TCDD致胎鼠腭裂模型中miR-381-3p下调抑制腭间充质细胞成骨分化的实验研究

目的探讨2, 3, 7, 8-四氯二苯二英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)致胎鼠腭裂模型中miR-381-3p下调与胎鼠腭间充质(mouse embryonic palatal mesenchymal,MEPM)细胞成骨分化抑制的相关性。方法 32只6~8周龄SPF级建康C57BL/6J孕鼠随机分为TCDD组与对照组,每组16只。于胚胎日第10.5天(embryonic day 10.5,E10.5)时,TCDD组一次性灌胃TCDD(28μg/kg)、对照组给予等量玉米油。于E13.5和E14.5取出两组胎鼠大体观察腭突组织后,取E13.5和E14.5腭突组织行实时荧光定量PCR检测miR-381-3p表达;E14.5腭突组织Western blot检测成骨特异性转录因子RUNX2和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达。取对照组E14.5胎鼠腭突分离培养MEPM细胞,取第3代细胞以含10 nmol/L TCDD的完全培养基培养,于0、0.5、1、2、3 d检测miR-381-3p表达,0、1、2、3 d检测RUNX2和OPN蛋白表达。另取第3代MEPM细胞随机分为4组,沉默表达组及对照组分别转染miR-381-3p抑制物及抑制物对照,过表达组及对照组分别转染miR-381-3p模拟物及模拟物对照。转染48 h后,检测各组miR-381-3p及RUNX2和OPN蛋白表达。结果 E13.5和E14.5时对照组获得活胎鼠96只、TCDD组92只;其中,E14.5对照组活胎鼠可见双侧腭突接触,TCDD组双侧腭突中间有间隙。TCDD组胎鼠腭突组织miR-381-3p以及RUNX2、OPN蛋白相对表达量均明显低于对照组(P<0.05)。TCDD处理MEPM细胞0.5和1 d后miR-381-3p相对表达量较0 d时明显下降(P<0.05),2、3 d时表达量明显上升,与0 d时比较差异无统计学意义(P>0.05);1、2、3 d时RUNX2及OPN蛋白相对表达量均较0 d时显著降低(P<0.05)。MEPM细胞转染48 h后,沉默表达组miR-381-3p及RUNX2、OPN蛋白相对表达量均较其对照组下降,过表达组均较其对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在TCDD致胎鼠腭裂模型中,miR-381-3p表达下调可能抑制胎鼠MEPM细胞成骨分化。