IVF-ET胚胎培养液中sHLA-G、MMP-9与胚胎质量及临床妊娠关系

目的:分析体外受精-胚胎移植(IVF-ET)胚胎培养液中可溶性人类白细胞抗原G(sHLA-G)、基质金属蛋白酶(MMP-9)与胚胎质量、临床妊娠的关系。方法:收集2017年1月-2023年1月在本院生殖中心接受IVF-ET治疗的女性患者107例临床资料及标本,新鲜胚胎移植后收集胚胎培养液,分别取未移植的正常受精胚胎中优质胚胎、中等胚胎、劣质胚胎对应胚胎培养液,酶联免疫吸附实验检测胚胎培养液中sHLA-G、MMP-9水平,比较不同胚胎质量对应的胚胎培养液sHLA-G、MMP-9水平及其相关性;记录IVF-ET患者临床妊娠情况并分为临床妊娠组、未妊娠组,比较两组胚胎培养液中的sHLA-G、MMP-9水平及其他临床资料,logistic回归分析胚胎培养液中sHLA-G、MMP-9水平与临床妊娠关系。结果:107例未移植的正常受精胚胎中共收集127份胚胎培养液标本,其中优质胚胎培养液44份、中等胚胎培养液52份、劣质胚胎培养液30份,其胚胎培养液sHLA-G、MMP-9水平逐渐降低,胚胎培养液sHLA-G、MMP-9水平与胚胎质量正相关(均P<0.01)。107例IVF-ET获得临床妊娠69例,临床妊娠率64.6%,未妊娠组胚胎培养液sHLA-G(8.11±1.63 ng/ml)、MMP-9水平(0.45±0.17 ng/ml)均低于临床妊娠组(10.63±2.41 ng/ml、0.61±0.12 ng/ml),第三日卵裂球数(6.0±1.8个)、优质胚胎率(45.6±12.1)%低于临床妊娠组(8.9±1.8个、64.8%±15.9%)(均P<0.05);logistic回归分析,sHLA-G、MMP-9、第三日卵裂球数、优质胚胎率等均是影响IVF-ET患者临床妊娠因素。结论:IVF-ET患者胚胎培养液中sHLA-G、MMP-9水平与胚胎质量正相关,sHLA-G、MMP-9、第三日卵裂球数、优质胚胎率等降低均是IVF-ET患者临床妊娠影响因素。

人卵丘颗粒细胞及胚胎培养液中线粒体的研究进展

线粒体是人体内重要的细胞器,它在细胞供能、调节细胞凋亡、钙信号和活性氧的管理中发挥着重要作用。近几年来,线粒体研究在辅助生殖领域中越来越多,多数研究是关于卵母细胞的发育、卵巢储备功能等,而线粒体在卵丘颗粒细胞及体外胚胎培养液中的研究较少。卵丘颗粒细胞线粒体在预测胚胎质量及妊娠结局方面的作用仍没有明确定论,胚胎培养液中的线粒体能否预测胚胎发育潜能尚需进一步研究,本文就此热点展开综述,以期为临床研究提供最新理论依据。

胚胎培养液游离DNA检测在人类辅助生殖技术中的临床应用挑战

胚胎染色体非整倍体筛查技术(PGT-A)能有效提高体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的临床妊娠率和胚胎植入率,此技术已广泛应用于临床。然而,PGT-A技术中的胚胎活检对胚胎进行有创操作,可能会导致胚胎损伤和远期风险。胚胎游离DNA检测技术的发现,使无创PGT-A技术成为可能,其以无创、简单、安全等特点具有良好的应用前景,但因检测灵敏度不高及样本获取困难等问题制约其在临床的应用。本文简述胚胎培养液中游离DNA在人类辅助生殖技术中的临床应用挑战,以期为此技术的临床应用提供参考依据。

