芹菜素调节AMPK/mTOR通路对子痫前期胎盘滋养细胞自噬的影响研究

目的探究芹菜素对子痫前期(preeclampsia,PE)胎盘滋养细胞自噬的影响及可能的作用机制。方法取人绒毛膜滋养层HTR-8/Svneo细胞,采用缺氧复氧1 h(hypoxic-reoxygenation 1 h,H1R1)诱导建立PE细胞模型,并通过MTT法检测芹菜素对HTR-8/Svneo细胞毒性的影响。取对数生长期的HTR-8/Svneo细胞,分为对照组、H1R1组、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)激活剂阿卡地新(acadesine,AICAR)组(1 mmol/L)、芹菜素低剂量组(10μmol/L)、芹菜素高剂量组(20μmol/L)、芹菜素+AICAR组(芹菜素20μmol/L+AICAR 1 mmol/L)。采用MTT法检测细胞活力;透射电子显微镜观察细胞自噬情况;划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot法检测细胞AMPK/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路和自噬、侵袭相关蛋白的表达。结果与对照组比较,10、20μmol/L芹菜素对HTR-8/Svneo细胞增殖有促进作用(P<0.05)。与对照组比较,H1R1组细胞在24、48、72 h时细胞活力、划痕愈合率和穿膜细胞数、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达、p-mTOR/mTOR比值显著降低(P<0.05),微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3Ⅱ)/微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅰ,LC3Ⅰ)比值、Beclin-1和E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达、p-AMPK/AMPK比值显著升高(P<0.05),自噬小体数量增多(P<0.05);与H1R1组比较,芹菜素低、高剂量组细胞活力、划痕愈合率和穿膜细胞数、N-cadherin表达、p-mTOR/mTOR比值显著升高(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1和E-cadherin表达、p-AMPK/AMPK比值显著降低(P<0.05),自噬小体数量减少(P<0.05);与芹菜素高剂量组比较,芹菜素+AICAR组细胞在24、48、72 h时细胞活力、划痕愈合率和穿膜细胞数、N-cadherin表达、p-mTOR/mTOR比值显著降低(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1和E-cadherin表达、p-AMPK/AMPK比值显著升高(P<0.05),自噬小体数量增多(P<0.05)。结论芹菜素能增强滋养细胞的侵袭能力,改善PE,其作用机制可能与抑制AMPK/mTOR通路介导的胎盘滋养细胞过度自噬有关。

补肾安胎冲剂含药血清对复发性流产小鼠胎盘滋养细胞功能、血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的观察补肾安胎冲剂含药血清对复发性流产(RSA)小鼠胎盘滋养细胞功能、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGF-R1、VEGF-R2表达的影响,探讨其治疗RSA的作用机制。方法RSA模型小鼠(CBA/J×DBA/2)和正常妊娠小鼠(CBA/J×BALB/c)分离培养胎盘滋养细胞,将细胞分为正常对照组(正常妊娠小鼠胎盘滋养细胞+空白血清)、模型组(RSA小鼠胎盘滋养细胞+空白血清)和补肾安胎冲剂组(RSA小鼠胎盘滋养细胞+最佳浓度补肾安胎冲剂含药血清),CCK8法检测胎盘滋养细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期,RT-qPCR检测细胞VEGF、VEGF-R1、VEGF-R2 mRNA表达,Western blot检测细胞VEGF、VEGF-R1、VEGF-R2蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组胎盘滋养细胞增殖活力明显降低(P<0.05),S期细胞比例明显减少,G2/M期细胞比例明显增加(P<0.05),VEGF、VEGF-R1、VEGF-R2mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,补肾安胎冲剂组胎盘滋养细胞增殖活力明显增加(P<0.05),S期细胞比例明显增加,G2/M期细胞比例明显减少(P<0.05),VEGF、VEGF-R1、VEGF-R2mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论补肾安胎冲剂含药血清可增强RSA小鼠胎盘滋养细胞增殖活力,上调VEGF及其受体VEGF-R1、VEGF-R2表达,促进母胎界面血管新生,从而提高妊娠成功率。

