雄激素受体和胚胎干细胞相关转录因子4在人表皮生长因子受体2过表达型乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨人表皮生长因子受体2（HER-2）过表达型乳腺癌中雄激素受体（AR）、胚胎干细胞相关转录因子4（NANOG）的表达情况,分析其相关性及其与患者临床病理特征的关系.方法 HER-2过表达型乳腺癌143例,采用免疫组织化学方法检测该类患者中AR、NANOG的表达.采用χ^2检验分析AR表达与患者临床病理特征的关系,采用Spearman等级相关分析AR表达和NANOG表达的相关性.结果143例HER-2过表达型乳腺癌患者中,AR阳性率为35.7%（51/143）,AR阳性率与年龄、月经状态无关（均P〉0.05）,与肿瘤最大径、TNM分期及淋巴结转移有关（均P〈0.05）.143例患者中NANOG阳性率为53.1%（76/143）,癌旁正常乳腺组织及良性乳腺病变组织不表达NANOG蛋白.NANOG阳性组的AR阳性率为27.6%（21/76）,NANOG阴性组为44.8%（30/67）,差异有统计学意义（χ^2=4.562,P=0.033）,Spearman等级相关分析提示,AR表达与NANOG表达呈负相关（r=-0.255,P=0.002）.结论 AR、NANOG有可能成为乳腺癌内分泌治疗和分子生物治疗的新靶标.

巨噬细胞迁移抑制因子对人胚胎干细胞存活、增殖和分化的影响

背景:巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)是一种具有多效性作用的细胞因子,可以在不同类型干细胞中自分泌并且能调控细胞的增殖、分化和迁移。课题组前期研究证实人胚胎干细胞自分泌MIF,且在培养液中浓度基本固定。然而,MIF是否参与了人胚胎干细胞的存活、增殖和分化尚不清楚。目的:探究MIF对人胚胎干细胞存活、增殖和分化的作用。方法:(1)培养人胚胎干细胞H9,CCK-8法检测并绘制细胞生长曲线,采用酶联免疫吸附法定量检测培养基中MIF水平。(2)为了明确外源性MIF对人胚胎干细胞存活、增殖的影响,分为:对照组,细胞在干细胞培养基中正常培养;外源性MIF组,在干细胞培养基中分别添加30,100,300 ng/m L的MIF;MIF抑制剂ISO-1组,在干细胞培养基中分别添加2,7,21μmol/L的ISO-1;MIF+ISO-1组,在不同浓度ISO-1组中分别添加100 ng/m L MIF,采用CCK-8法检测上述各组细胞活力。(3)为进一步阐明MIF基因对人胚胎干细胞存活、增殖的影响,采用CRISPRCas9技术构建MIF敲除的H9细胞系,观察建系情况。(4)为了明确高浓度MIF对人胚胎干细胞初步分化是否有影响,在培养基中分别添加100 ng/m L MIF和100 ng/m L CXCR4中和抗体,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)、免疫细胞荧光、蛋白质印迹法(Western blot)检测干细胞自我更新因子(KLF4、c-MYC、NANOG、OCT4、SOX2)及分化转录因子(FOXA2、OTX2)的表达水平。结果与结论:(1)人胚胎干细胞H9的对数生长期为3-6 d,正常生长的情况下自分泌MIF水平约为20 ng/m L,与细胞量无关;(2)与对照组相比,添加不同质量浓度MIF对人胚胎干细胞的增殖无影响(P>0.05);ISO-1明显抑制人胚胎干细胞的增殖,ISO-1浓度越大,抑制越明显(P<0.05);ISO-1中添加MIF可以减少ISO-1的抑制作用(P<0.05);(3)RT-q PCR检测MIF基因敲除约50%后,人胚胎干细胞生长活力显著降低并且无法建系成功;(4)在培养基中添加100 ng/m L外源性MIF,自我更新转录因子KLF4的m RNA、蛋白及荧光表达水平均下降;分化因子FOXA2的m RNA、蛋白及荧光表达水平均上升;(5)在培养基中添加100 ng/m L CXCR4中和抗体,KLF4的m RNA及蛋白表达水平均上升;FOXA2的m RNA及蛋白表达水平均下降,与MIF组表达趋势相反。综上所述,人胚胎干细胞自分泌的MIF是其存活所必需的;培养基中额外添加MIF并不能促进人胚胎干细胞增殖,但可以使自我更新因子KLF4表达下降,转录因子FOXA2表达上升,为下一步探明MIF对人胚胎干细胞分化的影响及机制提供了线索,MIF-CXCR4轴在其中起到一定的调控作用。

