NF-κB决定小鼠胎肝激酶-1基因启动子的基本活性

为克隆小鼠胎肝激酶-1(fetal liver kinase-1,FLK-1)基因上游启动子序列,并观察其不同截短片段在小鼠血管内皮细胞中的启动子活性,以小鼠全基因组为模板,通过PCR扩增方法获得-258^+299bp、-96^+299bp、-71^+299bp、-36^+299bp大小的FLK-1启动子片段,将其定向克隆入pGL3-Basic,构建荧光素酶报告基因载体,并制备NF-κB结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体介导下,报告基因载体瞬时转染小鼠血管内皮细胞株SVEC4-10.结果发现,在小鼠血管内皮细胞中,各FLK-1启动子片段均有活性;-71^-36bp区存在FLK-1启动子的核心调控元件.针对该区域NF-κB结合位点进行突变或缺失,能导致启动子活性显著降低;凝胶电泳迁移率实验表明该区段能结合转录因子NF-κB.结果提示,成功克隆了在血管内皮细胞中具有活性的FLK-1上游启动子序列,NF-κB是决定其基本活性的重要转录因子,为进一步研究FLK-1基因的转录调控机制奠定了基础.

血管内皮生长因子及其受体胎肝激酶-1在大鼠失神经骨骼肌血管壁中的表达

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)及其受体胎肝激酶-1(flk-1)在大鼠失神经骨骼肌血管壁中的表达变化规律。方法取成年雄性SD大鼠27只,其中健康对照组3只,实验组切断双侧坐骨神经后,在术后4 h、8 h、12 h、24 h、3 d、5 d、7 d、14 d取双侧腓肠肌组织,采用免疫组织化学方法和图像分析技术,对VEGF在肌肉中血管壁及flk-1在血管内皮的表达进行检测和分析。结果在正常大鼠腓肠肌,VEGF在血管壁有表达,flk-1只在血管内皮有表达。坐骨神经切断8 h内VEGF在血管壁中的表达呈一过性的降低,随后至术后3 d保持在低于健康对照组的低水平表达。术后3 d至14 d表达逐渐增强,但14 d时VEGF的表达量仍明显低于健康对照组。坐骨神经切断后flk-1在血管内皮的表达于术后0～12 h呈现先升高而后降低的明显波动,术后24 h～14 d表达逐渐升高。结论本实验揭示了早期失神经支配骨骼肌血管壁内VEGF及其受体胎肝激酶-1(flk-1)的表达变化规律,为进一步研究它们在失神经骨骼肌内表达的调节机制、血管退化在失神经肌萎缩中的作用及临床应用VEGF治疗失神经肌萎缩奠定了基础。

小鼠胎肝激酶-1阳性细胞向胆管细胞和肝细胞分化

干细胞对再生医学和人工器官的发展具有巨大潜在应用价值.肝脏可能是再生医学的一个很有吸引力的目标,理由是：（1）肝脏是一种多种遗传性和获得性代谢性疾病的易损器官;（2）增殖肝可接受来自同基因供者的肝细胞.

Flk-1/KDR在妊娠滋养细胞疾病中的表达及其与葡萄胎恶变的相关性研究

目的:探讨妊娠滋养细胞疾病(GTD)胎肝激酶-1(Flk-1/KDR)表达特征及其与葡萄胎恶变的关系。方法:采用免疫组织化学(immunohistochemisty)法对78例GTD组织和10例正常早孕绒毛组织Flk-1/KDR进行半定量检测。结果:GTD组织和正常早孕绒毛组织均表达Flk-1/KDR,在GTD中的表达水平显著高于正常早孕绒毛组,在完全性葡萄胎中Flk-1/KDR的表达水平显著高于部分性葡萄胎(P<0.05)。日后恶变组葡萄胎Flk-1/KDR表达量显著高于非恶变组葡萄胎(P<0.01)。结论:完全性葡萄胎中Flk-1/KDR的表达水平显著高于部分性葡萄胎,恶变组葡萄胎Flk-1/KDR表达量显著高于非恶变组葡萄胎,可能与葡萄胎恶变有关,有可能成为预测葡萄胎恶变的新指标。

