胚胎发育相关基因-1对人肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨一种新近克隆的胚胎发育相关基因-1(embryonic development associated gene-1,EDAG-1)对人肺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法构建真核表达载体pc DNA3.1(+)-EDAG-1,以脂质体法稳定转染入人肺癌细胞A549和H460,分别通过qRT-PCR和Western blot检测EDAG-1基因mRNA和蛋白的表达,同时检测细胞的增殖及凋亡。结果转染EDAG-1后,A549和H460细胞中EDAG-1的mRNA和蛋白表达水平均显著性升高(P<0.01)。与转染空载体的A549和H460对照组细胞相比,转染EDAG-1的A549和H460细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡率显著性升高(P<0.01)。结论 EDAG-1可以抑制肺癌细胞增殖,促进其凋亡,其可能在肺癌的发生中起着重要作用。

中国卤虫(Artemia sinica)早期胚胎发育相关基因表达序列标签(ESTs)分析

以mRNA差异显示技术分析了中国两性生殖卤虫早期胚胎发育相关基因的表达序列标签(ESTs),共回收了2000条差异条带并进行了克隆、测序,在GenBank/DDBJ/EMBL数据库中用BLASTX和BLASTN软件分别与NCBI上的非冗余核酸序列数据库进行同源性比对,得到分值较高、长度在100bp—2kb以内的ESTs序列133条。所发现的133条ESTs的生物学功能分类为:能量代谢占24%、细胞生长、分裂相关基因占23%、RNA相关占17%、体节形成占12%、蛋白质合成占3%、转录因子占3%、离子转运占5%、细胞信号转导占4%、未知占9%。对所发现的ESTs进行了RT-PCR测定,排除假阳性能够提供足够数量的信息用于获取其全长cDNA,进而获得其全长基因序列以用于功能研究。另外,研究发现了包括小热休克蛋白基因家族、Hox基因家族的abdA和Dfd基因、A-trh基因(排盐器官及盐调节基因)、HIF(缺氧诱导因子)、CK-M2(肌肉型磷酸激酶基因)和GRP基因(富甘氨酸蛋白基因)等20个具有明显功能的相关基因的ESTs和完整基因序列和开放阅读框(ORF)。经初步推断这些ESTs和基因的功能大多为与卤虫发育的生理、生化相关的基因有关。所研究的133条ESTs基本代表了卤虫早期胚胎发育相关功能基因的表达谱。

胚胎肝发育相关基因-1在氯高铁血红素诱导分化的红白血病细胞中的表达

目的 研究胚胎肝发育相关基因 1(EDAG 1)在红系肿瘤分化中的表达及意义。方法 用细胞生物学、RT PCR及Northern杂交法。结果 含 4 0× 10 -5mol·L-1氯高铁血红素 (Hemin)的RPMI 16 40培养K5 6 2细胞 5天 ,可使70 %～ 80 %细胞呈现正常红系特征 ;EDAG 1、c fos表达降低。结论 Hemin可诱导红白血病细胞分化 ;EDAG 1、c fos表达下调可能与其有关。

胚胎发育相关基因精子转录本在白血病细胞系中的表达及其调节

目的探讨胚胎发育相关基因(EDAG)在白血病细胞中的调控机制。方法用半定量RT-PCR方法检测白血病细胞系中EDAG精子转录本EDAG-t的表达;使用不同的分化诱导剂诱导K562和U937细胞分化,检测EDAG-t的表达改变情况。结果在白血病细胞系K562和U937中也可检测到EDAG-t的表达;使用不同的分化诱导剂诱导K562和U937细胞分化,发现EDAG精子转录本和造血转录本的表达都会随细胞分化而下调,但它们的下调步伐不一致,总的说来,EDAG-t的减弱较EDAG-h慢。结论EDAG精子转录本在白血病细胞中的异常表达值得进一步研究。

铁皮石斛胚胎发生相关基因DoEMB8的克隆及表达分析

采用RACE和巢式PCR技术克隆出铁皮石斛胚胎发生相关基因DoEMB8(Embryogenesis-associated protein EMB8)序列。序列分析表明该基因全长2077 bp,包含一个1824 bp的CDS,编码608个氨基酸残基。分子进化分析显示,DoEMB8与海枣(Phoenix dactylifera)、油棕(Elaeis guineensis)、小果野芭蕉(Musa acuminata subsp.malaccensis)等单子叶植物的亲缘关系较近。跨膜区分析显示DoEMB8蛋白含有两个跨膜螺旋结构,亚细胞定位显示该基因可能存在于线粒体。RT-q PCR分析表明,DoEMB8在原球茎不同发育时期表达量较为恒定,在PLB(Protocorm like body)中的表达量较原球茎不同时期要高,在组织表达分析中,种子中的表达量最高,较根中的表达量上升了3.16倍,表明该基因在胚胎发育时期有着持续稳定且较高的表达,可能对植物胚胎发育起着重要作用。

Application of mRNA Differential Display to the Identification of Genes Related to Embryonic Development

mRNA differential display was established by Liang and Pardee in 1992 for the purpose of displaying the mRNA differences between two tissues. The early embryonic development in animals is primarily controlled by the maternal RNAs stored in egg. These mRNAs are being degraded as the development proceeds. In some animals, such as fish and amphibian, new transcripts do not appear until the midblastula stage (midblastula transition, MBT). In other animals, for example in mouse, the zygotic genes are expressed during very early stages of development. The mRNA programmed synthesis and degradation during embryonic development controls the cell differentiation, germlayer formation and pattern formation. All these mRNA changes could be displayed side by side as cDNA band differences by mRNA differential display and the genes corresponding to these differential mRNAs could thus be obtained.