肺癌组织中干细胞转录因子Sox2和Oct4表达与微血管密度的相关性

背景:研究已证实干细胞转录因子Sox2和Oct4的高表达与肺癌的发生密切相关。目的:探讨肺癌组织中Sox2和Oct4表达与肿瘤微血管生成、临床病理指标的相关性。方法:应用免疫组织化学染色法检测60例肺癌组织和60例正常组织中Sox2和Oct4的表达,以及CD34标记的微血管密度。分析Sox2,Oct4的表达和微血管密度值与临床病理参数关系。结果与结论:(1)Sox2和Oct4在肺癌组织中阳性表达率为46.67%(28/60)、71.67%(43/60),而在正常肺组织中表达均为阴性,差异有显著性意义(P<0.001);(2)肺癌组织中微血管密度值为16.22±2.18,明显高于正常组织4.36±2.07,差异有显著性意义(P<0.001);(3)Sox2、Oct4和微血管密度均与肿瘤TNM分期、分化程度、脉管浸润、淋巴结转移及肝转移相关(P均<0.05),而与年龄、性别无关(P均>0.05);(4)肺癌组织Sox2和Oct4阳性表达组微血管密度值显著高于阴性组(P<0.001);(5)Spearmen相关分析显示:肺癌组织中Sox2与Oct4无明显相关性(r=2.752,P>0.05);(6)结果表明,Sox2和Oct4表达上调可作为肺癌发生的早期预警事件,并与微血管密度呈正相关,二者可能共同参与了肿瘤微血管的生成、浸润及血行转移。

胚胎干细胞分化为胰腺内分泌细胞的主要转录因子及其相关机制

背景:胰岛内分泌细胞,尤其是分化为胰岛β细胞,为解决糖尿病的胰岛供体短缺提供有效途径。目的:文章将对胚胎干细胞分化为胰腺内分泌细胞过程中参与的主要转录因子及其相关机制进行概述,为治疗糖尿病奠定理论基础。方法:由第一作者于2009-09应用计算机检索PubMed数据库相关文献。检索时间范围:1997/2009。检索关键词为"Embryonicstemcells;Transcriptionfactors;Pancreaticendocrinecells"。纳入与胚胎干细胞分化为胰腺内分泌细胞的主要转录因子及其相关机制研究相关的内容。排除重复文献。阅读标题和摘要进行筛选,共纳入32篇用于综述。结果与结论:胰腺内分泌细胞是胰腺的主要分泌部位,可分泌胰高血糖素、胰岛素、生长抑素、胰多肽和胃促生长素等,这些激素在调节血糖浓度中有着重要作用。胚胎干细胞是一种多潜能干细胞,可分化为胰腺内分泌细胞,在分化过程中受到多种基因和转录因子的调控参与,但目前人们对转录因子的研究仅局限于单个转录因子,对于胰腺发生发育过程中的调节网络研究还需要进一步深入和完善。

转录因子Oct-4、Nanog与胚胎干细胞的自我更新

胚胎干细胞自我更新分子机制是胚胎干细胞研究的前沿及热点课题。除外源性信号如LIF、BMP、Wnt能维持胚胎干细胞的未分化状态外,转录因子Oct-4和Nanog特异性表达于全能胚胎干细胞,并与其它转录因子如Sox2一起构成调控网络,共同调控与胚胎干细胞多能性相关的一系列重要分子,是保持胚胎干细胞自我更新和多潜能性的关键分子。

