小鼠胚泡着床障碍模型的建立

目的 建立小鼠胚泡着床障碍动物模型。方法 ①将成年雌性昆明小鼠交配后随机分为对照组和实验组 ,于妊娠d 4实验组于皮下注射不同浓度的米非司酮 ,于妊娠d 8观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数 ,筛选最佳造模剂量。②选用 0 0 8mg·只 -1米非司酮造模 ,采用放免法检测对照组和模型组的血清及子宫组织雌二醇、孕酮的含量 ,利用光镜和电镜观察子宫内膜及卵巢的形态结构。结果 ①当米非司酮的剂量达 0 0 8mg·只 -1以上时 ,着床率和平均着床胚泡数均降低。②与对照组相比 ,模型组子宫内膜的发育明显受抑制 ,而血清及子宫组织的雌二醇和孕酮的含量、卵巢的形态结构均无改变。结论 于妊娠d 4皮下注射米非司酮 0 0 8mg·只 -1,可复制机制明确。

健胎液对胚泡着床障碍小鼠雌、孕激素及其受体的影响

目的探讨健胎液促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜发育的机制。方法采用米非司酮诱导的小鼠胚泡着床障碍模型,予健胎液进行干预,于妊娠第8天处死小鼠,留取血清及子宫标本,采用放免法检测血清和子宫局部雌二醇(E2),孕酮(P)含量,采用免疫组化技术检测子宫雌,孕激素受体(ER,PR)表达。结果各组血清和子宫组织E2,P含量无显著差异(P>0.05);中药组子宫内膜腺体、间质ER,PR表达范围和强度均较模型组显著增高(P<0.05),与正常组无差异(P>0.05)。结论健胎液通过促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体、间质的ER,PR表达,改善子宫内膜的发育,利于胚泡着床。

中药助孕方对促排卵和胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的影响

目的研究中药助孕方对促排卵(OS)和胚泡着床障碍(BID)小鼠子宫内膜容受性的影响及其潜在机制。方法 200只正常雌性昆明小鼠,随机分为A组(对照组)、B组(OS)、C组(OS加中药助孕方)、D组(BID)、E组(BID加中药助孕方)、F组(中药助孕方)。OS组腹腔内注射孕马血清促性腺素和人绒毛膜促性腺素(HCG),BID组于妊娠第4天9:00皮下注射米非司酮。3个中药组于妊娠第1-4天8:00灌胃中药1.5mL/100g。妊娠第4天21:00每组取出8只子宫标本固定,运用免疫组化的方法测定标本中白血病抑制因子(LIF)和整合素β3的表达水平。妊娠第8天21:30处死各组妊娠小鼠,取出子宫,计数胚泡数。结果 B组和D组的妊娠率(6.67%,1/15、18.75%,3/16),LIF蛋白OD值(0.18±0.02、0.23±0.02),整合素β3蛋白OD值(0.20±0.05、0.19±0.02),与A组比较差异有统计学意义(P<0.01)。C组和E组的妊娠率(54.55%,12/22、65.22%,15/23),LIF蛋白OD值(0.37±0.09、0.39±0.02),整合素β3蛋白OD值(0.34±0.04、0.38±0.08)分别与B组和D组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 OS和BID对小鼠子宫内膜容受性有负面影响,阻碍胚泡植入。中药助孕方可以通过上调LIF和整合素β3的表达来改善子宫内膜容受性,提高妊娠率。

对两种胚泡着床障碍小鼠模型围着床期子宫内膜形态结构的比较研究

目的比较研究米非司酮、吲哚美辛诱导的两种胚泡着床障碍小鼠模型围着床期子宫内膜形态结构。方法将成年♀昆明小鼠交配后随机分为对照组、米非司酮组和吲哚美辛组,于妊娠d8观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,利用光镜和电镜观察子宫内膜的形态结构。结果与对照组相比,米非司酮组和吲哚美辛组其着床率和平均着床胚泡数均降低;米非司酮模型小鼠子宫内膜的发育明显受抑制,吲哚美辛模型小鼠子宫内膜的血管形成受阻。结论米非司酮和吲哚美辛通过对围着床期子宫内膜形态结构不同的影响而复制小鼠胚泡着床障碍模型。

