木本植物胚未成熟或极细小型种子的发芽促进法

以五加科等６科３０种的预处理方法为例．阐述了木本植物胚未成熟或极细小型种子的发芽促进法。

刺槐未成熟合子胚的体细胞胚胎发生和植株再生

以刺槐不同胚龄的未成熟合子胚为外植体,采用混合正交试验设计,研究幼胚胚龄和不同外源激素种类及质量浓度对刺槐胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚分化、萌发的影响。结果表明:开花后8周(55天左右)是胚性愈伤组织和体胚诱导的最佳外植体取材时期;MS+2,4-D5.0mg·L-1+BA0.5mg·L-1是诱导胚性愈伤组织的最佳培养基,出愈率最高为95.42%±0.02%;MS+NAA0.5mg·L-1+BA0.5mg·L-1+谷氨酰胺250mg·L-1+水解酪蛋白500mg·L-1是体细胞胚诱导和分化的最佳培养基,直接体细胞胚发生率最高为92.40%±0.12%,通过愈伤组织诱导体细胞胚发生的频率最高为90.73%±0.49%。一旦形成球形胚,将培养物转接到不含任何生长调节剂的MS培养基上,体细胞胚经成熟萌发可进一步形成完整小植株。

玉米未成熟胚胚性愈伤组织诱导率与内源激素含量的关系

以胚性愈伤组织诱导率高低不同的9个玉米自交系未成熟胚为外植体,用改良N6培养基诱导培养愈伤组织。酶联免疫法测定不同培养时间后未成熟胚,以及由此诱导的胚性和非胚性愈伤组织,内源脱落酸(ABA)、吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA3、GA4)和细胞分裂素(DHZRI、PA、ZR)含量。结果发现,胚性愈伤组织诱导率与未成熟胚ABA和IAA含量正相关,与胚性和非胚性愈伤组织ABA含量正相关,与胚性愈伤组织GA3含量负相关。在胚性愈伤组织开始发生之际,外植体的ABA和IAA含量出现峰值,GA3含量出现低谷。因此认为,未成熟胚高水平的ABAI、AA含量和低水平的GA3含量,有利于胚性愈伤组织的诱导。但是胚性愈伤组织的ABA含量却低于非胚性愈伤组织,且胚性愈伤组织诱导率与胚性愈伤组织IAA含量负相关。由此看来,胚性愈伤组织的诱导和保持,可能还与各种激素的协同作用有关。

茶树未成熟胚组培育苗技术的研究

本文研究了茶树未成熟胚离体培养成苗的培养基、培养条件和试管苗的移植技术要点。从供诱导的8个品种中,成功地培养出近千株试管苗,其中盆栽茶苗500余株,露地栽植的404丛,首批茶树生长高度已达80厘米左右。培养物最多的继代培养已达20次。再生和完整植株在遗传特性上是稳定的。这一技术的研究成功,将对茶树种质资源的保存,提高茶籽,尤其是有性杂交或远缘杂交种子、诱变种子的能育率及诱获一籽多苗具有实际应用价值。

多效唑对水稻未成熟胚愈伤组织诱导、分化和壮苗培养的影响

多效唑(Mult-Effect Triazole,MET)是一种良好的植物生长延缓剂,具有多方面的生理效应。已在水稻、小麦、油菜等作物中应用。本文报道了多效唑对水稻未成熟胚愈伤组织诱导、分化以及对壮苗培养的影响,为植物试管苗的正常化生产提供了有效的化学调控措施。1.材料早粳“T53”未成熟胚,愈伤组织,再生绿芽;早籼87-5-0,“湘竹443”再生绿芽。多效唑由本所生理系提供。

月季未成熟胚再生植株的研究

为了建立月季遗传转化的再生体系,该试验以‘漂多斯’、‘蓝丝带’、‘索奴拉’3个月季品种的未成熟胚为外植体,获得了月季再生植株.结果表明,在MS+ZT 0.5 mg/L、MS+ZT 4.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L、MS+ZT 0.5 mg/L+NAA0.5 mg/L培养基上,‘漂多斯’、‘蓝丝带’、‘索奴拉’能够诱导出再生芽,再生率分别为33.3%、33.3%、16.7%;再生芽在不含植物生长调节剂的MS基本培养基上伸长、展叶,在MS+IBA 0.5 mg/L的培养基上能得到生根的再生植株.随着月季未成熟胚贮藏时间的延长,不仅污染率增加,而且胚成熟后多发育成胚芽;贮藏时间不宜超过90 d.这种以未成熟胚为外植体获得再生植株的途径,可为遗传转化提供有效的受体系统.

