血红素加氧酶1在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠肝脏组织和胎鼠脑组织中的表达及其意义

目的:建立肝内妊娠期胆汁淤积症(ICP)大鼠模型,检测血红素加氧酶1(HO-1)在ICP孕鼠肝脏组织及胎鼠脑组织中的表达,探讨ICP的发病机制。方法:40只孕鼠随机分为实验组和对照组,每组20只。从孕15d起,实验组孕鼠每天后肢内侧皮下注射孕酮和雌二醇,对照组孕鼠注射精制植物油。至孕21d断头取血检测生化指标;取出母鼠肝脏及胎鼠脑组织,HE染色观察其病理组织学变化;免疫组织化学和图像分析法检测脑海马CA1区HO-1表达水平。结果:与对照组比较,实验组孕鼠血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氮酸氨基转移酶(ALT)和总胆汁酸(TBA)水平均明显升高(P<0.01)。病理组织学表现,实验组孕鼠部分肝细胞有颗粒变性和空泡变性,肝小叶结构正常;胎鼠脑组织疏松,空泡样变性明显,部分细胞溶解,甚至消失。对照组孕鼠肝脏和胎鼠脑组织无明显病理改变。免疫组织化学及图像分析结果,与对照组比较,实验组胎鼠脑组织HO-1免疫着色强度减弱,HO-1表达水平明显下降(P<0.05)。结论:ICP胎鼠脑组织中HO-1表达下降,可能与ICP胎儿窘迫的不良结局有关。

肝内胆汁淤积症胎鼠脑组织中NPY的表达定位及意义

目的观察妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)孕鼠肝脏、胎鼠脑组织结构变化;分析神经肽Y(NPY)在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)胎鼠脑组织中的表达及意义。方法选择孕15 d SD大鼠,用孕酮及乙炔雌二醇建立孕鼠ICP模型,观察孕鼠肝脏和胎鼠脑组织的病理变化;应用免疫组织化学染色方法及图像分析检测ICP孕鼠(20例,实验组)及正常孕鼠(20例,对照组)脑组织中NPY的表达及定量。结果 ICP孕鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆酸(TBA)明显升高;光镜下见部分肝细胞有颗粒样变性和空泡变性。电镜下见肝组织中毛细胆管扩张、微绒毛肿胀,毛细胆管周围肝细胞内见电子致密物沉积。胎鼠脑组织疏松,空泡样变性明显,部分细胞溶解,甚至消失。实验组胎鼠脑组织NPY表达免疫阳性神经元主要位于海马区,免疫阳性细胞被染成棕黄色,免疫阳性颗粒主要分布在胞质和细胞膜表面。对照组海马区仅少部分细胞膜着色或无免疫着色。胎脑组织NPY的免疫组化结果用图像分析仪测定,结果显示:实验组NPY平均光密度值(1.0486±0.0182)明显高于对照组的(0.6297±0.0278),两者比较有显著性差异(P<0.05)。结论 ICP母鼠肝脏及胎鼠脑组织有明显病变,胎鼠脑组织中的NPY表达升高,可能与胎脑组织受损有关。

