利用胚胎干细胞试验模型评价矮壮素的发育毒性

目的:利用胚胎干细胞试验模型评价矮壮素的发育毒性。方法:以DMSO为阴性对照,使用不同剂量(7.8125、15.625、31.25、62.5、125、250、500、1 000μg/m L)的矮壮素染毒小鼠胚胎干细胞D3(ES-D3)和3T3成纤维细胞,观察矮壮素对ES-D3细胞向心肌细胞分化的影响,以及对ES-D3和3T3细胞的细胞毒性,在此基础上,根据发育毒性判别公式对矮壮素致畸性进行判定。提取ES-D3分化抑制试验中的拟胚体总RNA,进行real-time PCR,在基因水平检测矮壮素对ES-D3向各胚层分化的影响。结果:1 000μg/m L矮壮素染毒可明显促进体外培养ES-D3、3T3细胞增殖;250μg/m L的矮壮素作用下,观察到具有心肌细胞收缩的拟胚体数仅占接种拟胚体总数的69.4%;1 000μg/m L矮壮素能够影响ES-D3向心肌细胞分化的基因标志物(Nkx2.5,α-MHC)的表达。结论:无法利用判别公式对矮壮素进行发育毒性评价;矮壮素在不引起3T3、ES-D3细胞毒性的水平下,影响ES-D3向心肌细胞的分化,有产生胚胎毒性的可能。

胚胎干细胞试验预测胚胎毒性替代方法进展

小鼠胚胎干细胞试验(EST)是通过ECVAM正式验证的胚胎和发育毒性的动物试验替代方法。在新技术的推动下,多项优化的EST方法通过基因转染、利用人来源的干细胞、增加检测通量、组合检测终点、量化检测指标等方式,提高了EST方法预测胚胎毒性的科学相关性和检测效率。在整合测试策略的原则之下,经过大规模化学物质的前验证和标准化试验,新的EST方法可单独或作为组合试验的一部分可以应用于先导药物的研发和化学品的胚胎毒性预测及机制研究。

应用胚胎干细胞试验模型对碱性成纤维细胞生长因子发育毒性的初步评价

目的利用小鼠胚胎干细胞试验(EST)模型,初步评价bFGF的发育毒性。方法体外培养小鼠胚胎干细胞(ESC),通过形态学观察、碱性磷酸酶染色和RT-PCR方法进行ESC未分化鉴定;MTT法检测不同浓度bFGF对ESC和3T3细胞的毒性,RT-PCR半定量分析法检测bFGF对未分化基因Sox-2表达的影响。结果 bFGF对ESC和3T3的半数抑制浓度和ESC的半数抑制分化浓度分别为IC50ESC=15.2 mg.L-1,IC50 3T3=24.2 mg.L-1,ID50 ESC=1.7 mg.L-1。结论 bFGF发育毒性的判定为弱胚胎毒性。

胚胎干细胞试验及其在毒理学发育毒性安全性评价中的应用

为解决胚胎毒性体内筛选方法需要大量的动物及人力、耗时、耗力的问题,介绍了胚胎干细胞试验及其在毒理学发育毒性安全性评价中的应用。胚胎干细胞试验可同时检测不同受试物对细胞增殖和分化的影响,通过受试物对细胞及个体的发育毒性和致畸能力的判断,将受试物分成3类,即无胚胎毒性、弱胚胎毒性和强胚胎毒性,该试验方法大大提高了体外替代实验的预测符合率。干细胞试验方法有望成为研究受试物胚胎毒性的体外替代实验模型。