普通小麦与鸭茅状摩擦禾的远缘杂交──Ⅱ．未成熟胚的培养

培养了由２６个小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ，２ｎ＝６ｘ＝４２）品种（系）用鸭茅状摩擦禾（Ｔｒｉｐｓａｃｕｍｄａｃｔｙｌｏｉｄｅｓ，２ｎ＝４ｘ＝７２）的花粉授粉１４天后获得的６４５个未成熟的胚。结果表明，未成熟胚培养的植株再生频率与胚来源的小麦基因型的杂交亲和性无关。胚的发育程度直接影响胚培养的结果。离体时分化完全的未成熟胚在无激素的培养基上可以迅速萌发成苗，而分化未完全的小胚在无激素的培养基上分化进程不能继续，而且在无激素补充的情况下，萌发过程一旦起动，即使将这些胚转至补加了激素的胚分化培养基上，分化过程也不能再补救。讨论了提高未成熟胚培养成苗率的关键和措施。

白檀未成熟胚的器官发生和植株再生（英文）

以白檀未成熟胚为试材,以改良MS为培养基,研究了白檀未成熟胚的器官发生和植株再生。结果表明:改良MS(mMS)能够很好的诱导愈伤组织,在添加了0.2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA的培养基中,诱导率高达92.5%;胚性愈伤组织分化最佳培养基为mMS+0.25mg/L 6-BA+0.15mg/L NAA,分化率为72.4%;分化出的胚性愈伤组织在空白mMS培养基上继代培养15d,76.6%的组织分化出芽,再转入1/2mMS+1.5%蔗糖培养基上培养20d,芽长至1.5cm。

黑麦冬牧70幼穗和未成熟胚愈伤组织诱导及植株再生

将黑麦冬牧70幼穗切段和未成熟胚接种在附加不同激素浓度的改良MS培养基上培养,获得了能多次继代培养的愈伤组织,后者在分化培养基上再生植株。2,4 D和6 BA浓度明显影响愈伤组织质量和诱导率,幼嫩幼穗和较小的未成熟胚愈伤组织诱导率高。幼穗切段在改良MS+1.0mg/L2,4 D+200mg/L谷氨酰胺的培养基上愈伤组织诱导率最高,质量较好;未成熟胚在改良MS+2.0mg/L2,4 D+0.1mg/L6 BA+200mg/L谷氨酰胺的培养基上愈伤组织诱导率最高,质量最好。继代培养后的愈伤组织转移到附加200mg/L谷氨酰胺、1.0mg/L2,4 D和0.1mg/LTDZ的培养基上可分化出大量小芽。该体系可用于黑麦冬牧70遗传转化和细胞工程育种研究。

大果榉未成熟胚愈伤组织的诱导和植株再生

将大果榉的未成熟胚培养在不同植物激素种类和浓度的术本植物培养基(WPM)上产生愈伤组织,然后将愈伤组织接种在芽的诱导培养基上形成不定芽,不定芽在生根培养基上生根形成完整植株．结果表明:大果榉愈伤组织诱导的适合培养基为WPM附加BA 1．0 mg·L-1+NAA 1．0 mg·L-1,诱导事为59．1％;不定芽的分化培养基为在WPM+NAA 0．5 mg·L-1+6．BA 2．0 mg·L-1,不定芽的诱导率为71．1％,在WPM+BA2．5 mg·L-1+NAA1．0 mg·L-1的培养基种芽分化的平均数未为5．21±1．02;生根培养基以WPM+0．1 mg·L-1 IBA的效果量好,生根率可达63．33％,平均最多生根条数为．再生植株在温室适应培养的存活率为92％．

超声波辅助农杆菌介导转化大豆未成熟胚的研究

[目的]进一步提高栽培大豆的遗传转化效率。[方法]以吉林省大豆主栽品种吉育67、吉育89未成熟子叶为外植体,对超声辅助农杆菌介导大豆遗传转化过程中处理液浓度、超声强度和时间等参数进行了优化。[结果]在农杆菌菌液浓度OD600为0.4,超声功率中,转化率约为4.35%。[结论]为进一步开展以大豆未成熟子叶为外植体的高效遗传转化及相关应用研究提供了参考。

香樟未成熟合子胚体胚发生及植株再生研究

以香樟的未成熟幼胚为外植体进行诱导体胚发生影响因素的研究。成功地从香樟幼胚中诱导出胚状体并获得再生植株,MS为基本培养基,蔗糖是最佳的碳源。经2年对初生胚的继代培养,获得胚性愈伤组织;胚性愈伤组织经体胚诱导、体胚成熟、体胚萌发3个过程的诱导后能够获得再生植株。

温度和水分对不同基因型小麦未成熟胚体细胞胚胎发生以及分化能力的影响

对小麦未成熟胚盾片组织离体再生途径中 ,未成熟胚发育时期以及不同小麦品种的体细胞胚发生能力和体细胞胚的分化能力进行了研究。在所试的 1 4个小麦品种中 ,筛选出具有很强的体细胞胚发生能力和体细胞胚分化能力的 4个品种 :西农 1 376、盐 2号、85+1 - 3和宝丰 72 2 8。为进一步给小麦离体遗传操作打下基础 ,研究还对温度的影响进行了分析 ,通过低温手段解决了胚性愈伤组织随继代天数的延长体细胞胚分化能力快速降低的问题。同时研究还首次分析了干燥处理对小麦体细胞胚转换能力的影响 ,建立起一套高效的小麦离体培养再生体系 ,而且该体系从接种未成熟胚到再生植株移至土壤只需 1 0～ 1 2周时间 。

