小鼠胚泡着床障碍模型的建立

目的 建立小鼠胚泡着床障碍动物模型。方法 ①将成年雌性昆明小鼠交配后随机分为对照组和实验组 ,于妊娠d 4实验组于皮下注射不同浓度的米非司酮 ,于妊娠d 8观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数 ,筛选最佳造模剂量。②选用 0 0 8mg·只 -1米非司酮造模 ,采用放免法检测对照组和模型组的血清及子宫组织雌二醇、孕酮的含量 ,利用光镜和电镜观察子宫内膜及卵巢的形态结构。结果 ①当米非司酮的剂量达 0 0 8mg·只 -1以上时 ,着床率和平均着床胚泡数均降低。②与对照组相比 ,模型组子宫内膜的发育明显受抑制 ,而血清及子宫组织的雌二醇和孕酮的含量、卵巢的形态结构均无改变。结论 于妊娠d 4皮下注射米非司酮 0 0 8mg·只 -1,可复制机制明确。

中药助孕方对促排卵和胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的影响

目的研究中药助孕方对促排卵(OS)和胚泡着床障碍(BID)小鼠子宫内膜容受性的影响及其潜在机制。方法 200只正常雌性昆明小鼠,随机分为A组(对照组)、B组(OS)、C组(OS加中药助孕方)、D组(BID)、E组(BID加中药助孕方)、F组(中药助孕方)。OS组腹腔内注射孕马血清促性腺素和人绒毛膜促性腺素(HCG),BID组于妊娠第4天9:00皮下注射米非司酮。3个中药组于妊娠第1-4天8:00灌胃中药1.5mL/100g。妊娠第4天21:00每组取出8只子宫标本固定,运用免疫组化的方法测定标本中白血病抑制因子(LIF)和整合素β3的表达水平。妊娠第8天21:30处死各组妊娠小鼠,取出子宫,计数胚泡数。结果 B组和D组的妊娠率(6.67%,1/15、18.75%,3/16),LIF蛋白OD值(0.18±0.02、0.23±0.02),整合素β3蛋白OD值(0.20±0.05、0.19±0.02),与A组比较差异有统计学意义(P<0.01)。C组和E组的妊娠率(54.55%,12/22、65.22%,15/23),LIF蛋白OD值(0.37±0.09、0.39±0.02),整合素β3蛋白OD值(0.34±0.04、0.38±0.08)分别与B组和D组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 OS和BID对小鼠子宫内膜容受性有负面影响,阻碍胚泡植入。中药助孕方可以通过上调LIF和整合素β3的表达来改善子宫内膜容受性,提高妊娠率。

对两种胚泡着床障碍小鼠模型围着床期子宫内膜形态结构的比较研究

目的比较研究米非司酮、吲哚美辛诱导的两种胚泡着床障碍小鼠模型围着床期子宫内膜形态结构。方法将成年♀昆明小鼠交配后随机分为对照组、米非司酮组和吲哚美辛组,于妊娠d8观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,利用光镜和电镜观察子宫内膜的形态结构。结果与对照组相比,米非司酮组和吲哚美辛组其着床率和平均着床胚泡数均降低;米非司酮模型小鼠子宫内膜的发育明显受抑制,吲哚美辛模型小鼠子宫内膜的血管形成受阻。结论米非司酮和吲哚美辛通过对围着床期子宫内膜形态结构不同的影响而复制小鼠胚泡着床障碍模型。

补肾安胎方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜HB-EGF及其受体EGFR表达的影响

目的观察中药补肾安胎方对胚泡着床障碍模型小鼠胚泡着床情况及对类肝素结合样表皮生长因子(HB-EGF)及其受体(EGFR)表达的影响。方法将妊娠雌鼠随机分为正常组、模型组、中药组,每组30只,分别于妊娠第5、6天(Pd5、6)用伊文思蓝尾静脉注射后取妊娠子宫。观察妊娠第5天(Pd5)各组对伊文思蓝的着色反应;运用RT-PCR方法检测HB-EGFmRNA的含量,采用免疫组织化学法测定HB-EGF及其受体EGFR的表达。结果Pd5,模型组对伊文思蓝反应和平均反应点数显著低于正常组,中药组与模型组有显著差异。Pd5、6,模型组子宫内膜HB-EGF及其受体EGFR的表达在时间上明显滞后于正常组并且表达量减少,中药组与模型组有显著差异(P<0.05)。结论补肾安胎方改善胚泡着床障碍小鼠胚胎着床可能与提高着床位点的HB-EGF及其受体EGFR的表达有关。