先天性弓形虫感染胎鼠脑组织蛋白差异分析

目的检测先天性弓形虫感染胎鼠脑组织差异蛋白并分析其功能,为先天性弓形虫病的发生机制研究提供理论基础。方法选取9~10周龄BALB/c孕鼠20只,随机分为正常对照组和感染组,每组10只。于妊娠第10d,感染组每只小鼠腹腔注射经胰酶消化的弓形虫速殖子40个/0.2ml;正常对照组腹腔注射无菌PBS溶液0.2ml/只(0.01mol/L,pH 7.3)。于妊娠第20d处死孕鼠,取胎鼠脑组织,采用Bradford法测定蛋白含量;采用双向凝胶电泳分离胎鼠脑组织蛋白,运用ImageMaster 2D软件分析差异蛋白,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析差异蛋白点的肽指纹谱(PMF),运用Mascot软件在SWISS-PROT数据库中对差异蛋白进行比较与评判,运用David软件对差异蛋白进行生物信息学分析。结果两组胎鼠脑组织均分离出约500个蛋白点,经蛋白质胶图分析鉴定出显著差异蛋白点15个,分子质量单位(Mr)多分布于(8~48)×103之间,等电点(pI)在3~10之间。在弓形虫感染胎鼠脑组织低表达的15个差异蛋白点经过鉴定和功能分析,主要是以下6种:结蛋白,肌动蛋白,血清白蛋白,葡萄糖调节蛋白,蛋白质二硫键异构酶和膜联蛋白。结论弓形虫感染胎鼠脑组织中有6种差异蛋白低表达,弓形虫可能通过降低这些蛋白的表达量来影响胎鼠脑组织的正常结构、物质转运和调节功能等,从而引发先天性弓形虫脑病。

CO_2气腹对胎鼠脑超微结构和Caspase-3表达的影响

目的探讨CO2气腹对胎鼠脑组织结构及脑组织Caspase-3表达的影响。方法选择不同CO2气腹压力,建立孕鼠的CO2气腹模型,于鼠孕17 d的24 h内取胎鼠脑组织分别进行HE染色、免疫组化、电镜制片,观察胎鼠脑组织结构变化和胎鼠脑组织Caspase-3表达。结果透射电镜观察显示随气腹压力的增加,胎鼠脑组织可见细胞轻微可逆性损害。Caspase-3在实验组与对照组间胎鼠脑组织表达无明显变化(P>0.05),同时组间Caspase-3的表达也无显著性差异(P>0.05)。结论 CO2气腹压力升高对胎鼠大脑细胞产生可逆性轻度损伤。

甲基叔丁基醚对胎鼠脑亚细胞结构及ATP酶影响

目的探讨妊娠期接触甲基叔丁基醚(MTBE)对胎鼠脑组织亚细胞结构和磷酸腺苷(ATP)酶活性的影响。方法对40只健康成年昆明种小鼠于整个妊娠期间用MTBE,25,100,400,800mg/(kg·bw)进行灌胃染毒,每天1次,给予食用油作为对照组。测定胎鼠脑组织中ATP酶活性,透射电镜下观察其亚细胞结构。结果孕鼠MT-BE染毒剂量为25,100mg/(kg·bw)时,胎鼠脑组织中各种ATPase活性较对照组均轻微增强(P>0.05);孕鼠400mg/(kg·bw)染毒时,胎鼠脑组织中Na+,K+-ATPase、Ca2+-ATPase、Mg2+-ATPase活性分别为(5.28±0.24),(5.92±0.50),(2.39±0.21)μmol/(mg·prot),与对照组比较明显降低(P<0.05);透射电镜下可见胎鼠脑组织神经细胞和神经胶质细胞肿胀、变性,胞浆内线粒体和部分细胞膜受损。结论妊娠期母鼠接触MTBE可导致胎鼠脑组织亚细胞结构改变和ATP酶活性降低。

Functional expression of opioid receptor-like receptorand its endogenous specific agonist nociceptin/orphanin FQ during mouse embryogenesis

Expression of opioid receptor-like receptor (ORL1)and its endogenous peptide agonist nociceptin/orphaninFo (N/OFQ) during mouse embryogenesis have been investigated. Transcripts of ORL1 and N/OFQ were detected by RT-PCR in mouse brain of day 8 embryo (E8)and the expression continued afterwards. Northern blotanalysis revealed abundant expression of ORL1 at postnatal day 1 (P1) and N/OFQ at E17 and P1 in the brain butnone was detected in other embryonic tissues. The presence of functional ORL1 in mouse embryonic brain wasalso confirmed by specific binding of [3H] N/OFQ (kd=1.3±0.5 nM and Bmax = 72±9 fmol/mg protein) as wellas by N/OFQ-stimulated G protein activation.