杉木未成熟胚胚性愈伤组织诱导影响因素探析

该研究从基因型、6-BA浓度、外植体接种方式和合子胚发育阶段等方面,分析杉木未成熟胚胚性愈伤组织诱导的影响因素。结果表明:基因型、6-BA浓度、外植体接种方式和合子胚发育阶段均对胚性愈伤组织诱导频率有不同程度影响。6种基因型中,有3种基因型诱导出胚性愈伤组织,其中基因型S18胚性愈伤组织诱导频率最高,为11.7%。6-BA浓度在1.0~1.5 mg·L^(-1)范围内时,基因型S18的胚性组织诱导频率较高。以在去皮种子的一端切开一个小口的接种方式为最优,将合子胚剥出的方式易造成合子胚褐化死亡,将未剥皮的种子切开一个小口后直接接入培养基的方式不利于愈伤组织生成。适合胚性愈伤组织诱导的合子胚发育阶段为受精至胚器官分化阶段,合子胚进入成熟阶段后不利于胚性愈伤组织诱导,合子胚易生长成完整植株。

普通小麦新品种陕农33未成熟胚高频再生体系的建立

陕农33是2012年审定的一个高产、稳产、强筋优质的小麦优良新品种。为了解陕农33组织培养特性,以科农199、H261为对照,研究陕农33未成熟胚愈伤组织的诱导和分化能力以及AgNO3、CuSO4对其组织培养的影响。结果表明:陕农33未成熟胚愈伤组织诱导率为98.11%、褐化率为2.48%、再生分化率为80.23%。差异显著性分析显示:陕农33与对照科农199(诱导率99.43%、褐化率2.25%、分化率71.18%)没有显著性差异(P>0.05),但显著(P<0.05)高于H261(诱导率96.24%、褐化率7.81%、分化率62.24%);说明陕农33具有较好的组织再生能力。另外,在培养基中添加4.0mg/L的AgNO3可以进一步提高愈伤组织诱导率至99.41%、分化率至82.35%,使褐化率降至1.68%;添加2.50mg/L的CuSO4可以提高绿苗分化率至84.17%。

葡萄未成熟胚诱导体细胞胚发生和植株再生与遗传鉴定

以二倍体和四倍体葡萄杂交获得的未成熟合子胚为材料,诱导体细胞胚发生。采用的初生胚诱导培养基(SE培养基)为:NN69+1.80 mg.L-1NAA+0.4 mg.L-1水解酪蛋白+2 g.L-1活性炭+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂;次生胚诱导培养基分别为:3/4MS+0.35 mg.L-1IBA+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂(扩繁培养基)和MS+1.5 g.L-16-BA+0.2 g.L-1IBA+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂(胚状体萌发培养基)。结果表明:初生胚诱导率为11.11%和16.67%,体细胞胚在扩繁培养基上再生植株。利用流式细胞仪和SSR标记检测源自同一未成熟合子胚(胚珠)的不同株系的遗传稳定性,结果显示,所测植株均为三倍体,且都来自杂交所得的未成熟合子胚。本研究所建立的体细胞胚诱导方法及遗传稳定性检测技术,能够为植物材料保存、扩繁,转基因应用和研究植物发育及极性建成等提供途径。

蝴蝶兰种子未成熟胚无菌培养的研究

通过人工辅助授粉获得蝴蝶兰种子,利用其未成熟的胚进行无菌培养,通过不同配方的培养基试验,筛选出最佳的种子萌发培养基为1/3MS+BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L+糖20 g/L+香蕉泥50 g/L+活性炭1 g/L。

落叶松胚性愈伤组织诱导与未成熟胚形态的关系

以13落叶松未成熟胚为材料进行胚性愈伤组织的诱导,其中,长73-44、日5*、日5、日5×长77-1、日5×兴9、日12×兴9等6个家系诱导出胚性愈伤组织,7月1日采集的日5×长77-1未成熟胚的胚性愈伤诱导率最高,达13.93%。研究结果表明,不同采集时间的落叶松合子胚形态存在一定区别,诱导出的愈伤组织形态也有所不同,其胚性愈伤组织诱导明显受到取材时间及家系的影响。落叶松胚胎发育存在多胚现象,胚性愈伤组织的诱导率与散粉后时间及胚胎长度呈负相关,而与多胚发生率呈显著正相关(p=0.028)。

油松未成熟合子胚离体培养诱导胚性愈伤组织

研究了油松未成熟合子胚不同发育时期和不同植物生长调节剂组合对油松胚性愈伤组织诱导的影响。结果表明:在沈阳地区,油松未成熟合子胚诱导胚性愈伤组织的最佳采种时间为7月10日左右;以DCR为基本培养基,添加较低浓度的KT和较高浓度的2,4-D有利于油松胚性愈伤组织的诱导,其中以添加2,4-D 2mg/L和KT 0.5mg/L时诱导率最高,可达88.3%。