针刺对胚泡着床障碍大鼠胚泡着床及发育的影响

目的:探讨针刺提高辅助生殖技术成功率的作用机制。方法:将孕鼠随机分为正常组、模型组及针刺组。模型组和针刺组均采用米非司酮造模,针刺组自妊娠第1天连续接受1w针刺治疗。观察各组大鼠妊娠率及平均着床胚泡数,比较其子宫、卵巢重量及单个胚泡大小、重量的差异;并用光镜观察各组大鼠子宫内膜及卵巢的形态结构差异。结果:针刺组妊娠率及平均着床胚泡数较模型组显著提高(P<0.01);模型组子宫、卵巢重量等均较正常组及针刺组轻,且子宫内膜发育不良;针刺组子宫内膜发育与正常组相似。结论:针刺可在一定程度上逆转米非司酮抗着床的作用,促进大鼠胚泡着床及胚泡发育。

补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体凋亡的影响

目的观察补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体凋亡的影响。方法复制小鼠胚泡着床障碍模型,分为对照组、模型组和治疗组,每组30只。观察小鼠妊娠率和着床胚泡数,分析子宫内膜腺体的凋亡情况,检测子宫内膜腺体的增殖细胞核抗原(PCNA)、bax、bcl-2和激活型Caspase-3蛋白表达情况。结果模型组妊娠率和平均着床胚泡数均显著降低,治疗组两者均较模型组显著提高(P<0.05或P<0.01)。模型组子宫内膜腺体增殖指数(PI)明显高于对照组(P<0.01),而凋亡指数(AI)则明显低于对照组(P<0.05);治疗组与模型组比较,腺体PI明显降低而AI明显增高(P<0.01),两者与对照组比较差异均无统计学意义。模型组子宫内膜腺体中bax和激活型Caspase-3蛋白显著低于对照组(P<0.01);治疗组两者则显著高于模型组(P<0.01);治疗组与对照组差异无统计学意义。结论促进子宫内膜腺体中bax蛋白的表达和Caspase-3的激活,调节植入窗期腺体细胞增殖和凋亡的平衡,可能是补肾益气和血方促进子宫内膜接受性建立和改善胚泡着床障碍的机制之一。

补肾固黄汤改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜组织形态的实验研究

目的观察中药补肾固黄汤对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜组织学形态的影响。方法将45只雌性昆明小鼠随机分为中药组、模型组、正常组。中药组在孕前预防性行补肾固黄汤灌胃2次,孕后每天灌服补肾固黄汤;其余两组给予等体积生理盐水。妊娠第4天中药组、模型组皮下注射米非司酮溶液造成小鼠胚泡着床障碍。妊娠第5天,收集各组小鼠子宫,应用光学显微镜观察小鼠子宫内膜组织形态学变化。结果妊娠第5天,模型组小鼠子宫内膜腺体数量少、腺腔小而直,间质细胞体积小,间质紧密;而正常组则表现为腺体数目多,腺腔扩张、弯曲,腺腔、宫腔均有较多分泌物,间质疏松、水肿;中药组与正常组相似。结论补肾固黄汤可以改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜组织学形态,从而提高子宫内膜容受性。

补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜P21表达的影响

目的:观察补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠着床部位子宫内膜中周期素依赖的蛋白激酶抑制物P21和增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。方法:采用免疫印迹法观察胚泡植入[即妊娠第6天(pregnancy day 6,Pd6),Pd7和Pd8]时P21在整个子宫中的表达,采用免疫组化法进一步定位观察着床部位子宫内膜中PCNA和P21的表达。结果:与对照组相比,模型组子宫内膜PCNA和P21的出现和消失在时间和空间上均明显滞后;补肾益气和血方能促进PCNA和P21及时有序地表达或消失,从而改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜的蜕膜反应。结论:补肾益气和血方可通过促进子宫内膜的蜕膜反应来改善胚泡着床,其作用机制与其促进子宫内膜PCNA和P21时空有序地表达和消失密切相关。