RAGE/NF-κB通路对妊娠期糖尿病大鼠胎盘滋养细胞凋亡及胎盘屏障功能改变的影响

目的:探讨晚期糖基化终末产物受体(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)通路对妊娠期糖尿病(GDM)大鼠胎盘滋养细胞凋亡及胎盘屏障功能改变的影响。方法:将受孕雌性SD大鼠随机分为正常妊娠组、模型组(GDM组)、RAGE抑制剂组(FPS-ZM1组)、RAGE抑制剂阴性对照组(FPS-ZM1 NC组)、RAGE激活剂组(RAGE组)、RAGE激活剂阴性对照组(RAGE NC组),每组20只。除正常妊娠组外,其余各组均建立GDM模型,并在妊娠第5天开始给药,连续给药2周后,比较各组空腹血糖(FBG)、晚期糖基化终末产物(AGE)、胎盘重量、胎鼠重量、胎盘通透性、胎盘滋养细胞凋亡率;胎盘组织RAGE、NF-κB、紧密连接蛋白(TJ)、囊膜蛋白-2(Syncytin-2)、调解超家族蛋白2 A(MFSD2 A)、抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的差异。结果:与正常妊娠组相比,GDM组大鼠FBG及AGE水平、胎盘重量及胎鼠重量、胎盘组织伊文思蓝(EB)含量、RAGE和NF-κB阳性表达水平、IL-6、TNF-α、Bcl-2蛋白表达均升高((印)P(正)<0.05),胎盘滋养细胞凋亡率、TJ、Syncytin-2、MFSD2 A蛋白表达均降低((印)P(正)<0.05)。与GDM组相比,RAGE组大鼠FBG及AGE水平、胎盘重量及胎鼠重量、胎盘组织EB含量、RAGE和NF-κB阳性表达水平、IL-6、TNF-α、Bcl-2蛋白表达均升高((印)P(正)<0.05),胎盘滋养细胞凋亡率、TJ、Syncytin-2、MFSD2 A蛋白表达均降低((印)P(正)<0.05);FPS-ZM1组大鼠FBG及AGE水平、胎盘及胎鼠重量、胎盘组织EB含量、RAGE和NF-κB阳性表达水平、IL-6、TNF-α、Bcl-2蛋白表达均降低((印)P(正)<0.05),胎盘滋养细胞凋亡率、TJ、Syncytin-2、MFSD2 A蛋白表达均升高((印)P(正)<0.05)。GDM组、RAGE NC组及FPS-ZM1 NC组大鼠上述指标差异均无统计学意义((印)P(正)>0.05)。结论:RAGE/NF-κB通路激活参与GDM大鼠胎盘滋养细胞凋亡及胎盘屏障功能损伤过程,抑制RAGE/NF-κB通路激活可促进胎盘滋养细胞凋亡,改善胎盘屏障功能,缓解GDM大鼠胎盘及胎鼠过度增长发育。

NO水平下降通过氧化应激引起人胎盘滋养细胞凋亡

目的探讨一氧化氮(NO)水平下降诱导人胎盘滋养细胞凋亡的可能机制。方法体外培养人胎盘滋养细胞株(HTR-8),分别加入10、100、500、1 000μmol·L-1L-NAME,并设置对照组(0μmol·L-1L-NAME),孵育48 h;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测L-NAME对细胞存活率的影响;采用硝酸还原酶法测定细胞中NO的含量;利用透射电镜、流式细胞术和Annexin-V FITC染色检测L-NAME对HTR-8细胞凋亡的影响;Fe3+还原比色法检测总抗氧化能力(T-AOC)、黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量。结果与对照组比较,100、500、1 000μmol·L-1L-NAME组细胞存活率及NO水平明显降低(P<0.05,P<0.01);Annexin-V FITC染色和流式分析均显示L-NAME能诱导细胞凋亡,并且呈剂量依赖性;NO水平与细胞凋亡数呈负相关(r=-0.5210);透射电镜结果显示:与对照组比较,实验组细胞核形态不规则,核膜固缩呈不规则状,染色质凝集或边集,线粒体肿胀或浓缩、嵴断裂或溶解,甚至消失,形成空泡,尤其在100μmol·L-1L-NAME组可见凋亡小体;同时,HTR-8细胞内T-AOC、SOD水平明显降低(P<0.05),MDA的含量明显升高(P<0.05);细胞凋亡数与T-AOC(r=-0.3212)、SOD(r=-0.2779)水平均呈负相关,与MDA(r=0.2807)含量呈正相关。结论氧化应激在NO水平降低引起的人胎盘滋养细胞凋亡中起重要作用。

