Sonic Hedgehog信号通路分子及胰岛素增强子结合蛋白在小鼠胚胎心流出道发育的早期表达

目的探讨胰岛素增强子结合蛋白(ISL-1)及音速波状蛋白(Sonic Hedgehog,Shh)信号通路分子在小鼠胚胎心流出道的早期表达特点与其发育的关系。方法取胚龄8-13 d小鼠胚胎心脏40例制作连续石蜡切片,应用抗音速波状蛋白(Shh)、抗Smoothened(Smo)、抗Patched(Ptc1)、抗Patched 2(Ptc2)、抗ISL-1、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体进行免疫组织化学及免疫荧光化学染色。结果胚龄8-9 d,Shh阳性表达于前肠腹侧内胚层,Ptc1和Ptc2在心管心肌呈较强阳性表达,ISL-1阳性细胞自心包腔背侧壁、前肠两侧间充质延伸至心管动脉端。胚龄10-13 d,前肠内胚层向腹侧延伸形成喉气管沟,并呈Ptc1和Ptc2强阳性表达,ISL-1和Smo双阳性细胞围绕喉气管沟形成对称的锥体形结构,其顶端突入动脉囊腔,形成主肺动脉隔,随发育进行,主肺动脉隔由ISL-1阳性表达逐渐转为α-SMA强阳性表达,并将动脉囊分隔为MHC阴性的心包内升主动脉和肺动脉干。结论 Shh信号通路与ISL-1阳性细胞共同参与小鼠胚胎心流出道的正常形态发生。

参附注射液对阿尔茨小鼠认知功能的改善作用及机制

目的探讨参附注射液对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)小鼠认知功能的改善作用及其作用机制。方法将60只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为正常组、AD模型组、参附注射液(低、中、高)剂量组、音速波状蛋白(sonic hedgehog,SHH)信号特异性抑制剂环巴胺(cyclopamine,CPA)组。采用皮下注射D-半乳糖和腹腔注射东莨菪碱法诱导构建AD小鼠模型。造模开始后参附注射液低、中、高剂量干预组分别按体重10、15、20 mL/(kg·d)给予参附注射液灌胃,共8周;CPA干预组小鼠按体重20 mL/(kg·d)给予参附注射液灌胃,同时按体重5 mg/kg腹腔注射CPA。采用跳台实验、避暗自动测试仪检测小鼠的记忆功能;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法试剂盒(TUNEL)染色检测脑组织细胞凋亡率;采用ELISA法测定各组小鼠脑组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;采用免疫组化检测脑组织β淀粉样蛋白(amyloid-beta peptide,Aβ)的表达,采用Western blot法检测各组小鼠脑组织中SHH、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和B细胞白血病-淋巴瘤-2相关蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达。结果与正常组相比,AD模型组、参附注射液(低、中、高)干预组、CPA干预组小鼠的记忆潜伏时间、脑组织SOD水平、SHH和Bcl-2的表达明显下降(均P<0.05),错误次数、神经细胞凋亡率、脑组织MDA水平、Aβ和Bax表达明显升高(均P<0.05);与AD模型组相比,参附注射液(低、中、高)剂量组、CPA干预组小鼠的记忆潜伏时间、脑组织SOD水平、SHH和Bcl-2表达升高(均P<0.05),错误次数、神经细胞凋亡率、脑组织MDA水平以及Aβ和Bax表达明显降低(均P<0.05),且具有明显的剂量依赖性(均P<0.05),CPA能部分逆转参附注射液对脑组织的保护作用(均P<0.05)。结论参附注射液能明显降低脑组织的氧化应激,下调脑组织神经元的凋亡率,缓解AD小鼠的脑损伤,其作用机制可能与激活SHH信号有关。

芪术颗粒对大鼠肝缺血/再灌注损伤中SHH信号的影响机制

目的探讨芪术颗粒(QZG)对肝组织缺血再灌注损伤(I/R)中胚胎发育相关音速波状蛋白(SHH)信号的影响机制。方法动物实验:构建大鼠肝脏I/R模型,分为假手术(Sham)组、I/R组、I/R+QZG处理(I/R+QZG)组、I/R+QZG+SHH信号抑制剂环巴胺(CPA,I/R+QZG+CPA)组、I/R+CPA(I/R+CPA)组;检测各组血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量。TUNEL染色检测肝组织细胞凋亡;细胞实验:构建大鼠正常肝细胞BRL-3A氧葡萄糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤模型分为正常细胞(Control)组、模型(OGD/R)组、OGD/R+CPA组、OGD/R+QZG组、OGD/R+QZG+CPA组。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的生长活性;Hoechst 33258染色检测各组细胞凋亡率;Rh123染色检测各组细胞线粒体膜电位;Western印迹检测SHH、SHH通路膜受体蛋白(SMO)、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果QZG能明显降低实验动物血清中ALT和AST活性,明显降低白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α和MDA含量、肝组织及模型细胞中Bax蛋白表达,明显升高SOD活性、模型细胞生长活性及线粒体膜电位和肝组织及模型细胞中SHH、SMO、Bcl-2蛋白表达,并且明显抑制肝组织和模型细胞凋亡;CPA均可部分逆转这些作用,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论QZG能改善肝组织中线粒体功能,抑制细胞凋亡,减轻大鼠肝组织I/R后的病理损伤和超微结构损伤,这些可能与激活SHH信号有关。