补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜周期蛋白D3表达的影响

目的 观察补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜cyclinD3表达的影响。 方法 妊娠雌鼠随机分为正常组、模型组、治疗组各 2 0只 ,模型组取非孕子宫和妊娠子宫 ,余两组取妊娠子宫。采用免疫印迹法和免疫组织化学法 ,分别测定雌、孕激素、cyclinD3。 结果 胚泡着床障碍小鼠子宫内膜cyclinD3表达在时空上明显滞后 ,补肾益气和血方能促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜cyclinD3及时有序地表达。 结论 补肾益气和血方可促进子宫内膜cyclinD3的表达 ,并可能与子宫内膜的蜕膜化有关 ,可能有助于胚泡着床。

针刺后三里、三阴交对胚泡着床障碍大鼠子宫VEGF表达的影响

目的:观察针刺后三里、三阴交对胚胎着床障碍大鼠子宫血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:早孕大鼠随机分为正常组(N)、模型组(M)、针刺腧穴组(A)、针刺非穴位组(C),M组、A组、C组均采用米非司酮造模。于妊娠第八天处死大鼠,观察各组大鼠妊娠率及平均着床胚泡数;免疫组化及RT-PCR方法检测各组大鼠子宫VEGF蛋白和mRNA表达的差异。结果:A组妊娠率及平均着床胚泡数较M组、C组显著提高(P<0.05),但A组妊娠率及平均着床胚泡数仍低于N组(P<0.05);A组子宫VEGF蛋白及mRNA表达水平较M组、C组显著提高(P<0.05),与N组比较差异无统计学意义。结论:针刺足三里、三阴交可在一定程度上改善米非司酮诱导的胚泡着床障碍,促进大鼠胚泡着床,其作用机制可能与针刺增加胚泡着床障碍大鼠子宫VEGF的表达有关。

保胎液对胚泡着床障碍小鼠雌孕激素的影响

目的:观察保胎液对胚泡着床障碍模型小鼠的雌、孕激素的影响。方法:采用米非司酮小鼠胚泡着床障碍模型。将孕鼠随机分为正常组、模型组、西药对照组和中药(高、中、低3种剂量)治疗组。从妊娠第1天起分别给予生理盐水、地屈孕酮和保胎液(高中低3种剂量)灌胃治疗。于妊娠第4天上午皮下注射米非司酮,每只0.08 mg。正常组不予任何处理。于妊娠第5天处死小鼠留取血清,运用罗氏电化学发光法检测血清雌激素(E2)和孕激素(P)的含量。结果:与模型组比较,保胎液各治疗组均有利于改善血清雌孕激素水平(P<0.05),与西药对照组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:保胎液可以调节血清雌激素(E2)和孕激素(P)的含量,从而改善着床障碍小鼠子宫内膜容受性,促进胚泡着床。

大鼠胚泡着床障碍动物模型的建立

目的建立大鼠胚泡着床障碍动物模型。方法将与雄性大鼠交配后的成年雌性SD大鼠随机分为正常组、小剂量组(5mg/kg)、中剂量组(6mg/kg)、大剂量组(8mg/kg),小剂量组、中剂量组、大剂量组于妊娠第3天皮下一次性注射不同剂量的米非司酮,于妊娠第8天观察大鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,筛选最佳造模剂量。结果与正常组相比,小剂量组和中剂量组着床率和平均着床胚泡数均显著降低(P<0.01)。中剂量组的着床率和平均着床胚泡数低于小剂量组组,差异无统计学意义(P>0.05)。当剂量达到8mg/kg时,胚泡着床被完全抑制。结论于妊娠第3天皮下注射5mg/kg的米非司酮,可建立稳定可靠的大鼠胚泡着床障碍模型。