ASPP2调控GRP78在L-NAME诱导胎盘滋养细胞凋亡中的作用

目的探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of p53,ASPP2)调控葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)在N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-nitroarginine methyl ester,L-NAME)诱导胎盘滋养细胞凋亡中的作用,为临床研究妊娠期高血压疾病提供理论依据。方法体外培养HTR-8/SVneo人胎盘滋养细胞,分为对照组(0μmol·L^(-1)L-NAME)和L-NAME组(100μmol·L^(-1)LNAME),干预48 h后,分别采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术和吖啶橙/溴化乙锭染色,检测胎盘滋养细胞凋亡水平的变化;运用Western blot检测caspase-12、GRP78和ASPP2的蛋白变化; ASPP2干扰腺病毒感染人胎盘滋养细胞后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASPP2的mRNA表达水平,Western blot检测GRP78的蛋白表达水平;给予100μmol·L^(-1) L-NAME干预48 h后,Western blot和免疫荧光分别检测caspase-12和GRP78的蛋白表达。结果与对照组相比,L-NAME组胎盘滋养细胞凋亡水平明显增加(P <0. 05);吖啶橙染色显示,与对照组相比,L-NAME组细胞多数呈现鲜亮的橙色,晚期凋亡细胞数明显增加;同时caspase-12、GRP78和ASPP2蛋白的表达明显增加(P <0. 05,P <0. 01);干扰ASPP2后,caspase-12和GRP78蛋白表达明显降低(P <0. 05)。结论下调ASPP2可降低GRP78的表达,进而抑制L-NAME诱导的胎盘滋养细胞凋亡。

胎盘滋养细胞bax与bcl-2基因表达对分娩发动及妊娠时限的影响

目的 :探讨胎盘滋养细胞凋亡调控基因bax、bcl-2表达对分娩的影响。方法 :采用免疫组化法测定14例自然早产 ,18例足月自然临产 ,19例足月择期剖宫产 ,12例延期或过期自然临产及12例延期或过期未临产而行剖宫产孕妇胎盘滋养细胞bax、bcl-2基因的表达水平。结果 :在自然临产的孕妇中早产、足月产和延期或过期妊娠3组bax基因表达差别无统计学意义 (P>0.05) ;在足月以及延期或过期妊娠中 ,自然临产组bax基因表达水平均显著高于未临产组 (P<0.05) ,而2组bcl-2基因表达水平差别均无统计学意义 (P>0.05) ;延期或过期妊娠组的bcl-2基因表达水平显著低于足月妊娠组。结论 :促凋亡调控基因bax较抑凋亡调控基因bcl-2在分娩发动中发挥了更大的作用 。

过期妊娠胎盘滋养细胞Bax、Bcl-2基因表达情况的研究

目的 :通过观察过期妊娠患者促凋亡基因Bax和抑凋亡基因Bcl 2在胎盘滋养细胞层的表达 ,探讨细胞凋亡与过期妊娠的关系。方法 :采用免疫组织化学方法对20例过期妊娠和20例正常足月妊娠产妇的胎盘滋养细胞层Bax和Bcl 2基因表达进行检测和对比研究。结果 :胎盘滋养细胞层Bax和Bcl-2基因表达过期妊娠组分别为 (44 87±3 16) %和 (20 03±3 82) % ,足月妊娠组分别为 (43 89±3 96) %和 (34 14±3 85) %。2组比较Bax表达差别无统计学意义 (P>0 05) ,而Bcl 2表达差别有统计学意义 (P<0 05)。结论 :(1)胎盘滋养细胞层抑凋亡基因Bcl 2表达减少 ,可能与过期妊娠有关。 (2)

