阶段性胚胎抗原-1,OCT-4,颗粒酶B在脂肪成体干细胞中的表达

目的:探索脂肪成体干细胞中是否表达胚胎时期标志蛋白SSEA-1,OCT-4,GRB.方法:先将C57小鼠脂肪用I型胶原酶消化,然后采用直接贴壁法,培养获得的细胞.取第3代生长状态稳定、形态均一的细胞进行成脂、成骨诱导分化,同时观察所培养的第3代细胞表达胚胎时期标志蛋白SSEA-1,OCT-4,GRB的情况.结果:通过该培养方法,可以获得稳定的细胞群体,并能成功进行成骨、成脂诱导分化;免疫荧光化学检测显示三种胚胎时期出现的特殊蛋白均有不同程度的表达.结论:脂肪来源的成体干细胞中表达胚胎时期的产物,这种特性可能与干细胞的多向分化特性有关系.

远志总皂苷干预β-淀粉样蛋白致伤神经干细胞Caspase-3及Par-4的表达

背景:远志总皂苷具有良好的神经保护作用。目的:分析远志总皂苷对β-淀粉样蛋白致伤海马神经干细胞的保护作用及机制。方法:自昆明小鼠海马分离培养神经干细胞,取第3代神经干细胞,用含不同质量浓度远志总皂苷与β-淀粉样蛋白致伤体外培养的神经干细胞共孵育。结果:应用免疫组织化学法检测Caspase-3阳性神经干细胞,与对照组相比,远志总皂苷组Caspase-3阳性细胞率及Par-4的表达明显降低,差异具有显著性意义(P<0.05)。提示远志总皂苷能够降低β-淀粉样蛋白致伤神经干细胞中Caspase-3及Par-4的表达。

静脉注射骨髓间充质干细胞可抑制大鼠损伤脊髓水通道蛋白-4的表达

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠损伤脊髓AQP-4表达的调节作用。方法:体外分离、培养、纯化MSCs,应用流式细胞术检测MSCs表面细胞标志CD34、CD45、CD29、CD90。根据改良Allen法制备大鼠脊髓损伤模型。SD大鼠随机分为假手术组、对照组和实验组,假手术组和实验组经尾静脉注射MSCs,对照组经尾静脉注射PBS。损伤注射MSCs后1、3、7 d,应用免疫组织化学和图像分析技术检测脊髓组织水通道蛋白-4(AQP-4)的表达。结果:对照组大鼠脊髓的AQP-4表达于损伤后1 d开始增加,损伤后3 d达到峰值,损伤后7 d开始减少。实验组大鼠脊髓的AQP-4表达比对照组明显减少。结论:MSCs移植可抑制脊髓损伤后AQP-4的表达。

骨形态发生蛋白质-4转染骨髓间充质干细胞复合双层聚乳酸羟基乙酸共聚物支架修复兔膝关节软骨缺损

目的：探讨骨形态发生蛋白质-4（BMP-4）基因转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）复合聚乳酸羟基乙酸共聚物（PLGA）修复兔全层关节软骨缺损的效果。方法：取兔骨髓间充质干细胞，分离培养后，免疫组织化学鉴定BMSCs。采用电转法将pcDNA3-1-BMP-4质粒导入BMSCs。转染成功后培养备用。制备直径为4mm的双层PLGA支架。新西兰大白兔随机分成空白组、PLGA组、PLGA/BMSCs组、PLGA/BMP-4/BMSCs组4组，将双层PLGA支架置入兔双膝关节股骨内侧髁软骨缺损中。观察并记录术后动物膝关节活动情况。第8、16周时取膝关节置入组织行H-E染色，在扫描电镜下观察置入的PLGA新生组织。采用RT-PCR法定量检测4组修复软骨缺损处新生的软骨Ⅱ型胶原、SOX9、蛋白聚糖基因的表达水平。结果：术后各组动物膝关节活动正常，未见炎症反应。第8、16周时PLGA/BMP4/BMSCs组兔膝关节损伤修复优于其他3组。H-E染色结果可见PLGA/BMP4/BMSCs组膝关节损伤修复效果优于其他3组。RT-PCR结果显示PLGA/BMP4/BMSCs组兔置入的PLGA新生的软骨中Ⅱ型胶原、SOX-9、蛋白聚糖基因的表达水平显著高于其他各组。结论：BMP-4转染BMSCs后能够促进骨髓间充质干细胞分化成软骨细胞，双层PLGA支架置入有利于兔膝关节软骨缺损区的修复。