不同形态及发育结局D3胚胎培养液中HCG水平比较

目的探讨胚胎培养液中HCG水平与胚胎发育的关系,评估胚胎源性HCG在胚胎质量评估中的应用价值。方法采用电化学发光法检测IVF-ET患者D3胚胎培养液中的HCG(D3-HCG)浓度,记录D3胚胎细胞数、是否均匀、碎片率、胞浆颗粒和空泡、融合情况及囊胚培养结局,比较不同形态及囊胚培养结局胚胎的D3-HCG水平差异。结果D3-HCG水平在4~6细胞组与7~9细胞组间(F=3.331,P=0.038)、D5囊胚组与D6囊胚组间(t=-2.710,P=0.008)、D3胚胎融合组与非融合组间(t=2.659,P=0.008)差异均有统计学意义;D3-HCG水平在其他胚胎形态及囊胚培养结局分组间的差异无统计学意义。结论是否形成囊胚及囊胚质量与D3-HCG水平不存在相关性,胚胎的发育速度与D3-HCG水平有一定关联,D3-HCG浓度检测应用于胚胎优选的价值有待进一步验证。

人胚胎源性人绒毛促性腺激素在胚胎培养液中的水平与早期胚胎发育的关系

目的探讨人胚胎源性人绒毛促性腺激素(HCG)在第3天胚胎培养液中的表达及其与早期胚胎发育间的关系。方法收集IVF-ET患者体外第3天单个培养胚胎培养液,通过ELISA方法检测培养液中HCG浓度,比较其与胚胎数目、分级、碎片等传统评分间的关系。结果在60个病人的163份第3天胚胎培养液标本中,胎源性HCG的检测率是93.8%(153/163),表达浓度是0.85±0.43 mIU/ml。HCG浓度与胚胎卵裂球细胞数呈正相关。随着细胞数增加,培养液中HCG表达也提高(P<0.05)。随着胚胎形态评分级别的下降,培养液中HCG表达下降(P<0.05)。结论 ELISA方法能检测出第3天胚胎培养液中胎源性HCG的微量表达。胚胎培养液中胎源性HCG水平与传统胚胎形态评估有相关性,提示它有可能作为新的评估胚胎发育的无创性方法。

体外胚胎培养液代谢组学分析在评价胚胎发育潜能的研究进展

代谢组学是对溶液、组织、细胞等生物样本中的小分子代谢物进行定性和定量分析,从而得到生物体受外界刺激后其代谢水平的整体变化的结果。其研究过程包括代谢组数据的采集、预处理、多变量数据分析、标记物识别和途径分析等步骤。代谢组学作为一种新兴技术,在辅助生殖技术中具有很好的应用前景。胚胎的发育和代谢是个动态过程,应用质谱分析、光谱分析和磁共振波谱技术能客观、全面、准确、无创地反映胚胎质量及其发育潜能,可作为胚胎形态学评估的补充,从而提高胚胎种植率,提高单胚胎移植的妊娠率。

胚胎培养液中HCG水平对胚胎发育潜能的影响

目的探究胚胎培养液人绒毛膜促性腺激素(HCG)水平高低对胚胎发育潜能的影响。方法随机选取于2014年4~8月因女性输卵管疾病或男性精子活力不够、精子少等情况来连云港市妇幼保健院生殖研究中心接受体外受精及胚胎移植(IVF-ET)治疗的80例患者,依据酶联免疫吸附试验原理,检测HCG在患者第3天胚胎培养液中水平高低,比较不同质量胚胎HCG浓度在胚胎培养液中水平高低,比较妊娠患者与未妊娠患者HCG在胚胎培养液中水平差异。结果第3天胚胎培养液中HCG水平高低与胚胎卵裂数目、分级无关,差异无统计学意义(P>0.05);妊娠组患者HCG为(1.15±0.09)IU/L,高于未妊娠组患者HCG(1.10±0.06)IU/L,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HCG在胚胎培养液中水平高低可作为筛选、优选胚胎以及估测发育潜能的重要指标之一。