补肾安胎方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜HB-EGF及其受体EGFR表达的影响

目的观察中药补肾安胎方对胚泡着床障碍模型小鼠胚泡着床情况及对类肝素结合样表皮生长因子(HB-EGF)及其受体(EGFR)表达的影响。方法将妊娠雌鼠随机分为正常组、模型组、中药组,每组30只,分别于妊娠第5、6天(Pd5、6)用伊文思蓝尾静脉注射后取妊娠子宫。观察妊娠第5天(Pd5)各组对伊文思蓝的着色反应;运用RT-PCR方法检测HB-EGFmRNA的含量,采用免疫组织化学法测定HB-EGF及其受体EGFR的表达。结果Pd5,模型组对伊文思蓝反应和平均反应点数显著低于正常组,中药组与模型组有显著差异。Pd5、6,模型组子宫内膜HB-EGF及其受体EGFR的表达在时间上明显滞后于正常组并且表达量减少,中药组与模型组有显著差异(P<0.05)。结论补肾安胎方改善胚泡着床障碍小鼠胚胎着床可能与提高着床位点的HB-EGF及其受体EGFR的表达有关。

针刺对胚泡着床障碍大鼠胚泡着床及发育的影响

目的:探讨针刺提高辅助生殖技术成功率的作用机制。方法:将孕鼠随机分为正常组、模型组及针刺组。模型组和针刺组均采用米非司酮造模,针刺组自妊娠第1天连续接受1w针刺治疗。观察各组大鼠妊娠率及平均着床胚泡数,比较其子宫、卵巢重量及单个胚泡大小、重量的差异;并用光镜观察各组大鼠子宫内膜及卵巢的形态结构差异。结果:针刺组妊娠率及平均着床胚泡数较模型组显著提高(P<0.01);模型组子宫、卵巢重量等均较正常组及针刺组轻,且子宫内膜发育不良;针刺组子宫内膜发育与正常组相似。结论:针刺可在一定程度上逆转米非司酮抗着床的作用,促进大鼠胚泡着床及胚泡发育。

针刺改善大鼠胚泡着床障碍机制初探

目的观察针刺对胚泡着床障碍大鼠胚泡着床的影响,并初步探讨其作用机制。方法早孕大鼠随机分为正常组、模型组及针刺组,观察各组大鼠着床率及平均着床胚泡数;放免法检测血清雌二醇(E2)、孕酮(P4)及泌乳素(PRL)的水平;免疫组化及RT-PCR法检测着床点孕激素受体(PR)及泌乳素受体(PRLR)表达的差异。结果针刺组着床率及平均着床胚泡数较模型组显著提高(P<0.01),模型组血清P4、PRL水平、PR、PRLR蛋白及mRNA表达水平均低于正常组和针刺组(P<0.05)。结论针刺可在一定程度上促进大鼠胚泡着床,其作用机制可能与针刺调节大鼠体内性激素及其受体表达有关。

对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的研究

目的:建立胚泡着床障碍小鼠模型,并研究其子宫内膜容受性。方法:于妊娠d4上午利用米非司酮诱导昆明小鼠胚泡着床障碍,12h后处死小鼠,观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,利用光镜观察小鼠子宫内膜形态结构,采用免疫组化SP法检测子宫雌、孕激素受体(ER、PR)表达,采用RT-PCR检测子宫ER、PR基因表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数明显降低,子宫内膜发育明显受抑制;子宫内膜腺体、间质ER、PR表达范围和强度均显著降低。结论:米非司酮能成功诱导建立胚泡着床障碍模型,其着床期子宫内膜发育受抑制,子宫内膜容受性降低,胚泡着床失败。

健胎液对胚泡着床障碍小鼠胚泡着床作用的研究

探讨健胎液 (药物 :桑寄生、丹参、当归、黄芪、川芎 )对胚泡着床障碍小鼠胚泡着床及子宫内膜发育的影响。采用米非司酮诱导的小鼠胚泡着床障碍模型 ,予健胎液治疗 ,于妊娠第 8天处死小鼠 ,观察胚泡着床率、平均着床胚泡数以及子宫内膜和卵巢的形态结构变化。结果 :中药组着床率和平均着床胚泡数较模型组显著提高 ,与正常组无显著差异 ;模型组子宫内膜发育不良 ,中药组子宫内膜的发育与正常组相似 ;三组小鼠卵巢的形态结构变化无显著差异。提示健胎液能促进胚泡着床障碍小鼠胚泡着床 ,改善子宫内膜的发育。