黄芩苷对子痫前期大鼠胎盘滋养细胞增殖侵袭的作用机制研究

[目的]探讨黄岑苷对子痫前期大鼠胎盘组织滋养细胞增殖侵袭的影响及相关的作用机制。[方法]选择36只健康清洁级SD大鼠,其中雌性24只,雄性12只,按照2∶1比例安排雌雄合笼,24只雌鼠妊娠第13天建立子痫前期大鼠模型,成功20只。从建模成功雌鼠中随机取5只进行原代滋养细胞分离、培养及传代,倒置显微镜下观察滋养细胞形态,以免疫荧光染色法鉴定滋养细胞纯度,四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测吸光度(optical density,OD)值,评估胎盘滋养细胞增殖活性。将其余15只建模成功雌鼠分为对照组(以0.3 mL蒸馏水灌胃)、黄岑苷低剂量组(以25μg·mL;黄岑苷灌胃)、黄岑苷高剂量组(以100μg·mL;黄岑苷灌胃),灌胃后取腹主动脉血;同时将原代滋养细胞分为A组、B组、C组,分别以对照组、黄岑苷低剂量组、黄岑苷高剂量组大鼠血清培养48 h,采用Transwell法检测各组滋养细胞侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, Real-time qPCR)法检测微小RNA-30d(microRNA-30d,miR-30d)、神经胶质细胞缺失同源物-1(glial cells missing homolog-1,GCM-1)mRNA表达水平,免疫印迹法检测GCM-1蛋白相对表达量。[结果]胎盘滋养细胞经消化、传代后,倒置显微镜下观察呈上皮样细胞形态,多为长多边形,体积大,核大呈卵圆形,呈片状延展生长,贴壁后呈铺路石样;滋养细胞纯度(90.65±5.64)%。与空白组比较,20、40、60、80、100μg·mL;黄岑苷组OD值增高(P<0.05)。与A组比较,B组、C组侵袭细胞数增多,miR-30 d表达水平降低,GCM-1 mRNA及蛋白相对表达量升高(P<0.05);与B组比较,C组侵袭细胞数增多,miR-30 d表达水平降低,GCM-1 m RNA及及蛋白相对表达量升高(P<0.05)。[结论]黄岑苷可提升子痫前期大鼠胎盘滋养细胞增殖、侵袭能力,作用机制可能与抑制miR-30d表达、上调GCM-1蛋白表达有关。

葡萄糖调节蛋白78在子痫前期胎盘滋养细胞中的表达及意义

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在子痫前期孕妇胎盘组织中表达及其与子痫前期发病机制的关系。方法:选择2009年1～12月在青岛市市立医院及青岛市第八人民医院住院的子痫前期孕妇120例,其中早发型轻度子痫前期孕妇30例(早发轻度组),晚发型轻度子痫前期孕妇30例(晚发轻度组),早发型重度子痫前期孕妇30例(早发重度组),晚发型重度子痫前期孕妇30例(晚发重度组);另选同期健康孕妇30例为健康孕妇组。采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胎盘组织中GRP78 mRNA相对表达量;采用免疫组织化学方法、Western-Blotting检测胎盘组织GRP78蛋白的表达。结果:①子痫前期各组胎盘组织中GRP78 mRNA表达水平均高于健康孕妇组,差异有统计学意义(P<0.05);但子痫前期各组间分别比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②子痫前期各组和健康孕妇组胎盘组织中都有GRP78蛋白表达,主要表达于细胞质,呈棕黄色染色。Western-Blotting检测结果显示,子痫前期各组胎盘组织中GRP78蛋白表达水平均高于健康孕妇组,差异有统计学意义(P<0.05);但子痫前期各组间分别比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:GRP78在子痫前期胎盘组织中表达升高,GRP78的表达水平变化可能与子痫前期发病有关。