人脐带间充质干细胞表达胚胎干细胞相关转录因子

背景:Nanog、Oct4和Sox2通过调节胚胎干细胞的基因转录,对其多潜能性和自我更新的能力具有关键性的调控作用,脐带间充质干细胞中这些胚胎干细胞相关转录因子的表达情况如何还不太清楚。目的:研究脐带间充质干细胞中Nanog、Oct4和Sox2等这些胚胎干细胞相关转录因子的表达情况。方法:胶原酶和胰酶消化法培养脐带间充质干细胞;mTeSRTM1体系进行无滋养层培养人胚胎干细胞,定量PCR比较上述两种细胞中Nanog、Oct4和Sox2 mRNA表达量的差异;免疫荧光检测上述两种细胞中Nanog、Oct4和Sox2的表达情况。结果与结论:间充质干细胞表达胚胎干细胞标记Nanog、Oct4和Sox2,但Oct4主要表达在胞浆,且以Oct4B为主。脐带间充质干细胞Nanog、Oct4A和Sox2的表达量明显低于胚胎干细胞,其mRNA表达量分别为胚胎干细胞的20%,0.3%,10%左右。通过了解两种细胞Nanog、Oct4和Sox2的表达差异,可为优化脐带间充质干细胞重编程提供依据,也为进一步研究胚胎干细胞相关转录因子在成体干细胞表达起何种作用提供参考。

人胚胎干细胞定向分化为晶状体小体过程中晶状体发育相关转录因子的动态变化

目的探讨人胚胎干细胞（hESC）定向分化为晶状体小体（LB）过程中晶状体发育相关转录因子的表达特点和规律。方法通过＂三阶段法＂体外诱导hESC定向分化为LB。取hESC（D0）和诱导分化不同时间点的细胞，应用高通量测序技术，通过生物信息学方法分析晶状体发育相关的转录因子及其亚型的表达变化特点和规律。采用Western blot法和免疫荧光染色技术对相关基因在蛋白水平的表达进行检测。结果光学显微镜下，未分化的hESC呈圆形；分化后0～6 d（D0～D6）的细胞更圆且排列更紧密；D7～D18细胞由圆形逐渐延长变为梭形；D19～D32，形成有三维立体结构的透明结构，即LB。荧光定量PCR结果显示，干细胞标记基因的表达在分化过程显著降低，而晶状体特异性基因的表达明显升高。免疫荧光染色结果显示，LB表达晶状体特异性蛋白α-crystallin和β-crystallin。高通量测序聚类分析结果显示，D0与D32之间的转录因子基因表达谱差异最为显著，而D6和D18之间的差异最小。前基板基因DLX3、DLX5、DLX6、HES1、HES4、OTX2和EYA1在分化第一阶段表达显著升高，随后下降；晶状体特异性基因中SOX2蛋白表达逐渐降低，而后升高，而PAX6蛋白的表达随分化时间延长逐渐增加；晶状体分化基因MAB21L1、CMAF、PROX1及PITX3等在分化早期变化不显著，在分化第三阶段表达明显增加。结论体外定向分化的3个阶段依次对应体内晶状体发育的前基板外胚层（PPE）阶段、前晶状体外胚层（PLE）和晶状体外胚层（LE）阶段、晶状体泡（LV）和晶状体细胞分化阶段，提示hESC体外定向分化过程很好地模拟了体内晶状体的胚胎发育过程，为研究晶状体发育和先天性晶状体疾病的分子机制提供了理想的模型。

