抗人胎盘酸性铁蛋白单链抗体的构建、表达与鉴定

目的:制备人胎盘酸性铁蛋白(PAF),构建、表达并鉴定抗人PAF单链可变区抗体片段(scFv)。方法:设计以SfiⅠ、NotⅠ为酶切位点、以(Gly4Ser)3为linker的2对引物,从抗人PAF单克隆抗体可变区基因的克隆载体中扩增VH和VL基因,用重叠延伸PCR在VH和VL基因间引入连接短肽,构建VH-linker-VL的scFv基因。经SfiⅠ、NotⅠ酶切后克隆到原核分泌型表达载体pUC19/119上,转化大肠杆菌TG1和筛选后测序验证,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量(Mr)。以人PAF为抗原,scFv为一抗,抗His单克隆抗体为二抗,间接ELISA鉴定其抗体活性。结果:重叠延伸PCR扩增产物经凝胶电泳可见约700bp的条带,DNA序列分析证明2株抗体具有完整的scFv序列,并含有c-myc和His。IPTG诱导阳性菌表达产物经SDS-PAGE鉴定有Mr约27000的显示条带,符合scFv与表达标签融合蛋白的理论值;间接ELISA证明表达产物可与PAF结合。结论:成功构建并表达了抗人PAF单链抗体,为进一步建立检测PAF的间接ELISA奠定了基础。

胎盘酸性铁蛋白研究新进展

生殖道免疫状态 ,尤其是子宫局部免疫状态的研究 ,已成为生殖免疫学的研究重点。

抗PAF单链抗体的基因构建及蛋白质3D模建

构建抗PAF单链抗体的基因并通过计算机模建分析几种不同连接类型的单链抗体空间结构差异 .采用重叠延伸PCR方法扩增了VH和VL基因 ,形成抗PAF的VH Linker VL (ScFv)基因产物 ,并经菌落PCR和测序分析鉴定 ,通过Internet对其 3D结构进行了模建与分析 .研究结果表明 :PCR产物电泳可见一条与目的基因大小一致的片段 ,经菌落PCR和测序分析鉴定 ,抗PAF单链抗体的基因构建成功 ;VH和VL在单链抗体中的顺序对单链抗体

铁代谢紊乱与治疗

铁是人体必需的微量原素之一,正常人体内含铁3～5g(平均4.5g),其中2/3分布于红细胞的血红蛋白中,约1/3以铁蛋白(ferritin)、含铁血黄素(homosiderin)的形式存于肝、脾、骨髓等组织的单核-巨噬细胞系统。正常人血清铁为14.3～26.9μmol/L,铁蛋白男性为15～200μg/L,女性为102～150μg/L。血清转铁蛋白含量为2～4g/L,转铁蛋白饱和度为33％～35％。 铁的生理功能不仅参加制造血红蛋白和肌红蛋白,而且铁与氧的运输和生物氧化反应关系亦甚密切,还参与细胞色素氧化酶、过氧化物酶等的合成。