红豆草胚性细胞系和非胚性细胞系DNA代谢动态的研究

近年来国内外已对多种植物离体培养中体细胞胚的发生及其影响发生和发育的各种因素进行了大量的研究,显然,在植物离体培养中体细胞胚的形成是具有普遍意义的。但对体细胞胚的起动、发生的分子机理和生理生化基础等问题还有待于深入的探讨。本实验以红豆草为材料,建立了“胚性细胞系”,这种细胞系可形成大量体细胞胚,并以很高频率形成再生植株,这一过程称为“胚发生培养”。同时建立了“非胚性细胞系”。

农杆菌介导霞多丽葡萄胚性细胞系遗传转化条件的优化

为建立葡萄(Vitis vinifera)遗传转化技术体系,以霞多丽葡萄(Chardonnay)胚性细胞系为靶组织,采用GUS检测法,对影响农杆菌介导葡萄遗传转化效率的主要因素进行了研究。结果表明,超声波处理时间长短对转化效率有较大影响,在所试的0.5、1、5、10 min 4种不同时间的超声波处理中,以5 min时转化效率较好,平均达到9.11个蓝色斑点;AS浓度对转化效率有明显差异,当浓度为50μmol/L时,平均蓝色斑点数为8.89个,100μmol/L时,达到12.44个;DTT质量浓度对转化效率也有较大影响,在所试的3种质量浓度(1,2,3 mg/L)中,以3 mg/L为最佳,有16.67个蓝色斑点。通过GUS瞬时表达检测,确立了农杆菌介导葡萄胚性细胞系遗传转化的几个最适影响因素,从而为葡萄遗传转化技术体系的建立奠定了基础。

提高玉米胚性细胞系诱导再生植株的研究

本实验以玉米G3 5× 3 1、Tf幼胚培养的胚性细胞系为材料 ,用 8114、MS和MN6、MB四种培养基诱导胚性细胞系再生绿苗 ,结果以MB培养基诱导率最高 ,为 93 3 % ;在以不同激素配比的培养基进行愈伤组织的生根培养 ,KT1 0mg/L(单位下同 )+6BA0 5 +NAA0 5 +IBA2的激素组合诱导生根效果最好 ,而其他三种激素组合未出现分化生根现象。

龙眼胚性细胞系的建立与保持

本研究比较了生长调节剂、ＡｇＮＯ３、活性炭、碳源、基本培养基、光照度、胚发育时期以及基因型等对龙眼幼胚培养诱导愈伤组织的影响．从幼胚培养中，诱导出多种类型的愈伤组织，经继代培养并筛选，获得松散、生长旺盛、胚胎发生能力极强的松散型胚性愈伤组织．该类型胚性愈伤组织适宜建立悬浮细胞系和分离原生质体，并且转移至含体积分数为０．０５椰子汁的ＭＳ固体培养基上，形成大量的胚状体．采用在附加１ｍｇＬ－１２，４－Ｄ的ＭＳ培养基与附加１ｍｇＬ－１２，４－Ｄ、０．５ｍｇＬ－１ＫＴ和５ｍｇＬ－１ＡｇＮＯ３的ＭＳ培养基交替继代培养。

柑桔胚性细胞系的建立

将乙烯作用的专化抑制剂——硝酸银应用于柑桔胚珠培养中,通过交替继代处理和不断选择,成功地建立起能供给原生质体分离并具有良好再生能力的胚性愈伤组织.