保胎液对胚泡着床障碍小鼠着床位点数及分布形态影响的实验研究

目的观察保胎液对胚泡着床障碍模型小鼠着床位点数及分布形态的影响。方法采用米非司酮小鼠胚泡着床障碍模型。将孕鼠随机分为正常组、模型组、西药对照组和中药(高、中、低三种剂量)治疗组,从妊娠第1天起分别给予生理盐水、地屈孕酮和保胎液(高、中、低三种剂量)灌胃治疗。于妊娠第4天上午皮下注射米非司酮,每只0.08 mg。正常组不予任何处理。于妊娠第5天腹腔静脉注射1%浓度的Trypan Blue 0.3 mL,观察10 min,取出子宫,观察蓝染点,计算胚泡着床位点数。结果中药高、中、低治疗组,西药对照组,模型组小鼠胚泡着床位点数均低于正常组(P<0.05);与模型组比较,中药各治疗组、西药组小鼠着床位点数明显提高(P<0.05)。结论保胎液能够增加着床障碍小鼠的胚泡着床位点数,从而有利于胚泡的着床,提高妊娠率。

补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体凋亡的影响

目的观察补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体凋亡的影响。方法通过给8～12周龄昆明小鼠于妊娠第4天皮下注射米非司酮造成胚泡着床障碍模型,采用TUNEL法分析各组小鼠子宫内膜腺体的凋亡情况,采用免疫组化方法检测各组小鼠子宫内膜腺体的增殖情况以及bax和bcl-2蛋白表达情况。结果模型组妊娠率和平均着床胚泡数均显著降低(P＜0．05,P＜0．01)；治疗组的妊娠率及平均着床胚泡数均较模型组显著提高(P＜0．05,P＜0．01)。模型组子宫内膜腺体增殖指数(PI)明显高于正常组(P＜0．01)；治疗组与模型组相比,腺体PI明显降低(P＜0．01),与正常组比较差异无显著性。模型组子宫内膜腺体凋亡指数(AI)明显低于正常组(P＜0．05)；治疗组与模型组相比,腺体AI明显增高(P＜0．01),与正常组比较差异无显著性；各组子宫内膜基质细胞PI和AI差异均无显著性。模型组子宫内膜腺体中bax蛋白显著低于正常组(P＜0．01)；治疗组则显著高于模型组(P＜0．01)；治疗组与正常组比较差异无显著性。结论子宫内膜腺体细胞凋亡不足、增殖亢进可能是米非司酮诱导胚泡着床障碍的机理之一；促进子宫内膜腺体中bax的表达,使植入窗期腺体细胞凋亡增多,可能是补肾益气和血方促进子宫内膜接受性的建立和改善胚泡着床障碍的机制之一。

寄生助孕冲剂对胚泡着床障碍小鼠HOXA10表达的影响

目的观察寄生助孕冲剂对胚泡着床障碍模型小鼠HOXA10表达的影响。方法将孕鼠随机分为正常组、模型组、西药对照组和中药(高、中、低剂量)治疗组,从妊娠第1天起分别给予生理盐水、地屈孕酮和寄生助孕冲剂(高中低剂量)灌胃治疗。妊娠第4天上午皮下注射米非司酮0.08mg/只,正常组不予任何处理。妊娠第5天处死小鼠留取子宫组织,运用实时荧光定量PCR法检测内膜中HOXA-10的含量。结果与模型组比较,中药(高、中剂量)治疗组均有利于提高HOXA-10的表达(P<0.05)。结论寄生助孕冲剂可以提高同源框基因10的表达量,从而改善着床障碍小鼠子宫内膜容受性,促进胚泡着床。

防制胚泡着床障碍中药的筛选及药效研究

为了筛选防制胚泡着床障碍中药,本试验利用皮下注射米非司酮所致的小鼠胚泡着床障碍模型,以妊娠率、着床胚泡数、雌激素和孕激素及其比值为指标,将丹参、黄芪、川芎、黄芩、白术、菟丝子、桑寄生、续断、党参、当归等中药组成复方进行筛选和药效评价。筛选试验结果表明,方3组妊娠率显著高于方1组、菟丝子组和续断组(P<0.05),也高于方2组和对照组,说明方3有利于小鼠胚泡的着床。方3的药效试验表明,保胎组妊娠率极显著高于对照组和高剂量组(P<0.01),显著高于低剂量组(P<0.05)。保胎组孕酮水平、孕酮和雌二醇比值极显著高于高、低剂量组、对照组和正常组(P<0.01),孕酮和雌二醇比值显著高于中剂量组(P<0.05),而保胎组、低剂量组和正常组雌二醇水平显著低于高剂量组和对照组(P<0.05),中剂量组孕酮水平显著高于对照组(P<0.05)。这表明方3能提高小鼠的孕酮水平及孕酮和雌二醇比值,有利于小鼠胚泡着床。