上调OCT4基因表达对人骨髓间充质干细胞的iPSC相关转录因子表达的影响

目的:探讨OCT4基因过表达对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow derived mesenchymal stem cells,h BMMSC)i PSC相关转录因子(c MYC、KLF4、LIN28、NANOG、SOX2)表达的影响,为从骨髓造血微环境的角度探索血液系统疾病如白血病、再生障碍性贫血等的发生机制提供实验依据。方法:首先构建重组质粒pcDNA3.1-OCT4表达载体,通过脂质体转染的方式将上述表达质粒导入第3-4代hBMMSC,分别通过PCR及流式细胞术对OCT4 mRNA和OCT4蛋白的过表达进行验证,然后经G418抗性加压下有限稀释和连续亚克隆的方法筛选出稳定表达OCT4的细胞(hBMMSC-OCT4),分别通过RT-PCR和流式细胞术测定iPSC相关转录因子(cMYC、KLF4、LIN28、NANOG、SOX2)mRNA和蛋白的表达,观察OCT4过表达对iPSC相关转录因子表达的影响。结果:成功构建了携带OCT4的重组表达质粒pcDNA3.1-OCT4;通过有限稀释和连续亚克隆的方法筛选出稳定表达OCT4的细胞(hBMMSC-OCT4);流式细胞术检测结果显示,OCT4的平均表达阳性率从未转染时的(3.03±1.49)%增加至稳定表达时的(95.46±1.40)%;RT-PCR证实了OCT4基因的高表达;Real-time PCR结果显示,与未转染的对照组MSC相比,OCT4 mRNA的相对表达量从瞬时转染时的2.75倍增加至稳定转染时的6.23倍,OCT4蛋白的平均表达阳性率从瞬时转染时的(36.36±0.28)%(d 4)升高至稳定转染时的(96.25±1.38)%(d 96)。hBMMSC-OCT4细胞高水平表达干性转录因子(cMYC、KLF4、LIN28、NANOG、SOX2),其平均表达量分别从未转染时的(1.12±0.47)%、(0.84±0.30)%、(2.14±0.79)%、(0.63±0.37)%和(14.34±2.44)%增加至(80.65±4.75)%、(73.03±4.70)%、(68.08±3.05)%、(39.39±1.85)%和(91.45±4.56)%,与RT-PCR结果一致,且NANOG和SOX2的表达水平与OCT4的平均表达量呈正相关(OCT4 vs NANOG:r=0.7802,OCT4vs SOX2:r=0.4981;NANOG vs SOX2:r=0.7426)。结论:获得了稳定表达OCT4的细胞(hBMMSC-OCT4),过表达OCT4可上调hBMMSC干性转录因子(cMYC、KLF4、LIN28、NANOG、SOX2)的表达。

小鼠胚胎干细胞在血管内皮生长因子作用下造血相关基因表达的研究

目的 研究小鼠胚胎干细胞系ES D3在血管内皮生长因子 (VEGF)的作用下表达造血相关基因的情况。方法 先将ES D3形成拟胚体 ,将拟胚体细胞转入含不同浓度VEGF和VEGF +干细胞因子 (SCF)培养基中。分为VEGF 2 0ng/ml组、VEGF 10ng/ml组、VEGF 5ng/ml组、VEGF 5ng/ml+SCF组、VEGF 10ng/ml+SCF组、VEGF 2 0ng/ml+SCF组 ;同时设不加因子的自发分化对照组。采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测各组造血转录因子GATA 2和早期造血细胞阶段表达的基因c kit和 β H1表达 ,并进行定量分析。 结果 经 1周诱导培养 ,各实验组均可检测GATA 2表达 ,其中VEGF 2 0ng/ml组和VEGF +SCF组表达较强。未分化胚胎干细胞不表达c kit和 β H1mRNA ,拟胚体细胞开始表达c kit,实验组以VEGF 10ng/ml+SCF组和VEGF 2 0ng/ml +SCF组表达最强。VEGF 10ng/ml组和VEGF 5ng/ml组 ,β H1的表达分别为阴性和弱阳性 ,其他各组可检测到阳性条带 ,以VEGF 10ng/ml +SCF组表达最强 ;而自发分化组未检测到上述mRNA的表达。结论 对造血转录因子和早期造血细胞阶段表达基因的检测可进一步证实胚胎干细胞的成血分化 ,VEGF或VEGF

干细胞转录因子Sox2、Oct4在肺癌组织中表达及与肿瘤微淋巴管的关系

目的观察干细胞转录因子Sox2、Oct4在肺癌组织中的表达变化,并探讨二者与肿瘤微淋巴管的关系。方法用免疫组化法检测60例肺癌组织及其相应正常肺组织中Sox2、Oct4蛋白表达、D-240标记的微淋巴管密度(LMVD)。结果肺癌组织中Sox2、Oct4蛋白阳性表达率、LMVD与正常肺组织比较,P均<0.05。Sox2、Oct4蛋白阳性表达及LMVD均与肿瘤分化程度、TNM分期、脉管浸润、淋巴结转移、肝转移有关(P均<0.05),此外Sox2、Oct4蛋白阳性表达还与肿瘤病理类型有关(P均<0.05)。肺癌组织中Sox2、Oct4蛋白阳性表达者LMVD与阴性者比较,P均<0.05。结论 Sox2、Oct4在肺癌组织中呈现高表达,二者可能共同参与了肺癌组织微淋巴管的生成、浸润及淋巴道转移。