红豆草胚性细胞系和非胚性细胞系DNA代谢动态的研究

以红豆草无菌苗胚轴为外植体诱导愈伤组织,在此基础上建立了“胚性细胞系”和“非胚性细胞系”。应用放射自显影方法研究了这两种细胞系的DNA合成动态,結果表明:前者DNA合成十分活跃,且DNA合成只限于发生胚的单细胞和细胞群。这些细胞迅速分裂,分别发育形成不同阶段的体细胞胚,在这一过程中,DNA代谢呈现有规律的变化,到球形胚时,DNA合成速率达到最高峰。体细胞胚中各细胞DNA合成速率的差异与体细胞胚形态学极性存在明显的相关性。至于“非胚性细胞系”,在启动分裂和形成愈伤组织过程中也是以细胞DNA复制为基础的,但在该类细胞系中,无论是DNA合成速率还是~3H-胸苷标记的细胞频率都远低于胚性细胞系。DNA代谢动态在这两类细胞系中存在着明显的差异。

继代十七年的玉米花粉胚性细胞系的异常核和异常分裂观察

对继代17年的玉米花粉胚性细胞系核形态和细胞分裂情况进行了观察分析,结果表明:随着继代培养时间的延长,异形核细胞比率增加,异形核类型和异常分裂增多。分析认为异形核和异常分裂现象出现和增多是导致胚性细胞系分化率降低、异形分化和非整倍体细胞产生的主要原因。并提出来自玉米农家种“八趟白”的部分胚性细胞系能长期保持倍性稳定和胚胎发生并再生,与不断挑选和继代培养中不加2,4-D有关。

低温贮存愈伤组织保持烟草和胡萝卜的胚性细胞系

耐寒植物胡萝卜及不耐寒植物胶烟草的愈伤组织皆可在5～8C低温下贮存6～12个月,转至标准条件下培养时,其增殖能力恢复,体细胞胚胎发生能力仍然保持,并能再生成植株。两者的游离氨基酸组成与各自具有分化能力的无性系相似,谷氨酸、丙氨酸和精氨酸的含量较高。显示低温贮存是减少愈伤组织的继代,保持胚性细胞系的有效方法。

甜菜基因型的筛选及胚性细胞系建立的研究

通过以甜菜未成熟胚为外植体诱导愈伤组织，再将产生的愈伤组织转移至分化培养基（ＭＳＢ培养基附加１．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ、３％蔗糖、８％琼脂）进行分化力测试实脸，筛选出两个再生能力强的基因型─８９３０、ＧＤ＿２．通过挑选淡黄色或灰白色、呈颗粒状的愈伤组织继代培养，经调节培养基的ＩＡＡ和ＮＡＡ的浓度，得到再生能力强的胚性愈伤组织，建立了胚性细胞无性系。

谷子胚性细胞系的超低温冰冻保存

超低温冰冻保存是保存生物材料的一种方法。目前禾本科植物原生质体培养的主要问题之一是胚性细胞系的状态不稳定。试验比较了影响谷子(Setaria italica(L.)Beauv)胚性细胞系超低温冰冻保存的因素如:不同的冰冻保护液组成,不同培养时间的胚性细胞系以及细胞系的恢复生长和原生质体培养。结果表明:本实验采用超低温冰冻保存方法不会影响胚性细胞系原生质体的培养特性,能够保持或提高原生质体培养的植板率。

挪威云杉及杂种落叶松稳定胚性细胞系及体胚再生系统的建立(英文)

本文报道了挪威云杉 (Piceaabies)和杂种落叶松 (Larixdeciduas×L .kaempferi)人工授粉种子诱导胚性细胞系及植株的再生。挪威云杉在德国SaxonOre山区被选为对空气污染有抗性的树种并种植在位于Waldsieversdorf的林木遗传育种研究所的种植园中。对挪威云杉测试了几个不同亲本组合的种子形成胚性细胞系的能力。这些云杉种子于 1992 0 1采收 ,含有干燥的成熟合子胚。作为对照 ,相同的亲本组合云杉种子于1993 0 8和 1998 0 8采收 ,合子胚处于成熟中。杂种落叶松则只有一个人工授粉组合 ,大田试验证实幼苗生长良好。分别于 1995和 1996年采收含有未成熟合子胚的未成熟种子。诱导愈伤形成用附加细胞分裂素 (激动素和 或BAP)和生长素 (NAA ,2 ,4 D)及有机氮源 (水解酪蛋白和谷氨酰胺 )的标准培养基 (SPE和MSG) ,于黑暗下培养。尽管在建立培养体系后 5～ 12周产生了大量胚性愈伤组织 ,诱导率超过 2 5 % ,但 1a后只有超过1%的胚性愈伤组织稳定生长。挪威云杉稳定胚性细胞系的数量与成熟合子胚的采收季节及建立细胞系的时间 (8月或 1月 )无关 ,但在 8月收获的合子胚在挪威云杉 5～ 12周后胚性愈伤组织诱导率要高些 ,然而能在悬浮培养中生长及随后成熟体胚能顺利再生植株的稳定胚性细胞系的数量有限。