补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体凋亡的影响

目的观察补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体凋亡的影响。方法复制小鼠胚泡着床障碍模型,分为对照组、模型组和治疗组,每组30只。观察小鼠妊娠率和着床胚泡数,分析子宫内膜腺体的凋亡情况,检测子宫内膜腺体的增殖细胞核抗原(PCNA)、bax、bcl-2和激活型Caspase-3蛋白表达情况。结果模型组妊娠率和平均着床胚泡数均显著降低,治疗组两者均较模型组显著提高(P<0.05或P<0.01)。模型组子宫内膜腺体增殖指数(PI)明显高于对照组(P<0.01),而凋亡指数(AI)则明显低于对照组(P<0.05);治疗组与模型组比较,腺体PI明显降低而AI明显增高(P<0.01),两者与对照组比较差异均无统计学意义。模型组子宫内膜腺体中bax和激活型Caspase-3蛋白显著低于对照组(P<0.01);治疗组两者则显著高于模型组(P<0.01);治疗组与对照组差异无统计学意义。结论促进子宫内膜腺体中bax蛋白的表达和Caspase-3的激活,调节植入窗期腺体细胞增殖和凋亡的平衡,可能是补肾益气和血方促进子宫内膜接受性建立和改善胚泡着床障碍的机制之一。

白血病抑制因子及其在胚胎发育和胚泡着床中的生理功能

白血病抑制因子在哺乳动物妊娠早期中具有重要的生物学功能。胚源和母体白血病抑制因子可作为胚胎营养因子促进胚胎的发育；母体白血病抑制因子可能通过调节子宫接受性和／或激活胚泡从而启动胚泡着床。

补肾固黄汤改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜组织形态的实验研究

目的观察中药补肾固黄汤对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜组织学形态的影响。方法将45只雌性昆明小鼠随机分为中药组、模型组、正常组。中药组在孕前预防性行补肾固黄汤灌胃2次,孕后每天灌服补肾固黄汤;其余两组给予等体积生理盐水。妊娠第4天中药组、模型组皮下注射米非司酮溶液造成小鼠胚泡着床障碍。妊娠第5天,收集各组小鼠子宫,应用光学显微镜观察小鼠子宫内膜组织形态学变化。结果妊娠第5天,模型组小鼠子宫内膜腺体数量少、腺腔小而直,间质细胞体积小,间质紧密;而正常组则表现为腺体数目多,腺腔扩张、弯曲,腺腔、宫腔均有较多分泌物,间质疏松、水肿;中药组与正常组相似。结论补肾固黄汤可以改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜组织学形态,从而提高子宫内膜容受性。

补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜P21表达的影响

目的:观察补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠着床部位子宫内膜中周期素依赖的蛋白激酶抑制物P21和增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。方法:采用免疫印迹法观察胚泡植入[即妊娠第6天(pregnancy day 6,Pd6),Pd7和Pd8]时P21在整个子宫中的表达,采用免疫组化法进一步定位观察着床部位子宫内膜中PCNA和P21的表达。结果:与对照组相比,模型组子宫内膜PCNA和P21的出现和消失在时间和空间上均明显滞后;补肾益气和血方能促进PCNA和P21及时有序地表达或消失,从而改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜的蜕膜反应。结论:补肾益气和血方可通过促进子宫内膜的蜕膜反应来改善胚泡着床,其作用机制与其促进子宫内膜PCNA和P21时空有序地表达和消失密切相关。

补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜周期蛋白D3表达的影响

目的 观察补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜cyclinD3表达的影响。 方法 妊娠雌鼠随机分为正常组、模型组、治疗组各 2 0只 ,模型组取非孕子宫和妊娠子宫 ,余两组取妊娠子宫。采用免疫印迹法和免疫组织化学法 ,分别测定雌、孕激素、cyclinD3。 结果 胚泡着床障碍小鼠子宫内膜cyclinD3表达在时空上明显滞后 ,补肾益气和血方能促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜cyclinD3及时有序地表达。 结论 补肾益气和血方可促进子宫内膜cyclinD3的表达 ,并可能与子宫内膜的蜕膜化有关 ,可能有助于胚泡着床。