免疫性不孕症患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞、叉头状转录因子3、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4的水平研究

目的探讨外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)、叉头状转录因子3(Foxp3)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)与免疫性不孕的关系,为免疫性不孕的诊断和治疗提供依据。方法用流式细胞仪检测60例免疫性不孕妇女(研究组)和60例正常妊娠的育龄妇女(对照组)外周血中CD4+CD25+Treg、Foxp3、CTLA-4水平,并对检测结果进行统计学分析。结果研究组外周血中CD4+CD25+Treg、Foxp3、CTLA-4水平值分别为:(3.66±0.59)%、(2.97±0.63)%、(3.17±0.36)%,均低于对照组[(8.17±0.63)%、(7.17±0.53)%、(8.21±0.56)%],两组比较差异均有高度统计学意义(均P<0.01)。结论免疫性不孕症患者外周血中CD4+CD25+Treg、Foxp3、CTLA-4的表达水平比正常妊娠的育龄妇女少,CD4+CD25+Treg、Foxp3、CTLA-4表达的降低可能是免疫性不孕的重要原因。

T细胞转录因子-4在大鼠脑缺血再灌注海马齿状回神经干细胞中的表达

目的:检测T细胞转录因子-4(Tcf-4)在大鼠脑缺血再灌注海马组织神经干细胞中的表达及其变化。探讨影响神经干细胞早期增殖分化的分子调控机制。方法:采用大脑中动脉栓塞(MCAO)制作大鼠脑缺血再灌注模型。用免疫组织化学SP法及RT-PCR法检测海马神经干细胞BrdU、Tcf-4中的表达。结果:随着脑缺血再灌注第3日齿状回神经元BrdU阳性细胞明显增多,第7日达高峰,然后逐渐减少。Tcf-4 mRNA反应产物随脑缺血再灌注时间延长逐渐增多,第21日表达最强,以后表达逐渐减少。结论:Tcf-4时间依赖性表达与神经干细胞增殖分化进程相吻合,说明其在神经干细胞晚期分化中起重要调控作用。

细胞穿膜肽TAT与小鼠干细胞转录因子Oct4融合表达及纯化

将TAT-Oct4目的基因插入pET28a表达载体,构建重组表达质粒pET28a-TAT-Oct4,形成大肠杆菌重组表达体系。融合蛋白TAT-Oct4在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,表达产物经纯化后,纯度可达90%以上。通过尿素梯度透析复性,TAT-Oct4平均复性收率为8.8%。细胞免疫荧光技术分析表明,TAT-Oct4融合蛋白可穿透近100%细胞的细胞膜,其进膜后主要分布于细胞核内。建立了具有活性的TAT-Oct4融合蛋白生物制备方法,为细胞重编程提供了一种有效的研究材料,并可为其他用于细胞重编程的干细胞转录因子设计提供实用的方法学。

干细胞转录因子OCT4在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的探讨干细胞转录因子OCT4在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化EnVision两步法及Western blot法检测60例结直肠癌手术切除组织及癌旁正常组织中OCT4的表达,分析其与结直肠癌临床病理特征的关系,运用Kaplan-Meier法分析OCT4表达与结直肠癌患者总生存率的关系。结果结直肠癌组织中OCT4的阳性率为80.00%,高于癌旁正常组织(16.67%),差异有统计学意义(P<0.05),OCT4阳性与结直肠癌的淋巴结转移及Dukes分期有关(P<0.05),与其他临床病理特征尚无相关性(P>0.05)。Western blot实验显示:结直肠癌组织中OCT4蛋白的相对表达量为7.70±0.07,高于癌旁正常组织(0.70±0.07),差异有统计学意义(P<0.05);OCT4阳性与结直肠癌的淋巴结转移及Dukes分期有关(P<0.05),与其他临床病理特征无相关性(P>0.05)。生存分析显示:OCT4阳性患者的总生存期低于阴性患者。结论 OCT4在结直肠癌中过表达,可作为预测结直肠癌患者预后的潜在分子标志物。