人胰腺癌中前列腺干细胞抗原及紧密连接蛋白-4的表达

目的检测前列腺干细胞抗原(PSCA)和紧密连接蛋白-4(Claudin-4)在胰腺癌中的表达情况,探讨PSCA和Claudin-4在胰腺癌发病中的作用。方法构建包含78例胰腺癌、12例慢性胰腺炎、10例正常胰腺组织的100点阵的组织芯片,免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法检测该芯片中PSCA和Claudin-4的表达,分析其与胰腺癌临床病理因素的关系。结果78例胰腺癌患者中,PSCA和Claudin-4阳性表达率分别为79.5%和88.5%,与正常胰腺组织和慢性胰腺炎组织比较差异具有显著性(均P<0.01);PSCA和Claudin-4表达与患者年龄、性别及肿瘤分化程度、TNM分期无相关性。结论PSCA和Claudin-4阳性表达与胰腺癌相关,可能与胰腺癌的发生发展有着密切关系,但与胰腺癌的临床病理特型无关。

骨形成蛋白-4对小鼠诱导性多能干细胞牙向分化能力的影响

目的:探讨骨形成蛋白-4(BMP4,bone morphogenetic protein-4)对小鼠诱导性多能干细胞(iPS,induced pluripotent stem cell)牙向分化能力的影响。方法:成釉细胞无血清条件培养液(ASF-CM)中分别加入BMP4(ASF-BMP4)和Noggin(ASF-Noggin),定向诱导小鼠iPS细胞向牙源性细胞转化,观察诱导后细胞形态改变,细胞免疫荧光及RT-PCR检测AMBN、AMGN、CK14、DMP-1、DSPP的表达。结果:免疫荧光染色结果显示:iPS细胞经ASF-BMP4诱导后AMBN、AMGN、CK14、DMP-1、DSPP表达阳性。RT-PCR结果显示:诱导iPS细胞14d后,与ASF-CM组相比,ASF-BMP4组AMBN、DMP-1、DSPP表达显著增高,ASF-Noggin组AMBN、DMP-1、DSPP表达明显降低。结论:BMP4能促进小鼠iPS细胞向成釉细胞谱系和成牙本质细胞谱系分化,而Noggin抑制iPS细胞的分化。

神经调节蛋白-1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化

目的观察神经调节蛋白-1(NRG-1)诱导小鼠胚胎干细胞(ESCs)向心肌细胞分化及扩增心肌细胞的作用。方法分别观察ESCs自发及NRG-1诱导情况下心肌细胞分化率;RT-PCR检测心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5mRNA及心肌骨架蛋白α-MHC、β-MHCmRNA的表达;细胞免疫组化检测心肌α-actinin蛋白表达;血管活性药物刺激观察心肌细胞的功能反应。结果NRG-1诱导的心肌细胞分化率显著高于自发的心肌细胞分化率(P<0.05),且诱导生成的心肌细胞对肾上腺素能及胆碱能药物刺激呈现相应的频率反应,刺激前后搏动频率差异均有统计学意义(P<0.05);NRG-1呈剂量依赖性上调GATA-4、Nkx2.5mRNA的表达,在NRG-1为100ng/mL时表达水平最高,且两者的相对表达量明显高于自发分化组的相对表达量(P<0.05或P<0.01);NRG-1干预增加心肌细胞骨架蛋白α-MHC、β-MHCmRNA水平且增强α-actinin蛋白表达(P<0.05)。结论外源性NRG-1早期干预能够诱导ESCs向心肌细胞分化并扩增ESCs分化形成的心肌细胞。

β-淀粉样蛋白致胚胎鼠大脑神经干细胞凋亡作用的研究

目的探讨β-粉样蛋白(amyloid-βprotein,Aβ)对胚胎鼠神经干细胞凋亡作用的影响。淀方法体外培养7d的胚胎鼠神经干细胞,分为正常对照组和实验组,实验组根据Aβ1～40作用终浓度的不同,又分为0.1,1.0,5.0,10.0和20.0μmol/L等5个亚组,分别培养12h、24h、48h及72h。然后经四唑盐实验筛选Aβ1～40致神经干细胞发生凋亡的最佳浓度,再与神经干细胞共同培养。通过Annexin-V磷脂酰丝氨酸荧光标记染色法观察神经干细胞早期凋亡情况;用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)进行染色,观察神经干细胞中晚期凋亡情况。结果(1)经四唑盐筛选实验确定,以终浓度为5.0μmol/L的Aβ1～40作为β-淀粉样蛋白致神经干细胞发生凋亡的最佳诱导剂量。(2)神经干细胞与Aβ1～40(5.0μmol/L)共同培养至6h时,神经干细胞发生早期凋亡,细胞内出现大量绿色荧光标记物,而对照组则未见绿色荧光标记物。(3)神经干细胞与Aβ1～40(5.0μmol/L)共同培养24h时,神经干细胞发生中晚期凋亡,细胞内可见绿色荧光标记物。结论β-粉样蛋白可导致胚胎鼠大脑神经干细胞发生凋亡。