保胎液对胚泡着床障碍小鼠着床位点数影响研究

目的:观察保胎液对胚泡着床障碍模型小鼠着床位点数及分布形态的影响。方法:采用米非司酮小鼠胚泡着床障碍模型。将孕鼠随机分为正常组、模型组、西药对照组和中药治疗组,从妊娠第1天起分别给予生理盐水、地屈孕酮和保胎液灌胃治疗。于妊娠第4天上午皮下注射米非司酮,每只0.08mg。正常组不予任何处理。于妊娠第5天腹腔静脉注射1%浓度的TrypanBlue0.3ml,观察10min,取出子宫,观察蓝染点,计算胚泡着床位点数。结果:中药治疗组,西药组,模型组小鼠胚泡着床位点数均低于正常组(P【0.05);与模型组比较,中药治疗组,西药组小鼠着床位点数明显提高(P【0.05)。结论:保胎液能够增加着床障碍小鼠的胚泡着床位点数,从而有利于胚泡的着床,提高妊娠率。

补肾益气和血方中药对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响

目的 观察补肾益气和血方中药对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜表面胞饮突表达的影响。方法 选择 8～ 12周龄昆明小鼠 ,于妊娠第 4天 (Pd4 )晨 ,皮下注射米非司酮 ,制成胚泡着床障碍模型。然后将妊娠小鼠随机分为正常组、模型组和治疗组 ,治疗组从Pd1开始灌服中药 (补肾益气和血方 ) ,正常组和模型组则给予等量生理盐水灌服 ,模型组和治疗组于Pd4晨皮下注射米非司酮 ,正常组则注射等量生理盐水。采用扫描电镜观察各组小鼠在Pd4晚 2 1时 30分～ 2 2时 (第 1时间点 ,T1)和Pd5上午 9时 30分～ 10时 (第 2时间点 ,T2 ) ,共两个时间点子宫内膜表面胞饮突的表达。结果 模型组妊娠率 ( 2 5 % )较正常组 ( 90 % )显著降低 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,模型组平均着床胚泡数为 ( 7 7± 1 3)个 ,正常组为 ( 14 7± 1 4 )个 ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 0 1) ;治疗组的妊娠率 ( 5 5 % )及平均着床胚泡数 [( 12 3± 0 8)个 ]均较模型组显著增加 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。T1时正常组子宫内膜表面表达大量发育中的胞饮突 ,至T2时则表达大量发育完全的胞饮突 ;T1时模型组子宫内膜发育不同步 ,胞饮突仅在局部少量表达 ,至T2时则表达完全消失 ;T1时治疗组子宫内膜表面表达大量发育中的胞饮突 。

基于小鼠胚泡着床障碍模型探讨二补助育汤对子宫内膜SCF mRNA表达的影响

目的:观察二补助育汤对胚泡着床障碍模型小鼠子宫内膜SCF mRNA表达的影响。方法:建立小鼠胚泡着床障碍模型,将实验动物分为7组:空白组,模型组,补佳乐组,阿司匹林组,中药低、中、高剂量组。于造模的同时给药后处死小鼠,检测小鼠子宫内膜SCF mRNA的表达量。结果:模型组小鼠子宫内膜SCF mRNA的表达明显低于空白组(P<0.05);与模型组比较,中药各治疗组及西药各组小鼠子宫内膜SCF mRNA表达明显增加(P<0.05),中药高、中剂量组子宫内膜SCF mRNA表达明显高于低剂量组(P<0.05)。结论:SCF可能通过作用于其受体C2KIT,从而使胚泡能更好的黏附于子宫内膜,利于其着床;二补助育汤改善子宫内膜容受性的机制可能是通过调控子宫内膜SCF mRNA的表达来实现,从而使卵泡发育与子宫内膜同步,利于胚泡着床。