <0.01)、SNAT1 (P <0.01)、SNAT2 (P <0.01)、LAT1 (P <0.01)以及rBAT (P <0.05)的mRNA相对表达量也低于对照组;Leu处理pTr细胞24 h和48 h后,10 mmol/L组mTORC1的mRNA相对表达量较对照组和1 mmol/L组均极显著提高(P<0.01)。可见,10 mmol/L Leu会抑制pTr细胞的增殖活力,并可能通过mTOR信号通路的介导,降低了pTr细胞氨基酸转运载体的表达。