胚胎干细胞试验评价化妆品化合物的胚胎毒性

欧盟化妆品法规（第7次修正）提出了替代化妆品动物实验的时问表，这一法规促使化妆品成分胚胎毒性体外测试体外方法获得认可。胚胎干细胞试验（EST）是目前经欧洲替代方法验证中心（ECVAM）验证的最理想的预测化合物胚胎毒性的体外方法。本研究选择化妆品相关的6种化合物，氢醌、丁子香酚、肽酸酯、三氧化二锑（III）、硝酸钕（III）和三聚氰胺，用EST法研究其潜在胚胎毒性，以5-氟尿嘧啶和青霉素G分别为阳性和阴性对照。通过计算三个终点IC503T3、IC50ES和ID50，由预测模型（PM）判断胚胎毒性。氢醌、丁子香酚和三氧化二锑（III）是强胚胎毒性物，肽酸酯、硝酸钕（III）和三聚氰胺是弱胚胎毒性物。本研究结果为EST方法应用到化妆品领域以外的领域提供有用的参考。

人类胚胎干细胞临床试验责任伦理探究

目前,人类胚胎干细胞的研究已经进入临床试验阶段,对医疗事业的发展有着不可替代的重要意义。但不可避免地引发了一系列伦理问题,包括对胚胎和受试者的尊重性问题,临床试验的安全性问题以及克隆问题。究其主要原因,是与试验相关的责任主体的责任感以及责任认识缺失有关。责任伦理作为科技时代的伦理观,为解决上述伦理问题提供了新的维度和伦理指导,因此有必要站在责任伦理的视角,明确各方主体的责任,通过自律和他律落实主体责任,为人类胚胎干细胞的研究和相关法律完善提供借鉴。

美国施行全球首例人类胚胎干细胞临床试验

综合媒体报道，美国杰龙生物医药公司（Geron Corporation）10月11日宣布，佐治亚州亚特兰大“牧者中心”医院已于10月8日利用该公司培植的GRNOPCI人类胚胎干细胞．展开全球首宗人类胚胎干细胞治疗的人体临床试验。不过，据报道，亚特兰大这所脊髓和脑损伤康复医院“牧者中心”医院发言人以维护患者隐私为由．

美国Geron公司实施胚胎干细胞治疗脊髓损伤的临床试验

首例利用来自胚胎干细胞（ES）的细胞的临床试验终于开始了。1998年．人类首次制造出人胚胎干细胞．其作为未来划时代的治疗法为人们所期待，但是过了12年，其身影才终于来到了临床试验的入口处。在这12年的时间里，来自成体干细胞的细胞在临床应用的进展、与ES细胞基本上同质的人工多能干细胞（iPS）的出现等，使干细胞所处的环境状况发生了很大的变化。

胚胎干细胞试验在生殖毒性替代试验中的研究进展

药物生殖毒性评估是药物安全性评价中必不可少的部分。传统生殖毒性试验周期长,动物使用量大,投入资金多,随着“减少、优化、替代(3R)”原则的实施,胚胎干细胞试验(EST)逐渐成为研究和应用的热点。EST是经欧洲替代方法验证中心验证并推荐的生殖毒性全体外替代试验,可在药物研发早期阶段通过全体外检测和快速高通量检测药物的胚胎毒性类型。近年来,为解决EST在体外替代试验中遇到的问题,研究者们对其进行了优化和改进,包括增加化合物验证数量及种类,代谢体系及体内外浓度的选择,增加除心脏以外的分化检测终点(如神经、成骨和血管内皮等);增加定量检测方法,从基因和蛋白水平对分化情况进行分析(如流式细胞荧光分选技术等);增加EST衍生模型(如ReProGlo模型和BeWo运输模型等)以提高EST预测可靠性、模拟代谢活化过程、考虑体内外浓度一致性、对靶器官的毒性、增加定量分析终点。但目前有些检测方法还未明确其判断标准,有待进一步研究。EST更新及优化后,其评价范围不断扩大,风险评估准确性增加,有可能实现自动化、快速且高通量筛选潜在化合物。

美国启动胚胎干细胞治疗临床试验

据中国军网2010年10月12日援引新华社华盛顿2010年10月11日电，美国杰龙生物医药公司10月11日宣布，该公司已经招募到一名急性脊髓损伤患者参与胚胎干细胞疗法临床试验。这是美国批准实施的首例人类胚胎干细胞疗法临床试验。杰龙公司的试验完全由私人资助。