重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白-9对小鼠胚胎肝脏干细胞诱导分化的影响

目的探讨重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白-9(Adv-BMP-9)诱导小鼠胚胎肝干细胞向成熟肝细胞定向分化的影响。方法将已构建的表达BMP-9、肝细胞生长因子(HGF)和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒,分别感染小鼠胚胎肝干细胞,诱导其分化,然后采用半定量PCR、Real-time PCR、细胞免疫荧光、荧光素酶报告基因检测等方法检测甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)和细胞角蛋白18(CK18)等肝细胞标志物的表达。结果半定量及Real-time PCR检测,诱导7 d后的BMP-9组、HGF组AFP的mRNA表达△△Ct值分别为(0.027±0.003)、(0.023±0.002),较GFP对照组(0.103±0.018)显著下降,ALB的mRNA表达△△Ct值分别(0.041±0.005)、(0.031±0.001),较GFP对照组(0.013±0.002)明显升高,CK18的mRNA表达△△Ct值分别(0.094±0.003)、(0.083±0.007),较GFP对照组(0.040±0.008)明显升高(P<0.05);细胞免疫荧光染色,诱导7 d后的细胞胞浆内表达肝细胞特有的ALB、CK18等蛋白,而对照组几乎无表达;荧光素酶报告基因检测,诱导1、4、7 d的BMP-9组、HGF组的ALB表达荧光素酶A值分别[(5 509.35±213.08),(33 198.14±666.39),(50 815.03±1 730.75)]、[(5 539.25±132.62),(31 400.71±2 622.39),(49 088.28±1 868.03)],较GFP对照组(4 732.49±68.22),(9 407.71±487.84),(20 894.83±1 100.54)明显升高(P<0.05)。结论 BMP-9有诱导小鼠胚胎肝脏干细胞向成熟肝细胞样细胞分化的作用,并且BMP-9对小鼠胚胎肝干细胞的诱导分化作用甚至和传统的肝干细胞诱导分化因子HGF相当。

IGF-1基因转染促进胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞中IGF-1、肌球蛋白、肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白-T的表达

目的观察胰岛素样生长因子-T(IGF-1)基因转染对胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化的心肌细胞中IGF-1、肌球蛋白(myoglobulin)、肌动蛋白(actin)及心肌特异性肌钙蛋白-T(Troponin-T)表达的影响。方法将含有IGF-1基因的真核质粒转染入大鼠胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞中,采用免疫组织化学方法对心肌细胞内上述4种蛋白的表达进行检测。利用HPIAS-2000图像分析系统测定4种蛋白在各组中表达的平均吸光度值和平均阳性面积率。结果IGF-1基因转染后的心肌细胞内上述4种蛋白的表达明显高于未转染的对照组(P<0.05)。结论IGF-1基因转染的心肌细胞较未转染的心肌细胞合成IGF-1、肌球蛋白、肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白-T的能力增强,为IGF-1基因治疗心肌梗死提供了实验依据。

胚胎干细胞与聚3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯共培养细胞补片的初步研究

目的干细胞移植是具有治疗心血管疾病潜力的有效方法,但是细胞移植过程中缺乏有效的载体会大大影响其成活和增殖。聚3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯P(3HB-co-4HB)是一种能够完全降解的,具有良好物理特性的高分子材料。探讨P(3HB-co-4HB)这种三维材料是否适合胚胎干细胞在上面生长,并生成细胞补片。方法复苏小鼠胚胎干细胞,传代培养,消化离心后重悬细胞,用悬滴法形成拟胚体(embryid bodies,EB),将拟胚体与P(3HB-co-4HB)膜共培养;72 h共培养后固定并进行扫描电镜和共聚焦显微镜观察细胞黏附情况,DAPI荧光染色观察细胞在P(3HB-co-4HB)膜上形态。结果胚胎干细胞在培养皿中贴壁生长良好,形态正常;拟胚体同P(3HB-co-4HB)膜共培养72 h后,所有拟胚体都在三维材料表面良好生长,爬膜率为100%;Confocal显微镜和扫描电镜观察到在2 mm的三维膜上,拟胚体生长贴附在生物膜上,细胞形态正常。结论 ESC在P(3HB-co-4HB)表面生长、增殖形成细胞补片。P(3HB-co-4HB)可作为干细胞治疗多种疾病的支架材料之一。