935MHz微波电磁辐射对小鼠胚泡着床的影响

目的:探讨935MHz微波电磁辐射对小鼠胚泡着床的影响。方法:将受精后雌鼠暴露于不同强度、不同时间的935MHz微波辐射,采用逆转录聚合酶链反应法检测围着床期(受精后4d)子宫内膜白血病抑制因子(LIF)mRNA的表达。结果:570μW/cm2(4h/d)辐射组、1400μW/cm2(4h/d)辐射组与对照组相比,LIFmRNA表达均有显著降低(P<0.01),同时与二组强度各自2h/d辐射组比较也有明显减弱(P<0.01)。结论:935MHz微波电磁辐射可影响LIFmRNA表达,进而破坏胚泡着床,并具有一定的剂量反应关系及累积效应。

针刺后三里、三阴交对胚泡着床障碍大鼠子宫VEGF表达的影响

目的:观察针刺后三里、三阴交对胚胎着床障碍大鼠子宫血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:早孕大鼠随机分为正常组(N)、模型组(M)、针刺腧穴组(A)、针刺非穴位组(C),M组、A组、C组均采用米非司酮造模。于妊娠第八天处死大鼠,观察各组大鼠妊娠率及平均着床胚泡数;免疫组化及RT-PCR方法检测各组大鼠子宫VEGF蛋白和mRNA表达的差异。结果:A组妊娠率及平均着床胚泡数较M组、C组显著提高(P<0.05),但A组妊娠率及平均着床胚泡数仍低于N组(P<0.05);A组子宫VEGF蛋白及mRNA表达水平较M组、C组显著提高(P<0.05),与N组比较差异无统计学意义。结论:针刺足三里、三阴交可在一定程度上改善米非司酮诱导的胚泡着床障碍,促进大鼠胚泡着床,其作用机制可能与针刺增加胚泡着床障碍大鼠子宫VEGF的表达有关。

健胎液对胚泡着床障碍大鼠子宫血管生成作用的影响

目的观察健胎液对胚泡着床障碍大鼠胚泡着床的影响,并探讨其作用机制。方法早孕大鼠随机分为正常组、模型组及中药组(健胎液组),观察妊娠第8天各组大鼠妊娠率及平均着床胚泡数;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测妊娠第5～第8天各组子宫内膜环氧化酶-2(COX-2)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因表达的差异;放射免疫法检测妊娠第5～8天各组子宫内膜中6酮--前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)的水平。结果中药组妊娠率及平均着床胚泡数均较模型组显著提高(P<0.05或P<0.01);模型组子宫内膜COX-2 mRNA、VEGF mRNA及6-keto-PGF1α表达水平均低于正常组及中药组(P<0.05或P<0.01)。结论健胎液通过上调胚泡着床障碍大鼠子宫内膜COX-2、VEGF及6-keto-PGF1α表达,促进子宫内膜血管增殖,改善子宫内膜的发育,利于胚泡着床。

保胎液对胚泡着床障碍小鼠雌孕激素的影响

目的:观察保胎液对胚泡着床障碍模型小鼠的雌、孕激素的影响。方法:采用米非司酮小鼠胚泡着床障碍模型。将孕鼠随机分为正常组、模型组、西药对照组和中药(高、中、低3种剂量)治疗组。从妊娠第1天起分别给予生理盐水、地屈孕酮和保胎液(高中低3种剂量)灌胃治疗。于妊娠第4天上午皮下注射米非司酮,每只0.08 mg。正常组不予任何处理。于妊娠第5天处死小鼠留取血清,运用罗氏电化学发光法检测血清雌激素(E2)和孕激素(P)的含量。结果:与模型组比较,保胎液各治疗组均有利于改善血清雌孕激素水平(P<0.05),与西药对照组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:保胎液可以调节血清雌激素(E2)和孕激素(P)的含量,从而改善着床障碍小鼠子宫内膜容受性,促进胚泡着床。

小鼠子宫角注射层粘连蛋白及其抗血清对胚泡着床的影响

目的：研究层粘连蛋白及其特异性抗血清对胚泡着床的影响。方法：在小鼠子宫角内注射层粘连蛋白及其特异性抗血清，并对胚胎着床率与子宫内膜变化进行组织学观察。结果：提示外源性层粘连蛋白在小鼠体内有促进胚泡粘附、植入子宫内膜的趋势，但作用不明显；而层粘连蛋白抗血清则有显著抑制小鼠胚泡着床的效应。结论：小鼠体内的层粘连蛋白对胚胎粘附、着床起重要作用。