桂枝茯苓丸联合达那唑对子宫内膜异位症患者血清VEGF Flk-1和炎性因子水平的影响

目的:观察桂枝茯苓丸和达那唑联合治疗子宫内膜异位症(EMs)的临床效果及对其血清血管内皮生长因子(VEGF)、胎肝激酶(Flk)-1、炎性因子水平的影响。方法:选取2015年2月至2016年12月116例EMs患者,采用随机数字表法均分为两组。对照组给予达那唑治疗,观察组给予桂枝茯苓丸和达那唑联合治疗。比较两组治疗后临床综合疗效,治疗前后血清VEGF、Flk-1、炎性因子水平及不良反应的发生情况。结果:治疗后,观察组总有效率较对照组明显上升(P<0.05)。与治疗前相比,两组治疗后血清VEGF、Flk-1、IL-6、IL-8、CRP水平均显著下降(P<0.01),且观察组以上指标均显著低于对照组(P<0.01)。两组不良反应发生率相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:桂枝茯苓丸和达那唑联合治疗子宫内膜异位症能显著提高其临床疗效且安全性高,可能与其有效降低患者血清VEGF、Flk-1和炎性因子水平有关。

川芎嗪促进放射损伤小鼠骨髓微环境修复VEGF/flk-1途径作用的研究

目的:探讨川芎嗪对放射损伤小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及其意义。方法:采用蛋白免疫印迹(Westernblot)法、免疫组化法及流式细胞术,对放射损伤小鼠BMSCs中VEGF蛋白表达水平、骨髓组织中VEGF受体胎肝激酶1(flk1)表达变化、BMSCs凋亡率及细胞周期改变进行分析,同时观察川芎嗪的影响。结果:放射损伤后小鼠BMSCs中VEGF和骨髓组织中flk1表达均明显低于正常水平,随时间推移而逐渐升高,但照射后第14d仍未恢复正常;而川芎嗪组在第14d时已接近正常水平。放射损伤后BMSCs停滞于G0/G1期,S期合成减少,凋亡率明显增加;随时间推移G0/G1期细胞比例呈由高到低变化,凋亡率也逐渐降低,但第14d时仍未恢复正常;用川芎嗪治疗后,BMSCs的S期合成活跃,凋亡率明显下降,第14d时恢复更明显,接近正常水平。骨髓切片苏木素伊红(HE)染色也证实川芎嗪组小鼠造血恢复明显较对照组快。结论:川芎嗪促进BMSCs中VEGF的表达,通过VEGF/flk1途径改善放射损伤小鼠骨髓微环境,是其促进造血功能恢复的机制之一。

子宫内膜异位症患者血清Flk-1、COX-2水平及与病情、疼痛关系

目的:探讨子宫内膜异位症(EMT)患者血清胎肝激酶(Flk)-1、环氧化酶-2(COX-2)水平变化及与病情、疼痛程度关系。方法:选择2019年1月-2020年12月EMT患者112例为EMT组,根据视觉模拟量表(VAS)评估盆腔疼痛程度分为无痛组(n=23)、轻度疼痛组(n=26)、中度疼痛组(n=45)与重度疼痛组(n=18);根据美国生育协会修正分期法(r-AFS)分为Ⅰ期(n=16)、Ⅱ期(n=44)、Ⅲ期(n=29)、Ⅳ期(n=23);体检健康育龄妇女70例为对照组。检测各组血清Flk-1、COX-2水平,并与疼痛程度进行相关性分析。结果:EMT组血清Flk-1(26.60±7.44ng/ml)、COX-2(3.16±0.53ng/ml)高于对照组(6.52±1.13ng/ml、1.42±0.31ng/ml)(P<0.05)。EMT组血清Flk-1、COX-2水平随疼痛VAS评分和R-AFS分期的升高而增加(P<0.05)。线性相关性分析显示,血清Flk-1与COX-2水平正相关,且均与VAS评分、R-AFS分期正相关性(r=0.781、0.658,0.792、0.708,P<0.05)。结论:EMT患者血清Flk-1、COX-2异常高表达,且与疾病分期及疼痛程度有关,可为临床病情的评估及治疗提供参考。