卵泡液和胚胎培养液LIF与IVF-ET结局的关系

目的探讨卵泡液和胚胎培养液中白血病抑制因子(LIF)的表达水平与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的关系。方法收集取卵日卵泡液、胚胎移植及冷冻后胚胎培养液,检测卵泡液中LIF、雌二醇(E_2)、孕酮(P)和胚胎培养液中LIF的水平,分析卵泡液和胚胎培养液LIF与卵子质量、胚胎质量及临床结局的关系。结果妊娠组胚胎培养液中LIF浓度显著高于未妊娠组(t=5.785,P<0.05),而妊娠组卵泡液P浓度显著低于未妊娠组(t=4.475,P<0.05)。两组卵泡液LIF、E_2浓度差异无统计学意义(t值分别为1.305、0.680,均P>0.05)。卵泡液LIF浓度与获卵数、成熟卵子率、卵裂率、优质胚胎率、E_2均呈显著正相关(r值分别为0.285、0.394、0.302、0.387、0.476,均P<0.05),卵泡液LIF与受精率、卵泡液P无显著相关性(r值分别为0,050、0.243,均P>0.05)。卵泡液LIF与移植胚胎胚胎培养液中LIF无显著相关性(r=0.107,P>0.05)。优质胚胎培养液中LIF水平显著高于劣质胚胎培养液中LIF水平(t=8.334,P<0.05)。结论卵泡液中LIF与E_2、卵母细胞质量有关,可以根据卵泡液中LIF评估卵母细胞的质量。胚胎培养液中LIF可以作为预测胚胎质量和妊娠结局的依据。

卵泡液和胚胎培养液中氧化损伤的研究现状

氧化损伤是由活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生和清除失衡所致,主要包括DNA,蛋白和脂质的氧化损伤.过量ROS损伤可以导致核DNA和线粒体DNA突变或缺失,细胞膜脂质过氧化导致膜流动性改变,而蛋白的氧化损伤导致重要酶失活.卵泡液和胚胎培养液中存在ROS,一定水平的ROS对维持卵母细胞的正常生长发挥重要作用,ROS的过度升高对卵母细胞成熟和胚胎发育造成不良影响.因此理解卵泡液和培养液中的氧化损伤,对于探讨卵母细胞质量下降及胚胎发育不良的影响因素具有重要价值,现将卵泡液和胚胎培养液中氧化损伤的研究进展综述如下.

胚胎培养液对新生儿出生体重及身长的影响

目的探索体外受精(IVF)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)新鲜分裂期胚胎移植周期中不同商品化胚胎培养液(Cook、Vitrolife)对新生儿出生体重及身长的影响。方法回顾性分析2014年8月~2015年12月于南京大学医学院附属鼓楼医院生殖医学中心行IVF/ICSI术移植双分裂期胚胎成功分娩的1441例患者临床资料。根据分娩胎数和胚胎培养液不同进行分组,单胎周期和双胎周期分别分为Cook组和Vitrolife组。分别比较单胎组和双胎组中两种培养液培养后新生儿的出生体重和身长。结果单胎组中,Cook组新生儿出生体重及身长较Vitrolife组差异无统计学意义(P>0.05);双胎组中,Cook组新生儿出生体重及身长较Vitrolife组差异无统计学意义(P>0.05)。结论两种商品化胚胎培养液(Cook、Vitrolife)在IVF/ICSI新鲜分裂期胚胎移植周期中对新生儿出生体重和身长无显著性影响。