用显微光度图像分析系统研究谷子胚性细胞系的GDH细胞类型分布

由显微光度图像分析与细胞化学技术对不同实验材料和不同培养时期谷子胚性细胞系的谷氨酸脱氢酶（ＧＤＨ）细胞类型分布表明：从单细胞群体水平（细胞类型分布）研究胚性细胞系可以比较准确地了解其所处的生理状态；胚性细胞系的细胞类型分布可以作为其是否适于原生质体培养的指标之一；细胞类型分布也适用于组织培养和原生质体培养一些问题的研究。

蔗糖与肌醇对马尾松胚性细胞系增殖的影响

针对马尾松胚性细胞系增殖困难的问题,本研究设定了2因素3水平的处理,分析了增殖培养基中蔗糖与肌醇对马尾松胚性细胞系增殖的影响。研究结果表明,胚性培养物的增殖倍数在9个处理间存在极显著性差异(P<0.01),并初步选出马尾松胚性细胞系增殖倍数较高的3个培养基:5号(蔗糖20 g·L-1+肌醇1.0 g·L-1)、7号(蔗糖30 g·L-1+肌醇0.1 g·L-1)和8号(蔗糖30 g·L-1+肌醇1.0 g·L-1)。胚性细胞在以上3个培养基具有不同分化发育反应,其中培养基5号中,培养基胚性细胞发育较慢;培养基7号中,胚性细胞发育较快且能形成具有完整结构的正常早期体细胞胚;在培养基8号中,胚性细胞易分化形成结构不完整、形态不正常的早期体细胞胚。综合考虑胚性细胞系增殖倍数与胚性细胞分化发育两方面的因素,在增殖培养基中添加蔗糖30 g·L-1和肌醇0.1 g·L-1的组合更适合马尾松胚性细胞系的增殖。

水稻胚性悬浮细胞系建立过程中的生理生化变化

本文详细分析了水稻广亲和中粳品系02428胚性悬浮细胞系建立过程中的培养液渗透值、pH值,呼吸作用,过氧化物酶同工酶,碳、氢及矿质元素的变化。结果如下:1、前期、中期和后期悬浮细胞系（即胚性悬浮细胞系）的培养液渗透值在一次继代培养的0—3天期间剧升,并继续上升至第5天达峰值,尔后有所回降;培养液pH值的变化正好相反。2、中期和后期悬浮细胞比前期悬浮细胞更多地利用氨基酸作为代谢底物。后期悬浮细胞的EMP途径相对稍低,而HMP、TCAC途径较前期、中期稍强。3、从前期→中期→后期,过氧化物酶同工酶阴极区带显著变窄、减弱。后期的阳极区过氧化物酶同工酶也较前期为弱。4、后期悬浮细胞和前、中期悬浮细胞相比较,氮、镁的含量较高,而钙、铁的含量较低。上述生理生化变化与悬浮细胞能否适合于进行原生质体培养有一定的相关性。

水稻、玉米胚性悬浮细胞系的有效建立

研究了水稻、玉米胚性悬浮细胞系有效建立的几个关键性技术问题。指出外植体是影响初代愈伤组织状态的因素之一，提出了愈伤组织继代改造的一些措施、影响胚性悬浮细胞系建立的几个因素和判别某材料能否建成胚性悬浮细胞系的参考标准。