美国批准全球首宗胚胎干细胞试治疗人体试验

美国食品及药物管理局（FDA）近日批准了全球首宗胚胎干细胞试治疗人体试验，医治脊髓受伤导致瘫痪的病人，这一试验被形容为生物科技的里程碑。

丁香酚胚胎毒性评价:应用胚胎干细胞的实验模型

背景:丁香酚在医学及食品领域的应用越来越广泛,其药理学作用也不断被研究和发现。但是,对其毒性的研究尚未建立完整的数据库,特别是发育毒性及致畸性的安全性评价亟需完善。目的:建立胚胎干细胞实验模型的基础上,应用胚胎干细胞实验模型初步评价丁香酚的胚胎毒性。方法:体外培养小鼠成纤维细胞3T3和小鼠胚胎干细胞E14TG2a,MTT法检测阳性对照5-氟尿嘧啶、阴性对照青霉素G和受试物丁香酚对3T3细胞和E14TG2a细胞的细胞毒性,计算3种化合物对E14TG2a细胞和3T3细胞的半数生长抑制浓度值;采用悬滴-悬浮-贴壁法体外诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化,根据浓度-反应曲线计算3种化合物对E14TG2a细胞的半数分化抑制浓度值。利用胚胎毒性预测模型预测丁香酚的胚胎毒性。结果与结论:丁香酚对3T3细胞和E14TG2a细胞的增殖均有抑制作用,其半数生长抑制浓度值分别为(3.613±0.192)和(1.799±0.131)mg/L。丁香酚对E14TG2a细胞的心肌分化亦有抑制作用,其半数分化抑制浓度值为(3.501±0.158)mg/L。根据胚胎干细胞实验模型预测模型计算得出丁香酚为强胚胎毒性化合物。这为进一步评价丁香酚的安全性提供了研究数据。

基于人胚胎干细胞的药物毒性测试替代法研究进展

传统的药物研发及安全性评价对实验动物的需求量大,费用高,周期长,种属差异性问题难以克服。人胚胎干细胞(h ESC)可自我更新及定向分化为多种类型的细胞,逐渐成为毒性测试体外替代法的新工具。h ESC的体外替代模型预测受试物对人体各种靶器官的毒性及毒作用机制,如生殖毒性测试模型、神经发育毒性测试模型及体外代谢模型等,结合基因组学、蛋白质组学和代谢组学等组学技术快速高效地分析多条代谢通路,寻找潜在的毒性生物标志物。在药物毒理学研究中具有广泛的应用前景。

基于人胚胎干细胞健康安全评价新载体的构建

常用的外源性化合物多达6至7万种，均可通过各种途径进入体内损害机体，危害人类健康。现用的国际标准中，健康安全体外评价载体仍采用微生物、动物及人类永生化细胞、肿瘤细胞或原代培养细胞，但微生物和动物不能完全反映人类的生物学特征，肿瘤细胞不是正常健康的细胞，而原代培养细胞非单一来源细胞，无法进行标准化，因此，急需建立新的生物安全性评价的体外模型。

欧洲首次批准人类胚胎干细胞临床试验

总部设于美国马萨诸塞州的先进细胞技术公司22日宣布，获得英国药品与保健品管理局和基因治疗顾问委员会批准，今后可利用人类胚胎干细胞就青少年失明展开临床试验。这是欧洲范围内首次批准人类胚胎干细胞临床试验。