人卵泡液及胚胎培养液中活性氧和抗氧化能力的变化研究

目的研究超促排卵周期中不同直径卵泡液及不同质量胚胎培养液中活性氧(ROS)和抗氧化能力(TAC)含量的变化,探讨ROS和TAC在卵泡、胚胎发育中的作用及与妊娠结局的关系。方法采用比色法测定31例因输卵管因素行IVF-ET的患者不同直径卵泡液及不同级别胚胎培养液中的ROS、TAC含量。结果检测到大、中、小卵泡中均存在ROS、TAC,含量差异无统计学意义,但妊娠组TAC/ROS比值小于未妊娠组。在胚胎培养液中仅检测到ROS含量,未检测到TAC。优质胚胎与劣质胚胎间ROS含量差异无统计学意义,但当移植胚胎培养液中ROS<200U/mL时,趋向有较好妊娠结局。结论 ROS和TAC与卵泡发育无关,但TAC/ROS比值增高可能与不良妊娠结局有关。胚胎培养液中ROS含量在不同级别胚胎差异无统计学意义,但培养液中ROS的低水平与良好妊娠结局有关,可能可以作为预测胚胎发育潜能的指标。

胚胎培养液中人绒毛膜促性腺激素水平与胚胎发育潜能的关系探讨

目的:探讨D3胚胎培养液中人绒毛膜促性腺激素水平与胚胎发育潜能的关系。方法:应用酶联免疫吸附试验法测定体外受精—胚胎移植助孕患者D3培养液中hCG水平,比较不同胚胎质量间胚胎培养中hCG水平的差异,并比较妊娠组与未妊娠组、不同种植率组间移植胚胎培养液中hCG水平。结果:D3胚胎培养液中hCG水平与胚胎卵裂球数目、分级无相关性(P>0.05);妊娠组移植胚胎培养液中hCG水平高于未妊娠组[(1.14±0.10)IU/L与(1.09±0.04)IU/L,(P<0.05)];胚胎种植率分别为0%、50%、100%对应组的胚胎培养液中hCG水平为(1.09±0.04),(1.11±0.07),(1.29±0.05)IU/L,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:胚胎培养液中hCG水平可以作为筛选胚胎、预测胚胎发育潜能的一个指标。

体外受精移植胚胎培养液中可溶性人白细胞抗原-G的研究

目的:检测体外受精移植(IVF-ET)胚胎,培养液中胚胎分泌的可溶性人白细胞抗原-G(sHLA-G)水平,探讨sHLA-G与IVF妊娠率的相关性。方法:收集2008年3-6月,唐都医院妇产科生殖中心进行试管婴儿的患者,体外单个培养胚胎的培养液,通过ELISA法检测培养液中sHLA-G的浓度。结果:在41例患者的84份胚胎培养液中,移植至少一个sHLA-G阳性胚胎的妊娠率69%,明显高于全部移植sHLA-G阴性的妊娠率18%(P<0.05)。结论:检测胚胎sHLA-G的表达水平,可以作为辅助形态学评估选择胚胎移植,预测IVF妊娠率。

白血病抑制因子在人胚胎培养液中的表达研究

目的:探究白血病抑制因子在人胚胎培养液中的表达。方法:将人胚胎(新结合的胚胎)置于含有不同浓度(0.1和1μg/L)的白血病抑制因子抗体和具有正常的Ig G的人胚胎培养液中该组为实验组与阴性对照的培养液中各培养0.5小时。随后对囊胚和子宫内膜上皮细胞进行共培养,比较胚胎的着床率(内膜与胚胎的粘附率),并施行p STAT3和STAT3免疫组化染色。结果:LIF组与抗体组、Ig G组都有显著的统计学差异(P<0.05),免疫组化染色结果显示,子宫内膜上皮细胞没有LIF抗体附着。在p STAT3方面,LIF组内膜与对照组有明显的差异(P<0.05)。结论:白血病抑制因子对胚胎着床的过程有着较大的影响力,对白血病抑制因子通过降调节的方法可使胚胎的着床率随之降低,着床率又是通过STAT3磷酸化来取得效果的。

