幼胚发育阶段对次郎柿胚抢救效果的影响

迄今对柿幼胚培养的最佳时期尚不完全明确。以完全甜柿品种次郎(Diospyros kaki Thunb.cv.Jirou)为试材,探讨了幼胚发育阶段对胚抢救效果的影响。结果表明,(1)授粉后40d幼胚处于球形胚期,50d处于心形或鱼雷形期,60d之后处于子叶形胚期;(2)接种授粉后40d幼胚的萌发率(29.3%)显著低于其它时期,其后不同取胚时期的萌发率均为100%,差异不显著;(3)接种授粉后60d幼胚的成苗率(92%)显著高于其它时期,再生植株苗高和生根数与其它时期无明显差异。因此,心形期至子叶期阶段是完全甜柿品种次郎幼胚的最佳培养时期,萌发率和成苗率分别为100%和86%～92%。该时期较前人报道的柿幼胚培养时期提早10￣20d。

方竹种胚愈伤组织诱导及遗传转化

为建立高效的方竹组织培养与遗传转化体系,以方竹种胚为外植体,诱导体细胞胚的发生,研究种胚发育阶段、基本培养基、植物生长调节剂种类及浓度等因素对愈伤组织诱导的影响;选择方竹种胚为受体材料,采用农杆菌介导法,将带有GUS基因的表达载体导入方竹,探讨抗生素浓度、侵染时间和菌液浓度对遗传转化的影响。结果表明:适宜愈伤组织诱导的种胚发育阶段为中Ⅱ期,在添加3.0 mg·L^(-1)2,4-D、1.0 mg·L^(-1)ABA的MS培养基中,愈伤组织诱导率达到87.78%;农杆菌菌液OD600为0.8,超声抽真空侵染20min,GUS基因瞬时表达效率达到86.67%。在添加25 mg·L^(-1)的潮霉素筛选培养基中培养4周后,经PCR检测证明GUS基因已成功转入方竹愈伤组织中,稳定转化效率为25%。本研究结果有助于方竹组培快速繁殖,为利用基因工程技术改良方竹品种提供技术支撑。