小鼠pOct4-EGFP胚胎干细胞株的构建

以建立p Oct4-EGFP转基因的小鼠胚胎干细胞(ESC)株,为研究ESC分化提供有力的示踪工具为目的,通过电穿孔法转染小鼠ESC,G418和荧光显微镜下挑选和观察所得阳性克隆,检测所得细胞胚胎干细胞特异性标志物AKP、Oct4及SSEA-1的表达,通过拟胚体(EB)诱导体外分化,RT-PCR检测三胚层的分化,通过Oct4免疫荧光观察p Oct4-EGFP ESC的Oct4与GFP的一致性表达,进一步通过诱导p Oct4-EGFP ESC分化观察GFP的表达情况,并用RT-PCR检测Oct4的表达.结果表明,形态学观察可见所得GFP阳性细胞呈克隆样鸟巢状生长,AKP染色呈强阳性,ESC特异性标志Oct4、SSEA-1表达阳性,RT-PCR结果显示p Oct4-EGFP ESC具有三胚层的分化能力.p Oct4-EGFP ESC免疫荧光及细胞分化结果均表明Oct4与GFP的表达一致.本研究成功建立了小鼠p Oct4-EGFP胚胎干细胞株,并可用于体外直观监测ESC分化的阶段性变化.

骨形态发生蛋白-4和-7对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响

目的探究骨形态发生蛋白-4(bone morphogenetic protein-4,BMP-4)和BMP-7对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,h PDLSCs)增殖和成骨分化的影响。方法免疫磁珠法分离培养人PDLSCs,观察细胞生长情况,鉴定细胞表型(CD146、CD44和CD34)和多项分化潜能(成骨、成脂)。将获得的PDLSCs分为BMP-4处理组、BMP-7处理组、BMP-4+BMP-7处理组,分别进行浓度梯度实验(每组均加入浓度梯度为0,5,10,20,40 ng/ml的相应BMP培养基培养192 h)和时间梯度实验(每组加入浓度为40 ng/ml的对应BMP培养基,均以0,48,96,144,192 h的时间梯度进行培养),收集细胞。MTT法和碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测PDLSCs增殖和ALP活性,免疫化学染色分析成骨分化相关基因骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠ,COLⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(collagen typeⅢ,COLⅢ)表达改变。结果分离培养的PDLSCs高表达表面抗原CD146(93%)、CD44(91. 2%),低表达CD34(1. 8%),经成骨、成脂诱导后,分别形成红色矿化结节和橘红色颗粒状脂滴。BMP-4、BMP-7、BMP-4+BMP-7均可呈时间和剂量依赖方式促进PDLSCs增殖和ALP活性表达(P <0. 05),且可增加成骨分化相关基因OCN、BSP、COLⅠ和COLⅢ表达(P <0. 05)。与BMP-4或BMP-7相比,BMP-4+BMP-7联合作用时,PDLSCs增殖和ALP活性更强(P <0. 05),然而OCN、BSP、COLⅠ和COLⅢ表达差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 BMP-4、BMP-7、BMP-4+BMP-7均可促进PDLSCs增殖和成骨分化,BMP-4+BMP-7联合作用时细胞增殖和ALP活性更强,具有协同作用。

骨形态发生蛋白-4对肝干细胞增殖与分化的影响

目的:探讨骨形态发生蛋白-4(BMP-4)对大鼠肝干细胞系WB-F344的增殖及分化的影响。方法:采用50 ng/mL的基因重组BMP-4作用于WB-F344细胞,以BMP-4拮抗剂Noggin(200 ng/mL)阻断BMP-4的作用为对照。在实验不同时间点,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测BMP-4对WB-F344增殖的影响,透射电镜下观察细胞的超微结构特征,RT-PCR检测各试验组中WB-F344细胞可能分化表型特异性分子标志物的mRNA表达。结果:细胞增殖实验显示:在不同作用时间点,BMP-4干预组的细胞吸光值均高于Noggin处理组和空白对照组。透射电镜下可观察到BMP-4干预后的WB-F344细胞具有分化良好的上皮细胞的超微结构特征。RT-PCR显示BMP-4诱导WB-F344分化后,肝干细胞的肝细胞特异性分子标志物的mRNA显著表达。结论:BMP-4可促进肝干细胞WB-F344的增殖,并诱导其向肝细胞定向分化。