胚胎培养液中蛋白氧化水平对早期胚胎发育的影响

目的研究体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transplantation,IVF-ET)周期胚胎培养液中蛋白氧化水平及其对人早期胚胎发育的影响。方法测定30例接受常规IVF治疗及30例接受单精子卵细胞内注射(intracytoplasmic sperm injection-embryo transplantation,ICSI)的不孕症患者第1天胚胎培养液中晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products,AOPP)的水平,分析AOPP水平与早期胚胎发育的关系。结果在常规IVF周期中,第1天胚胎培养液中AOPP浓度在3.2μmol/L以下时,其变化与受精率、卵裂率、碎片率、6细胞以上胚胎形成率及IVF结局无相关性;在3.2μmol/L以上时,AOPP水平与IVF结局负相关。在ICSI周期中,第1天胚胎培养液中高水平的AOPP浓度在3.2μmol/L以下时,其变化与受精率、卵裂率、碎片率、6细胞以上胚胎形成率及IVF结局无相关性;在3.2μmol/L以上时,AOPP水平与受精率、卵裂率、碎片率、6细胞以上胚胎形成率及IVF结局负相关。结论IVF-ET周期中,第1天胚胎培养液中存在蛋白氧化应激现象,高水平的AOPP与胚胎质量,IVF结局负相关,在ICSI周期中,表现尤为明显。

辅助生殖技术中胚胎培养液中HCG、sHLA-G水平与临床妊娠的相关性

目的:探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)技术中胚胎培养液人绒毛膜促性腺激素(HCG)、可溶性人类白细胞分化抗原-G(sHLA-G)水平与术后临床妊娠的相关性。方法:.选取2018年2月-2020年5月120例在上海市第一妇婴保健院行IVF-ET助孕临床资料进行回顾性分析,移植胚胎数均2枚。根据助孕后临床妊娠分为妊娠组(成功妊娠)与非妊娠组(妊娠失败)各60例。采用logistic回归模型分析影响IVF-ET助孕后妊娠结局的危险因素,Spearman法分析HLA-G、HCG与妊娠结局、优胚数的相关性,运用受术者工作特征曲线(ROC)分析HLA-G、HCG预测妊娠结局效能。结果:妊娠组与非妊娠组在年龄、授精方式、不孕时间、基础性激素水平、Gn天数、Gn总量、内膜厚度、获卵数、授精数、胚胎数等比较均无差异(P>0.05);培养液中HCG、sHLA-G、优胚数妊娠组均高于非妊娠组(均P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,sHLA-G、HCG、优胚数是影响行IVF-ET助孕后妊娠的独立危险因素(P<0.05);Spearman相关性分析,sHLA-G、HCG与IVF-ET助孕妊娠(r=0.559、0.682,均P<0.05)及优胚数(r=0.602、0.564,均P<0.05)均呈正相关;ROC曲线分析显示,HCG、sHLA-G预测临床妊娠的曲线下面积分别为0.823、0.894,HCG最佳临界值1.29IU/L,敏感度为66.7%,特异度85.0%。约登指数0.517;sHLA-G最佳临界值4.73 IU/ml,敏感度78.3%,特异度为90.0%,约登指数0.683。结论:辅助生殖技术时胚胎培养液中HCG、sHLA-G水平与早期胚胎发育及临床妊娠有一定相关性,可将其作为预测助孕妊娠的重要参考评估指标。

胚胎培养液用于染色体筛查的初步研究

目的:对胚胎培养液筛查胚胎染色体进行初步探讨,为优质胚胎无创筛查体系提供数据和技术支持。方法:采集胚胎培养液86例和囊胚36例,其中56例为卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(ICSI-ET)胚胎培养液,30例为体外受精-胚胎移植(IVF-ET)胚胎培养液。采用基因测序通用文库试剂盒对囊胚及胚胎培养液进行MALBAC单细胞全基因组扩增及文库构建,运用高通量测序平台进行测序,运用ChromGoTM2.0数据分析平台检测染色体非整倍体及10M以上的片段缺失和(或)重复。结果:86例胚胎培养液中27例未检出染色体核型,其中前期收集36例标本,检出成功率41.7%;改进方法收集50例标本,检出成功率88.0%。对36例囊胚及其培养液染色体结果进行对比,IVF-ET 18例,染色体倍性一致率38.9%,非整倍体假阳性率50.0%,假阴性率0.0%;ICSI-ET 18例,染色体倍性一致率77.8%,非整倍体的假阳性率16.7%,假阴性率5.6%。结论:ICSI-ET受精方式在胚胎培养液用于胚胎染色体的筛查中优于IVF-ET;建立完善的培养液收集流程利于胚胎染色体检测。

