火炬松体胚发生与几种专利培养基的应用

以火炬松优良家系20-692、20-615、20-1036、20-639不同球果采收期的含未成熟合子胚的雌配子体为外植体,利用4种针叶树体胚发生专利培养基AL、TX、LP、DS,分别与AL、TX、LP培养基激素组合及无激素组合形成16种诱导培养基,开展不同家系、基本培养基、球果采收期对火炬松体细胞胚胎发生率影响的研究。结果表明:合子胚发育的第2、3、4阶段为最理想外植体,不同家系、基本培养基、激素组合对ESM诱导率及外植体褐化率均存在显著影响,16种组合的培养基中,在LP-LP、LP-TX、AL-TX培养基上可获得较高的体胚诱导率,分别为18%、16%、11%。

湿地松体胚增殖与成熟培养研究

以湿地松未成熟合子胚为试验材料,诱导获得胚性胚柄细胞团(Embryogenic Suspensor Mass-ESM),通过培养基的优化,开展湿地松ESM维持与增殖及体胚成熟培养的研究。研究结果表明:基本培养基与植物生长调节剂组合影响ESM的增殖速率及质量,DCR+NAA1.0mg·L-1+6-BA0.32mg·L-1+KT0.30mg·L-1为湿地松ESM的最佳增殖培养基;在无植物生长调节剂培养基上的预培养是湿地松体胚发育、成熟的必要程序,ABA、PEG、AC和高浓度蔗糖的组合进一步促进了体胚的发育成熟,体胚在培养基LP+ABA50mg·L-1+PEG600020%+6%蔗糖+AC2.5g·L-1上获得了近子叶期体胚,但未能获得完全成熟的体胚。

长叶松优良家系的体胚发生研究

以长叶松优良家系20-820、20-803、20-822、20-805、20-825不同采收期的大配子体为外植体,选用针叶树体细胞胚胎发生专利培养基AL、TX、LP、DS分别与AL、TX、LP培养基激素组合及无激素组合形成16种体胚诱导培养基,开展家系、专利基本培养基、球果采收期对长叶松体细胞胚胎发生率影响的研究。结果表明:诱导体胚最理想的球果采收期为7月16日和24日,即合子胚发育第1、2阶段,参试的5个家系间的胚性胚柄细胞团(ESM)诱导率不存在显著差异,基本培养基、激素组合2因素对ESM诱导率有极显著影响,LP基本培养基与TX激素组合最适宜诱导长叶松体胚,其体胚诱导率为28%。

抗性赤松体胚发生细胞结构观察与增殖条件的优化

为了更有针对性地优化原生抗性赤松体胚发生培养体系,本研究通过体式镜定性观察种室中的合子胚分布、胚性胚柄细胞结构变化,通过Image-Pro Plus软件定量分析胚性细胞团在不同生长调节物质配方下胚头胚柄的比例变化,了解体胚发生的营养需求。结果发现,抗性赤松裂生多胚更易形成胚性细胞团;改变原有培养条件细胞团会出现胚头胚柄分离、胚头细胞颜色加深的反应;使用低浓度的混合生长调节物质配比(0.1 mg·L^(-1)2,4-D+1 mg·L^(-1) NAA+0.5 mg·L^(-1) 6-BA)能够提高体胚增殖速度;表明抗性赤松胚性细胞团增殖速度加快的内在机理为增加胚性细胞团中胚头与胚柄的比例。