miR101调控EZH2抑制胎盘滋养细胞葡萄糖吸收参与妊娠糖尿病机制研究

目的研究miR101通过调节组蛋白甲基转移酶同源序列2增强子(EZH2)蛋白对胎盘滋养细胞葡萄糖吸收的影响,以及miR101在妊娠期糖尿病(GDM)中的可能作用机制。方法选取GDM孕妇和正常孕妇各30例分别作为观察组和对照组,qRT-PCR检测胎盘组织miR101和EZH2 mRNA表达,Western blot检测胎盘组织中EZH2蛋白表达。取人绒毛膜滋养层细胞转染miR101模拟物、miR101模拟物对照序列、miR101抑制剂和miR101抑制剂对照序列分别作为M组、M-NC组、I组和I-NC组,设立空白对照B组,每组设立6个平行复孔。qRT-PCR检测转染细胞miR101、EZH2 mRNA表达量,Western blot检测转染细胞EZH2蛋白表达量,葡萄糖测定试剂盒检测转染细胞对葡萄糖的吸收量。结果观察组miR101表达水平高于对照组(t=5.433,P<0.05),EZH2表达水平低于对照组(t=2.178,P<0.05)。细胞转染后:①M组miR101表达水平较B组和M-NC组上升(t=2.133、2.167,P<0.05),I组转染miR101表达水平较B组和I-NC组下降(t=2.918、2.331,P<0.05);②M组EZH2蛋白表达水平较B组和M-NC组下降(t=2.018、2.257,P<0.05),I组转染EZH2蛋白表达水平较B组和I-NC组升高(t=3.271、3.167,P<0.05);③M组葡萄糖消耗量较B组和M-NC组升高(t=3.106、2.115,P<0.05),I组葡萄糖消耗量较B组和I-NC组降低(t=2.002、2.158,P<0.05)。结论GDM患者胎盘组织中miR101表达异常升高,miR101可调控EZH2表达降低胎盘滋养细胞对葡萄糖吸收量,参与GDM病理机制。

HBxAg对胎盘滋养细胞凋亡的影响及其作用机制

目的探讨乙型肝炎病毒X(HBx)蛋白对胎盘滋养层细胞凋亡水平的影响及可能的作用机制。方法将已构建好的HBx基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx瞬时转染人绒毛膜癌细胞株JEG-3及HTR-8,分别以转染空载体pcDNA3.1(+)和未转染作为阴性对照组和空白对照组,转染后48h,以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)鉴定HBx-mRNA,间接免疫荧光法和蛋白印迹法(Western blot)鉴定HBxAg的表达;流式细胞仪AnnexinⅤ+PI双染方法检测细胞凋亡状态;间接免疫荧光法、流式细胞仪及Western blot检测PI3K、pAKT的表达。结果JEG-3及HTR-8转染组中均有HBx蛋白表达,而在对照组未被检测到;转染组JEG-3、HTR-8细胞早期凋亡率小于阴性对照组(P<0.05),PI3K和pAKT1的表达水平高于阴性对照组(P<0.05),然而AKT1蛋白表达水平在转染组、阴性对照组和空白对照组间无显著性差别。结论 HBx基因可以成功地转入JEG-3及HTR-8细胞,HBx转染后可抑制滋养细胞凋亡,这可能与HBx激活PI3K/pAKT信号通路有关。

cAMP-PKA信号转导通路在调节胎盘滋养细胞分化中的作用

人类胚胎的着床、胚胎和胎盘的发育与胎盘滋养细胞的生物学紧密相关。绒毛外和绒毛中的滋养细胞是胎盘解剖学界面的胚胎／胎儿组织，在所有胎盘成分中，滋养细胞在结构、功能和进展上最具多变性。正常妊娠时滋养细胞分化等生物学行为受到严格调控；当遗传或外界因素致调控因素或机制失衡，导致滋养细胞分化异常，可能参与病理妊娠如流产、子痫前期、妊娠期高血压疾病等的发病。

