Wnt信号通路关键基因β-catenin在RA诱导的P19胚胎性癌细胞神经分化过程中的亚细胞分布

Wnt信号参与了小鼠早期神经发育。我们以往的实验结果表明，Wnt信号可引起P19胚胎性癌细胞的神经分化。为了进一步了解Wnt信号在P19神经分化过程中行使功能的时间，我们以Wnt信号通路关键成员β-catenin是否定位在细胞核中作为考察Wnt信号是否能传递到细胞核内调控下游基因活性的指标，分析了Wnt信号在P19细胞神经分化过程中的活性。我们观察到，β-catenin在RA诱导的P19细胞分化的第2到第4天存在核定位。在此期间，Wnt下游基因En－2的表达量也有明显增加。因此，在P19神经分化过程中，Wnt活性可能发生在这一阶段。同时，在神经突的形成、伸长及神经纤维集束过程中，β-catenin在神经突起及神经纤维上也存在特异性分布，提示在此过程中β-atenin可能也行使了功能。

维生素A酸诱导小鼠胚胎性癌细胞分化过程中核仁形成区的变化

采用一步银染技术,发现维生素A酸诱导小鼠F_9,F_(9-1)胚胎性癌细胞分化过程中,核仁形成区的数目有变化。F_9细胞Ag-NORs数目的增多发生在72-96小时;而F9-1细胞则发生在96小时。设计的撤药试验结果证明,分裂中期银染NOR的变化,反映的是前一个间期NOR的活性。

环六亚甲基双乙酰胺体外诱导胚胎性癌B7—2细胞分化对MS3基因表达的影响

MScDNA是多潜能胚胎性癌细胞专一的顺序,HMBA可诱导B 7—2细胞分化为原始内胚层样细胞。用定量细胞质RNA点印迹杂交法分析了MS基因在小鼠胚胎性癌B 7—2细胞经HMBA诱导前和诱导后的表达水平。小鼠成纤维细胞NIH3T3被用作阴性对照,MS基因的表达水平在B 7—2细胞经HMBA诱导5天后下降了86%。鉴于HMBA对B 7—2细胞的诱导效率约为90%,这一实验结果表明在HMBA诱导分化中,MS基因的表达被抑制。

低氧促进P19细胞向多巴胺能神经元分化

目的观察低氧对P19细胞神经分化的影响,针对其向多巴胺能神经元分化的现象及机制进行探讨。方法实验分为常氧组(20%O2)和低氧组(3%O2,每天低氧10 m in)。对诱导分化的神经元采用免疫细胞化学染色方法鉴定。用流式细胞术及W estern b lot检测多巴胺能神经元,高效液相色谱法测定分泌的多巴胺。用RT-PCR技术检测低氧诱导因子HIF-1αmRNA水平。结果①在分化的P19细胞中,低氧组神经元含量高于常氧组(P<0.05),低氧组多巴胺能神经元含量及所分泌的多巴胺显著高于常氧组(P<0.001);②低氧组诱导期HIF-1αmRNA表达水平明显高于常氧组。结论低氧可以促进P19细胞的神经分化,尤其促进P19细胞向多巴胺能神经元分化,HIF-1α可能在其中起了一定作用。