胰岛素样生长因子结合蛋白-4对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和神经分化的影响

目的探究胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP4)对骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖和神经分化的影响。方法通过全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,免疫荧光检测IGFBP4在P1、P4、P6、P8和P10 BMSCs的表达。取第4代BMSC细胞,分为单纯培养基组和添加IGFBP4组,用CCK8试剂盒检测单纯培养基组和添加IGFBP 4组吸光度值A450 nm。再将BMSC细胞分为3组:neurocult组、EGF+b FGF组、EGF+b FGF+IGFBP4组,每组连续测定7 d,每天6个平行孔,诱导培养基Neuro Cult培养再分别添加EGF+b FGF和EGF+b FGF+IGFBP4,诱导其向神经祖细胞分化,免疫荧光染色检测Nestin和Sox-2表达,并观察神经球数量和细胞增殖活性。结果成功获得原代大鼠BMSCs,可见CD105、CD44和CD90表达,IGFBP4的表达随培养代数而增加,外源IGFBP4能明显抑制BMSCs的增殖(P<0.05)。经诱导BMSCs形成的神经球样结构表达Nestin和Sox-2,细胞增殖活性升高(P<0.05)。结论 IGFBP4能抑制BMSCs的增殖,促进其向神经祖细胞分化。

酶消化细胞团块法对人胚胎干细胞中OCT4与SOX2蛋白水平的影响

目的·探究酶消化细胞团块法对人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)的八聚体结合转录因子4(octamerbinding protein 4,OCT4)和性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2)蛋白水平的影响及可能的作用机制。方法·(1)利用Western blotting分析检测酶消化细胞团块法[分散酶Dispase或胶原酶Ⅳ(collagenase typeⅣ,COL4)]、酶消化单细胞法(细胞分离溶液Accutase或胰酶)和机械刮取法对hESC中OCT4和SOX2蛋白水平的影响。(2)使用金属离子螯合剂乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸(EGTA)破坏hESC-hESC细胞间连接,然后利用Western blotting检测EGTA单独处理或联合COL4处理对hESC中OCT4与SOX2的蛋白水平的影响。(3)通过基于质谱的定量蛋白质组学技术,检测COL4单独处理或与EGTA联合处理hESC细胞样本中差异表达的磷酸化蛋白和总蛋白,并进行功能富集分析。(4)利用Western blotting和免疫荧光染色检测蛋白酶体抑制剂bortezomib或溶酶体抑制剂氯喹预处理对COL4引起的hESC中OCT4与SOX2蛋白水平下调的影响。(5)利用Western blotting检测COL4对丝切蛋白(cofilin)的影响,以及Rac1小分子抑制剂EHT1864和EHop-016对SOX2蛋白表达水平的影响。结果·(1)COL4和Dispase引起OCT4和SOX2的蛋白水平下降;Accutase、胰酶和机械刮取法未观察到此作用。(2)EGTA处理能够抑制COL4消化hESC引起的OCT4和SOX2蛋白水平下降。(3)蛋白质谱和功能富集分析发现,COL4消化hESC引起的OCT4和SOX2蛋白水平下降可能与肌动蛋白微丝(actin filament,F-actin)、微管和溶酶体相关蛋白的变化有关。(4)氯喹能够抑制COL4消化hESC引起的OCT4和SOX2蛋白水平下降,bortezomib则不能。(5)COL4处理或Rac1抑制剂均能下调cofilin和SOX2的蛋白水平。结论·当使用酶消化细胞团块法处理hESC时,OCT4和SOX2蛋白水平下降,Rac1/cofilin/F-actin信号通路和溶酶体可能参与其中。

多能干细胞关键因子Oct4 RNA结合蛋白的分离与鉴定

目的·分离多能干细胞关键因子Oct4的RNA结合蛋白。方法·培养小鼠胚胎干细胞(R1),从中提取细胞总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增Oct4并转录为m RNA。采用链霉素亲和层析和质谱技术筛选候选RNA结合蛋白,采用RNA免疫沉淀技术鉴定候选RNA结合蛋白。结果·经高效液相色谱-质谱法鉴定和筛选出121个能与Oct4 3'非翻译区(untranslated region,UTR)和Oct45'UTR相结合的RNA结合蛋白,肽段图谱匹配数≥2的有11个。并对其中的7个候选RNA结合蛋白进行了进一步验证,结果显示Oct4可与DSP、SOD1、LMNA、NPM1、PSIP1、NCL和HDGF蛋白发生相互作用,其中HDGF与Oct4结合能力最强。结论·Oct4RNA结合蛋白的鉴定将为Oct4的调控机制提供一定理论依据,为后续其功能研究提供基础。