自噬相关蛋白P62、OPTN在重度子痫前期胎盘滋养细胞中的表达及意义

研究自噬相关蛋白P62和OPTN在重度子痫前期胎盘滋养细胞中的表达及意义.分别收集正常孕妇、子痫前期重度患者胎盘组织各30例.用Western Blot法检测两组胎盘组织中自噬相关蛋白P62和OPTN的表达.结果表明:(1)正常孕妇和子痫前期重度患者胎盘滋养细胞中的P62和OPTN阳性表达有统计学差异(P<0.05),P62与病变程度呈负相关,OPTN与病变程度呈正相关;(2)P62和OPTN与子痫前期病变的发生发展密切相关,重度子痫前期患者胎盘滋养细胞中存在过度自噬.

妊娠高血压综合征胎盘滋养细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达

目的 探讨HIF 1α在妊娠高血压综合征及正常妊娠胎盘滋养细胞中的表达异同 ,及其与硫酸镁治疗及妊高征分组的关系。方法 分别取妊高征胎盘及正常妊娠胎盘各 2 0例 ,免疫组化SABC法检测各组中HIF 1α的表达。计算机辅助图像分析 ,t检验对比结果。结果 2 0例妊高征胎盘中HIF 1α的分析值为 5 719± 0 5 91,而 2 0例正常妊娠胎盘中HIF 1α的值为 3 10 2± 0 5 81,两组间有显著差异 (P <0 0 0 1) ,HIF 1α在妊高征轻、中、重组间无显著差异 (P >0 0 5 ) ,在硫酸镁治疗前后无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 妊高征胎盘滋养细胞中HIF 1α表达明显增高 ,提示其可能参与了妊高征滋养细胞浅着床的过程。

复方丹参注射液对重度子痫前期患者胎盘滋养细胞凋亡的影响

目的探讨复方丹参对重度子痫前期(sPE)患者胎盘滋养细胞凋亡的影响。方法用胰酶/DNase消化法、Percoll分离液提取纯化人胎盘滋养细胞,用免疫细胞化学(荧光)法检测细胞爬片中角蛋白(CK7)及波形蛋白(Vimentin)的表达进行滋养细胞的鉴定。正常对照组和sPE组用DMEM/F12完全培养液培养72 h,丹参组先用用DMEM/F12完全培养液培养细胞48 h,再加入6.25 mg/mL的复方丹参注射液,继续培养24 h,然后收集细胞,分别用流式细胞仪AnnexinV/PI双染和TUNEL(荧光)法检测凋亡情况。结果流式细胞仪检测所见,正常对照组细胞早期凋亡率明显低于其他两组,而sPE组最高,各组间差异有统计学意义;TUNEL检测结果显示:sPE组凋亡阳性细胞数明显高于其他两组,正常对照组凋亡细胞最少,各组间差异有统计学意义。结论 sPE胎盘滋养细胞较正常妊娠胎盘滋养有着更高的凋亡率;复方丹参对sPE患者胎盘滋养细胞凋亡有明显的抑制作用。

黄芪丹参复方成分对一氧化氮合成阻滞孕鼠胎盘滋养细胞内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的研究黄芪丹参复方成分提高胎盘血供的分子机制,为临床有效防治胎盘血供不足所致妊娠并发症提供思路。方法提取分离有效中药黄芪、丹参复方成分,运用NOS(一氧化氮合酶)阻滞剂L-精氨酸甲酯(L-NAME)制作一氧化氮合成阻滞大鼠模型,黄芪丹参复方成分妊娠期干预。核酸原位杂交技术检测妊娠18日胎盘滋养细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达变化。结果中药治疗组、对照组、空白组内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达明显高于模型组,差异有显著意义(P<0.01),空白组与治疗组比较差异无显著意义(P>0.05)。结论黄芪丹参复方成分可能提高胎盘滋养细胞NO合成与释放入循环,从而维持妊娠期胎盘循环的高流速、低阻力状态,达到有效防治妊娠高血压综合征及胎儿宫内生长迟缓等胎盘血供不足类疾病的目的。