大麦花药培养及其胚性悬浮细胞系的高频快速建立

研究了 (1)在低温预处理过程中 ,不同相对湿度对大麦花药出愈率的影响 ;(2 )低温处理愈伤组织对植株分化的影响 ;(3)高频快速建立大麦胚性悬浮细胞系 .结果表明 ,低温预处理的较大相对湿度能明显促进花药的出愈率 ;低温处理愈伤组织能提高绿苗率 ;以 7周龄的花药胚性愈伤组织为起始材料高频快速建立了均质、分散性好的胚性悬浮细胞系 ,建立频率约为 2 5 %～ 5 0 % ;已 8～ 9周龄的花药胚性愈伤组织作为起始材料 。

黑麦胚性悬浮细胞系的建立和植株再生

禾谷类作物胚性细胞悬浮系的相继建立,为获取大量原生质体、进行体细胞杂交和将外源DNA直接导入可再生细胞（贾敬芬,1990）奠定了坚实基础。黑麦是重要的禾谷类作物之一,具有耐酸、耐瘠、耐旱、耐寒等许多优良特性（李杨汉,1979）。为利用细胞工程技术对黑麦进行改良和将其优良性状转移到其它禾谷类作物中,建立可高频再生的黑麦胚性细胞悬浮系十分必要。本文报道了黑麦胚性悬浮细胞系建立和植株再生的实验结果。

郑麦9023胚性悬浮细胞系的建立和植株再生

为建立高效稳定的小麦遗传转化体系,以小麦郑麦9023的幼胚为外植体诱导愈伤组织,研究了培养基中不同质量浓度2,4-D、KT对愈伤组织诱导和愈伤组织继代培养的影响,进而完成整个植株再生的进程。结果表明:以小麦郑麦9023的幼胚作为外植体来诱导愈伤组织,诱导效果最好的培养基是含有3.0 mg/L 2,4-D的MS培养基,出愈率最高达92.5%;愈伤组织进行继代培养的最佳培养基是含有1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L KT的MS培养基;最佳的悬浮培养基是含有1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L KT的MS培养基;最佳的悬浮系继代时间为16 d;悬浮系中的成熟胚在基本培养基上可以发育成正常的植株。所建立的悬浮系可以用来进行小麦基因工程遗传改良和体细胞无性系突变体的筛选。

通过花药直接液体培养建立大麦胚性悬浮细胞系

通过花药直接液体培养建立大麦胚性悬浮细胞系郑泳，王君晖，黄纯农（杭州大学生命科学学院杭州３１００２８）体细胞胚胎发生是禾本科作物离体培养的组织和细胞进行植株再生的主要方式，胚性悬浮细胞系由于其细胞大小和生理状态比较一致，因而成为研究禾本科植物细胞分化...

香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中非胚性成分的去除

[目的]研究香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中非胚性成分的去除方法.[方法]以巴西蕉的花蕾进行诱导培养后,运用孔径在250～ 500 μm的不锈铜筛网进行过滤,并用倒置显微镜对培养物进行实时观测.[结果]运用孔径在250～500 μm的不锈钢筛网能够有效去除悬浮细胞系中的褐化坏死组织和分生组织小球,但如果在悬浮细胞系诱导后3d立即进行去除,则易使之后胚性细胞的增殖变得困难;如果在悬浮细胞系诱导后14 d左右去除,则褐化坏死组织释放的酚类物质很容易损伤并杀死正在增殖的胚性细胞.悬浮细胞系诱发后7d是一个比较恰当的过滤去除时间点.[结论]在培养的过程中,将悬浮细胞系定期放置在倒置显微镜下进行观察,用移液器能将液泡化的细胞和胚去除.在操作前,需将倒置显微镜放置在超净工作台内,用紫外线长时间照射进行表面灭菌.这样即可以将悬浮细胞系中的非胚性成分过滤去除,又能预防感染.