过表达骨形态发生蛋白-4对小鼠诱导性多能干细胞生物学活性的影响

目的构建过表达骨形态发生蛋白-4(BMP4)基因的慢病毒载体,探讨其过表达后对小鼠诱导性多能干细胞(i PS)生物学活性的影响。方法采用慢病毒转染建立稳定过表达BMP4的i PS细胞株(BMP4过表达组),未作任何转染的细胞为空白组,转染慢病毒阴性对照组的细胞为空载体组。CCK8检测各组细胞增殖活性,碱性磷酸酶(ALP)活性检测细胞分化程度,荧光定量聚合酶链反应检测BMP4、成釉细胞蛋白(AMBN)、细胞角蛋白(CK)14、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨唾液酸蛋白(BSP)及骨细胞特异转录因子Runx2的mRNA表达。结果与空白组及空载体组相比,BMP4过表达组的细胞增殖活性及ALP活性升高(P<0.05),Runx2、AMBN、CK14、DSPP、BSPmRNA的表达增加(P<0.05)。结论 BMP4基因能够促进i PS的牙向分化。

干性相关分子Nanog在食管鳞状细胞癌组织中高表达并促进食管鳞癌细胞的侵袭转移:基于激活TGF-β信号通路

目的 探讨食管鳞状细胞癌(鳞癌)中干性相关分子胚胎干细胞关键因子(Nanog)和侵袭迁移相关分子基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达及其之间的调控关系。方法 运用免疫组织化学技术检测127例食管鳞癌组织和82例癌旁正常组织中Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白的表达情况,分析Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白的表达水平、相关性及与食管鳞癌患者的临床病理参数和预后之间的关系;采用GEO数据库分析Nanog等干性相关分子主要富集通路;应用TIMER在线网站分析食管癌中TβR1和MMP-2及MMP-9的相关性。在体外运用siRNA转染的方式将食管鳞癌细胞株分为正常对照组、Nanog低表达组,采用划痕实验分析其对食管鳞癌细胞迁移的影响,qRT-PCR及Western blotting检测两组之间TβR1、p-Smad2/3、MMP-2/MMP-9的表达情况。结果 Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白在食管鳞癌组织中表达均上调(χ^(2)=70.475,P<0.01;χ^(2)=34.415,P<0.01;χ^(2)=46.605,P<0.01),且呈正相关(r=0.205,P=0.045;r=0.307,P<0.001)。Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白表达水平与食管鳞癌的浸润深度相关(χ^(2)=23.9,P<0.01;χ^(2)=6.029,P<0.05;χ^(2)=11.89,P<0.05),有淋巴结转移的样本中,MMP-2/MMP-9蛋白表达水平高于无淋巴结转移的样本(χ^(2)=10.08,P<0.01;χ^(2)=5.731,P<0.05)。MMP-2/MMP-9蛋白表达与食管鳞癌患者的年龄、性别和肿瘤分化程度无相关性(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白高表达组的食管鳞癌患者生存时间短于低表达组(P<0.001;P=0.004;P=0.017);生物信息学分析显示,Nanog等干性相关分子主要富集在转化生长因子-β(TGF-β)信号通路,MMP-2/MMP-9与TβR1表达在食管癌中呈正相关关系。体外划痕实验结果显示,Nanog促进食管鳞癌细胞系的迁移;qRT-PCR及Western blotting结果显示,敲低Nanog后,TβR1、p-Smad2/3、MMP-2/MMP-9的表达水平明显降低。结论 Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白在食管鳞癌患者组织中高表达且呈正相关,其与食管鳞癌患者的肿瘤浸润深度、淋巴结转移及预后密切相关,且Nanog通过TGF-β信号通路影响MMP-2/MMP-9蛋白的表达。

Oct4蛋白可助胚胎干细胞更新

英国科学家最新研究发现,维持胚胎干细胞多功能性的关键蛋白Oct4在其水平下降时会诱发胚胎干细胞进行自我更新,从而使干细胞数量保持在一个均衡状态。相关研究成果发表在《细胞—干细胞》杂志上。