复发性流产患者胎盘滋养细胞凋亡及Fas、FasL表达的研究

目的 :通过比较正常早孕妇女和复发性流产 (RSA)患者胎盘绒毛滋养细胞凋亡及Fas、FasL表达 ,进一步从细胞及分子水平探讨复发性流产的发病机理。方法 :应用免疫组织化学SP方法 ,测定 30例RSA患者和 2 5例正常早孕妇女胎盘绒毛滋养细胞Fas和FasL基因蛋白的表达 ,并通过MIAS 2 0 0 0医用彩色病理图像免疫组化测量系统对其表达进行半定量分析 ,其结果用平均灰度表示 ;同时应用DNA缺口原位末端标记技术 (TUNEL法 )测定两组胎盘绒毛滋养细胞凋亡情况。结果 :RSA组患者胎盘绒毛FasL的表达低于正常组 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;而Fas表达两组比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,胎盘绒毛细胞滋养细胞及合体滋养细胞的凋亡指数 ,RSA组明显高于正常组 ,差异有非常显著性 (P<0 0 1)。结论 :细胞凋亡的增加可能是RSA发生的一个重要病理过程 ,且RSA患者胎盘绒毛滋养细胞表面FasL表达减少 ,导致母胎间免疫耐受的破坏 ,引起异常的免疫反应可能是RSA发病的重要机制。

黄芪丹参复方成分对妊高征大鼠胎盘滋养细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的研究黄芪丹参复方成分提高胎盘血供的分子机制,为临床有效防治胎盘血供不足所致妊娠并发症提供思路。方法提取分离有效中药黄芪、丹参复方成分,运用NOS(一氧化氮合酶)阻滞剂L-精氨酸甲酯(L-NAME)制作一氧化氮合成阻滞大鼠模型,原位杂交(ISH)法,观察胎盘滋养细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达变化及黄芪丹参复方有效成分的影响作用。结果模型组iNOS mRNA表达明显增加,与黄芪丹参治疗组、阳性药物硝酸甘油组均有显著差异(P<0.01)。结论黄芪丹参复方成分可能降低母胎界面妊娠免疫反应,阻抑胎盘免疫病理损伤,提高胎盘滋养细胞合成与释入NO进入胎盘循环,从而维持妊娠母胎循环张力,达到提高子宫-胎盘-胎儿血液供应目的。

胎盘滋养细胞IMP3蛋白与妊娠期高血压疾病的关系

选取足月分娩的正常妊娠胎盘30例,妊娠期高血压胎盘30例,轻度子痫前期胎盘30例,重度子痫前期胎盘30例,取胎盘组织制备单细胞悬液,MTT检测各组胎盘滋养细胞增殖活性;FCM检测各组胎盘滋养细胞的凋亡率;western blot检测胎盘滋养细胞IMP3蛋白表达表达。结果妊娠期高血压疾病各组胎盘滋养细胞的生长增殖活性明显低于正常妊娠分娩的胎盘滋养细胞(P<0.05);而妊娠期高血压疾病各组胎盘滋养细胞的凋亡率显著高于正常妊娠分娩的胎盘滋养细胞(P<0.05);同时妊娠期高血压疾病各组胎盘滋养细胞IMP3蛋白表达显著上调(P<0.05)。妊娠期高血压疾病的发生发展与胎盘滋养细胞IMP3蛋白下调进而诱导胎盘滋养细胞凋亡抑制胎盘滋养细胞增殖相关。

HBV宫内传播与胎盘滋养细胞丝裂素活化蛋白激酶信号转导通路的研究进展

乙型肝炎病毒（HBV）母婴传播是严重的全球性公共卫生问题。我国为HBV感染的高发国家。每年约有160万新生儿出生于乙型肝炎表面抗原（HB—sAg）阳性的母亲,约20万儿童通过母婴垂直传播感染而成为乙肝携带者。