干细胞的临床应用:缺少大动物模型和人体试验

背景:近年来干细胞的基础和临床应用研究取得了一系列突破性进展。细胞替代疗法可以用来治疗传统治疗方案难以治愈的疾病,具有不可估量的临床应用价值。目的:综述干细胞在临床应用研究中的新进展。方法:使用计算机检索Pubmed数据库及中国学术期刊全文数据库(CNKI)2006至2014年有关干细胞临床应用的研究文献。英文检索词为"stem cells,induced pluripotent stem cells,hematopoietic stem cells,bone marrow mesenchymal stem cells,stem cell transplantation,neurodegenerative diseases,myocardial infarction,intestinal stem cells,inflammatory bowel disease,acute lung failure",中文检索词为"干细胞,诱导性多能干细胞,造血干细胞,骨髓间充质干细胞,干细胞移植,神经退行性疾病,心肌梗死,肠道干细胞,炎症性肠病,急性肺衰竭"。排除陈旧性、与研究目的无关和内容重复的文献,收集到47篇相关文献纳入综述。结果与结论:干细胞是一类具有自我更新能力的多向分化潜能细胞,根据干细胞的分化阶段,其可以分为胚胎干细胞和成体干细胞,也可以通过导入特定的转录因子将分化的体细胞重编程为诱导性多能干细胞。诱导性多能干细胞具备与胚胎干细胞类似的功能,是一种特殊的干细胞。在干细胞应用过程中,应重视可能出现问题的解决,例如社会伦理问题、干细胞的获取与存活、特异性诱导分化等,积极推动干细胞的应用。今后应多着眼于转化医学研究,建立大动物模型,填补人体试验和动物实验之间的证据,同时更多标志性的原始创新性工作急待开展。

干细胞及干细胞治疗糖尿病:中国临床试验注册信息分析

背景:中国临床试验注册中心通过公布研究设计信息、国际统一注册号、审核研究设计、中心随机分配以保障注册临床试验的质量。目的:分析中国临床试验注册中心关于干细胞以及干细胞治疗糖尿病研究的现状。方法:检索2008至2014年中国临床试验注册中心关于干细胞研究的临床试验注册项目,从治疗疾病种类、研究类型、注册时间、注册单位、分布地区等方面对资料进行整理,并对干细胞治疗糖尿病临床试验注册项目进行深入分析。结果与结论:关于干细胞研究的项目共有82项,以治疗血液病(32/39.0%)、神经系统疾病(20/24.4%)、肝病(9/11.0%)、糖尿病(5/6.1%)的试验项目为主,注册时间集中在2012年,主要研究单位是中国武装警察部队总医院、北京大学人民医院和浙江大学医学院附属第一医院,地区分布主要在北京和浙江。关于干细胞治疗糖尿病研究的试验项目有5项,分别为中国武装警察部队总医院的脐带间充质干细胞移植治疗糖尿病研究、新桥医院的间充质干细胞移植治疗糖尿病的有效性及安全性和解放军第452医院自体骨髓干细胞移植治疗糖尿病的临床研究。中国临床试验注册中心关于干细胞以及干细胞治疗糖尿病研究的项目数量不多,提高临床试验注册数量和规范是未来发展的方向。

基于人胚胎干细胞健康安全评价体系的构建

食品、药品、医疗器械和材料、生物制剂以及环境的质量和健康安全是政府和民众十分关注的热点问题。目前国际标准的健康安全评价检测方法以微生物、动物及其细胞作为载体,不能准确反映人类的生物学特征,预测人体心、肝等靶器官毒性及发育毒性的准确率偏低,在技术层面严重制约了人类健康安全的评价和监控。如何建立准确反映人类生物学特征的健康安全评价体系是关系国民健康安全的重大科学问题^（[1]）。

大鼠心肌条件培养基对ICR小鼠胚胎干细胞分离克隆的影响

采用大鼠心肌条件培养基(RH CM)培养ICR小鼠的桑椹胚和囊胚,发现由囊胚分离的ES细胞传代后ES集落的出现率显著高于桑椹胚(P<0.05),囊胚更适合作为ES细胞分离克隆的材料。以RH CM为培养基的试验组ES细胞传代的平均时间间隔为38 h,对照组传代的时间间隔平均为78 h,两者差异显著(P<0.05)。表明RH CM能够促进ES细胞贴壁增殖和ES集落的形成,有效地维持ES细胞未分化状态。试验中设计的3 种培养条件对原代ES集落的形成影响不显著,但对传代后的ES集落的形成和传代的代次有显著差异。其中以MEF作饲养层,添加RH CM培养基的效果最好。