骨髓间充质干细胞诱导成骨细胞模型中活化转录因子4基因的表达

背景:研究发现活化转录因子4为近调控成骨细胞分化和功能的活化因子,在成骨细胞分化过程中起着至关重要的作用。目的:探索SD大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导过程中活化转录因子4基因的表达变化及其意义。方法:以全骨髓贴壁法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,传代至第3代细胞时加入成骨诱导剂,在诱导的第0,1,4,7,10,13,16,19天分别采用PT-PCR,Western blot动态监测活化转录因子4基因及蛋白的表达变化,以未进行成骨诱导细胞做对照。结果与结论:RT-PCR结果显示,活化转录因子4 mRNA的表达随着细胞成骨分化程度加剧而升高,16 d达到峰值。Western blot分析结果显示,活化转录因子4蛋白表达量随着骨髓间充质干细胞骨化程度加剧,表达水平亦呈上升趋势,于16 d达到高峰,19 d维持在高水平状态。实验组各时间点活化转录因子4 mRNA和活化转录因子4蛋白表达与对照组相比差异有均有显著性意义(P<0.05)。结果表明诱导成骨细胞中活化转录因子4表达增强,提示活化转录因子4的增强与骨髓间充质干细胞成骨分化能力呈正相关。

血管内皮细胞对联合培养体系中骨髓间充质干细胞侏儒症相关转录因子表达及成骨分化的影响

背景:血管内皮细胞能够促进骨髓间充质干细胞向成骨方向转变,为干细胞的成骨分化提供营养支持。目的:观察人脐静脉血管内皮细胞在联合培养体系中对人骨髓间充质干细胞形态、生长、细胞分化及其侏儒相关转录因子基因表达的影响。方法:在联合培养装置中,取第3代人骨髓间充质干细胞与第3代人脐静脉血管内皮细胞联合培养(实验组),设立单纯骨髓间充质干细胞培养组(对照组),于培养第4,6,10天观察骨髓间充质干细胞形态变化,细胞碱性磷酸酶活性及侏儒相关转录因子基因表达情况。结果与结论:与对照组比较,实验组中细胞形态呈多样化,后期部分细胞之间出现了连接及融合,成骨分化明显。对照组各个时间点细胞碱性磷酸酶活性无明显变化,实验组各时间点碱性磷酸酶活性高于对照组(P<0.05),且实验组第6,8天细胞侏儒相关转录因子基因表达量为对照组4倍左右(P<0.01)。表明在联合培养体系中,静脉内皮细胞能促进骨髓间充质干细胞侏儒相关转录因子基因的表达,并诱导其向成骨细胞方向分化。

转录因子Oct-4和端粒酶在人胚胎生殖细胞的表达

目的体外培养人胚胎生殖细胞（EGC），通过检测培养的细胞中转录因子Oct-4、端粒酶的表达，鉴定EGC。方法取5～10周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜，进行组织块体外培养，采用免疫细胞化学检测Oct-4、端粒酶表达。结果组织块体外培养得到的细胞，经免疫细胞化学法显示的单个细胞或细胞集落，均阳性表达转录因子Oct-4、端粒酶。结论组织块体外培养所获得细胞来源于原始生殖细胞（PGCs），为未分化的EGC。

过表达少突胶质细胞转录因子2加速小鼠胚胎干细胞分化为神经元-胶质细胞抗原2阳性少突胶质祖细胞样细胞

目的：观察少突胶质细胞转录因子2（O1ig2）过表达对小鼠胚胎干细胞（mESCs）向少突胶质祖细胞（OPCs）分化的影响.方法：将体外培养的mESCs分为空载体感染和Olig2-GFP慢病毒感染组,免疫荧光显色检测Olig2的表达.感染后9、14、21 d和28 d神经元-胶质细胞抗原2（NG2）免疫荧光显色观察mESCs向OPCs的分化情况.结果：Olig2-GFP慢病毒感染组mESCs经筛选后均为Olig2＋/GFP＋,而空载体感染组mESCs无Olig2表达.感染后9d,两组细胞均无NG2表达;感染后14d,Olig2-GFP慢病毒感染组NG2高表达,空载体感染组仅有少数细胞为NG2弱阳性;感染后21d与14 d相比,两组均无明显变化;感染后28d,两组细胞均有较强的NG2表达,组间无差异.结论：过表达Olig2能够加速mESCs分化为NG2＋的OPCs样细胞.