胚胎培养液中sHLA-G的表达及其对IVF-ET妊娠结局的影响

目的：探讨胚胎培养液中可溶性白细胞抗原-G（soluble leukocyte antigen-G,sHLA-G）的表达与早期胚胎发育的关系及其对IVF-ET妊娠结局的影响。方法：留取第3天移植及冷冻后的胚胎培养液,采用ELISA检测sHLA-G的表达水平。结果：1Ⅰ级胚胎与Ⅱ级胚胎培养液中sHLA-G表达水平相比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,Ⅰ级和Ⅱ级胚胎培养液中sHLA-G表达水平均明显高于Ⅲ、Ⅳ级胚胎（P〈0.05）。2双原核不同细胞数≤4细胞、5~6细胞、7~9细胞对应胚胎培养液中sHLA-G表达水平有增高趋势,但差异无统计学意义（P〉0.05）。3妊娠组胚胎培养液中sHLA-G的表达水平显著高于非妊娠组（P〈0.05）。结论：胚胎培养液中sHLA-G的表达水平可作为预测胚胎质量及妊娠结局的参考指标之一。

胚胎培养液中可溶性白细胞抗原-G的表达及其对体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响

目的：探讨胚胎培养液中可溶性白细胞抗原-G（soluble leukocyte antigen-G,sHLA-G）的表达与早期胚胎发育的关系及其对体外受精-胚胎移植（IVF-ET）妊娠结局的影响。方法：留取第3天移植及冷冻后的胚胎培养液微滴装入EP管置于-80℃冰箱中保存。采用ELISA检测sHLA-G的表达水平。结果：Ⅰ级胚胎与Ⅱ级胚胎对应胚胎培养液中sHLA-G表达水平相比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,Ⅰ级和Ⅱ级胚胎对应胚胎培养液中sHLA-G表达水平均明显高于Ⅲ、Ⅳ级胚胎,差异有统计学意义（P〈0.05）。双原核不同细胞数≤4细胞、5~6细胞、7~9细胞对应胚胎培养液中sHLA-G表达水平有增高趋势,但差异无统计学意义（P〉0.05）。妊娠组胚胎培养液中sHLA-G的表达水平显著高于非妊娠组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：胚胎培养液中sHLA-G的表达水平可作为预测胚胎质量及妊娠结局的参考指标之一。

胚胎培养液中可溶性人白细胞抗原G与胚胎发育的相关性研究

目的探讨胚胎培养液中可溶性人白细胞抗原G(sHLA-G)与胚胎发育以及IVF-ET结局的关系,为临床优选胚胎提供一种有效的非侵入性检测途径。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测第3日移植胚胎培养液中sHLA-G的表达,根据移植胚胎培养液中sHLA-G的表达分组比较体外受精-胚胎移植的结局。结果共收集胚胎培养液284份,sHLA-G阳性率为55.28%(157/284)。根据胚胎培养液sHLA-G的检出分组比较,sHLA-G++组和sHLA-G+-组的优质胚胎率均明显高于sHLA-G--组(P<0.05),sHLA-G++组和sHLA-G+-组的临床妊娠率均高于sHLA-G--组(P<0.05),sHLA-G++组与sHLA-G+-组间的优质胚胎率和临床妊娠率均无统计学差异(P>0.05)。结论 sHLA-G在早期胚胎培养液中有表达,能反映了胚胎良好的发育和种植潜能,预示着较好的IVF-ET结局,是一种优选移植胚胎的有效的非侵入性途径。