桂枝茯苓胶囊治疗子宫内膜异位症及对患者血清Flk-1、COX-2、VEGF、PGE2水平的影响

目的:观察子宫内膜异位症(EMs)患者血清胎肝激酶-1(Flk-1)、环氧化酶-2(COX-2)血管内皮生长因子(VEGF)、前列腺素2(PGE_(2))表达及桂枝茯苓胶囊治疗效果。方法:选取2020年1月-2021年1月本院收治的EMs患者126例为EMs组,随机分为观察组与对照组各63例,均接受常规治疗,观察组加用桂枝茯苓胶囊,疗程3个月。健康体检女性40例为健康组。检测各组血清Flk-1、COX-2、VEGF、PGE_(2)水平,EMs组治疗后复查,评价EMs病灶面积、数字模拟量表(NRS)评分和中文版30项子宫内膜异位症健康量表(EHP-30)评分。结果:EMs组血清Flk-1(29.72±6.14 ng/ml)、COX-2(16.59±3.42 ng/ml)、VEGF(183.02±40.17 pg/ml)、PGE_(2)(589.74±56.33 pg/ml)水平高于健康组(9.02±1.13 ng/ml、5.45±1.38 ng/ml、58.52±14.37 pg/ml、105.63±14.59 pg/ml),且各上述指标r-AFSⅢ+Ⅳ期患者均高于Ⅰ+Ⅱ期患者并与r-AFS分期正相关(均P<0.05)。治疗后观察组病灶面积(5.08±1.33 cm^(2))、NRS(1.69±0.34分)及EHP-30(16.58±1.89分)评分均低于对照组(6.31±1.25 cm^(2)、3.01±0.59分、22.13±2.69分),血清Flk-1、COX-2、VEGF、PGE_(2)水平均低于对照组,总有效率(96.8%)高于对照组(85.7%),观察组Ⅲ+Ⅳ期患者疗效优于对照组Ⅲ+Ⅳ期患者(均P<0.05),不良反应未见明显增加。结论:Ems患者血清Flk-1、COX-2、VEGF、PGE_(2)水平异常高表达,且与临床分期相关;加用桂枝茯苓胶囊治疗可能通过下调Flk-1、COX-2、VEGF、PGE_(2)而发挥作用。

参麦对大鼠急性心肌缺血血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察参麦对大鼠急性心肌缺血血管内皮生长因子表达的影响,探讨其作用机制。方法:大鼠40只,采用结扎左侧冠状动脉前降支30 min后松解扎扣再灌注60 min,反复3次以造成心肌缺血再灌注损伤模型,并随机分为对照组、模型组、美托洛尔组及参麦小大剂量组。五组大鼠均经腹腔注射给药,于治疗前及30 d后分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学检测心肌VEGF和缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)HIF-la表达情况、受体胎肝激酶1(FLK-1),籍此考察参麦对大鼠急性心肌缺血血管内皮生长因子表达的影响。结果:参麦明显增高VEGF蛋白质及mRNA、HIF-1a、FLK-1的表达,缩小心肌缺血面积,与模型组比较(P<0.05),差异均有统计学意义,参麦小、大剂量组间差异无统计学意义。结论:参麦可减轻大鼠急性心肌缺血缺氧性损伤和血管内皮炎症反应程度,其作用机制可能是其促进大鼠缺血心肌血管内皮再生有关,对改善再灌注损伤血管内皮功能紊乱有一定的防治作用。

血管内皮生长因子受体KDR在髓母细胞瘤中的表达及临床意义

目的 探索激酶插入嵌合受体 /胎肝激酶 - 1(kinase insert domain- containing receptor/ fetal liverkinase- 1,KDR/ Flk- 1)在髓母细胞瘤中的表达情况及其与预后的关系。方法 通过免疫组化方法测定 KDR在 5 0例髓母细胞瘤和 10例正常小脑组织中的表达 ,并结合临床资料 ,对病人生存时间与 KDR表达阳性率之间的关系进行分析。结果 1正常小脑组织标本极少表达 KDR,而髓母细胞瘤标本多为不同程度的阳性表达 ,且以高阳性率为主 ,并发现阳性染色主要位于肿瘤细胞浆 ,部分内皮细胞中度或轻微着色。 2生存时间长者 KDR表达阳性率较低 (r=- 0 .5 2 7,P<0 .0 1)。结论 KDR不仅在髓母细胞瘤血管内皮细胞中有表达 ,在肿瘤细胞中也有表达 ;KDR在肿瘤细胞中的阳性表达率与髓母细胞瘤的预后呈负相关。髓母细胞瘤中 KDR的表达水平可以作为判断病人预后的指标之一。

髓母细胞瘤中血管内皮生长因子及其受体的表达和临床意义

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体激酶插入嵌合受体(kinase insert domain-containning receptor,KDR)在髓母细胞瘤中的表达情况及它们与肿瘤微血管密度(microvascular density,MVD)以及患者预后的关系。方法通过免疫组化方法测定VEGF、KDR在45例髓母细胞瘤和10例正常小脑组织中的表达,并结合临床资料,对病人生存时间与VEGF、KDR表达阳性率、肿瘤MVD之间关系进行分析。结果①正常小脑组织标本极少或不表达VEGF、KDR,而髓母细胞瘤标本多为不同程度的阳性表达;②生存时间长者KDR表达阳性率较低(r=-0.444,P<0.01);③VEGF与肿瘤MVD呈正相关(P<0.001),但是VEGF MVI与患者预后并无显著相关性。结论KDR在肿瘤细胞中的阳性表达率与髓母细胞瘤的预后呈负相关。髓母细胞瘤中KDR的表达水平可以作为判断病人预后的指标之一。