干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱癌组织的表达及其对5637细胞生物学特性调节

目的研究干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱癌组织中的表达及对5 637细胞生物学的影响,为临床治疗提供依据。方法选取2015年1月至2016年1月74例膀胱癌组织、32例癌旁组织以及24例正常膀胱癌组织病理标本。采用免疫组化法检测标本中的Oct4表达;体外培养膀胱肿瘤细胞,采用MTT法检测siRNA敲除Oct4后对与细胞增殖作用的影响;采用细胞划痕及Transwell试验测定细胞迁移、侵袭能力的影响;分析干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱癌组织中的表达及对5 637细胞生物学的影响。结果人膀胱癌组织中12例Oct4蛋白检测阴性,62例Oct4蛋白检测阳性,阳性率为83.78%,显著高于膀胱癌组织的21.87%(P<0.05);正常组织中Oct4蛋白阳性率为16.67%,三种不同细胞组织Oct4蛋白阳性率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。膀胱癌组织Oct4蛋白表达在不同临床分期中无统计学意义(P>0.05);膀胱癌组织Oct4蛋白表达在不同病理分级、淋巴结转移中差异具有统计学意义(P<0.05);病理分级越高、淋巴结转移,Oct4蛋白表达越高;免疫组化结果显示:膀胱癌组织中Oct4蛋白表达阳性率为83.78%,膀胱癌旁组织Oct4蛋白表达阳性率为21.87%;正常组织Oct4蛋白表达阳性率为16.67%。三种不同的细胞进行划痕试验2 h后进行观察:结果显示:Oct4-siRNA转染后细胞迁移显著减弱,而其他细胞大量迁入划痕区域。结论 Oct4的表达与人膀胱癌的分级、淋巴结转移关系密切,但是不同临床分期差异不具有统计学意义;Oct4高表达在膀胱癌的发生、发生中发挥重要作用,能抑制膀胱癌细胞系Oct4基因表达,抑制肿瘤细胞增殖,细胞细胞凋亡,具有较高的临床应用价值。

转录因子GATA4和甲胎蛋白在小鼠胎肝和肝癌细胞中的表达对比及相关性

目的:探讨转录因子GATA4和甲胎蛋白(AFP)在小鼠胎肝和肝癌细胞中的表达及二者相关性。方法:获取小鼠孕10.5d、孕13.5d、孕15.5d、孕17.5d、出生后0.5d的肝组织,半定量RT-PCR检测GATA4和AFP mRNA的表达,并以成鼠肝、正常肝细胞株和肝癌细胞株作为对照。将小鼠GATA4真核表达载体成功转染正常肝细胞并鉴定,将多柔比星作用肝癌细胞,然后均进行以下指标监测:半定量RT-PCR法检测GATA4、AFP和胎蛋白转录因子(FTF)mRNA的表达,免疫印迹法检测GATA4和AFP蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清AFP的含量。结果:随着胎肝细胞分化的不断成熟,GATA4和AFP的表达逐渐下降,至出生后0.5d已降至成肝水平。GATA4、FTF和AFP在正常肝细胞不表达,而在肝癌细胞高表达;正常肝细胞转染GATA4后,FTF和AFP表达显著增高,其细胞上清液AFP含量亦明显增高。多柔比星作用肝癌细胞后,6h内GATA4的表达首先降低;随着时间延长(≥12h),FTF和AFP表达逐渐降低,细胞上清液AFP含量亦逐渐降低,差别具有显著的统计学意义。结论:GATA4在胎肝组织和肝癌细胞中高表达并可能对AFP也有一定的上调作用。